大黃黃連瀉心湯、理中丸對(duì)消炎痛型、醋酸涂抹型胃潰瘍寒、熱證模型大鼠血清COR含量的影響

張洋，柴劍波，李勝志，高彥宇，肖洪彬，李冀

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

本研究是在“病證結(jié)合”理論基礎(chǔ)上，將消化性潰瘍病與中醫(yī)寒、熱證相結(jié)合，創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍寒、熱證型動(dòng)物模型，通過(guò)對(duì)寒、熱證型規(guī)律觀察揭示胃潰瘍寒、熱證證候?qū)嵸|(zhì)，探究寒、熱性質(zhì)不同的方劑對(duì)相應(yīng)模型的作用機(jī)制及方證相應(yīng)規(guī)律。

1 實(shí)驗(yàn)材料及藥物制備

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar大鼠，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心(GLP)，合格證號(hào)SCXK(京)2007－0001。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥

熱因素:將辣椒粉溶入60%無(wú)水乙醇中，配制成8%干辣椒粉的乙醇混懸液。

寒因素:稱(chēng)取 6g NaOH，溶入 500ml雙蒸水中(0.3mol/L)。冰水:冷凍保存，使用時(shí)提前取出溶化。

大黃黃連瀉心湯、理中丸:按原方藥量及比例制備。其中，大黃黃連瀉心湯濃縮至每毫升含0.5g生藥，理中丸濃縮至每毫升含1g生藥的液體，冰箱存儲(chǔ)備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 甲醛(分析純級(jí)，天津市博大化工有限公司);乙醚(分析純級(jí)，上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站);鹽酸(上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站);NaOH(天津市博大化工有限公司);冰乙酸(上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站);COR檢測(cè)試劑盒(美國(guó)RD公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組 Wistar大鼠，體質(zhì)量180～220g，雌雄各半，給予標(biāo)準(zhǔn)的大鼠食物和水，實(shí)驗(yàn)前大鼠在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)習(xí)服7天。消炎痛模型取140只大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組:即空白對(duì)照組10只、單消組(消炎痛模型)10只、熱消組(熱因素+消炎痛注射)30只、寒消組(寒因素+消炎痛注射)30只、單熱組(單純熱因素)30只、單寒組(單純寒因素)30只。醋酸涂抹型取168只大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組:即空白對(duì)照組12只、模醋組(醋酸涂抹)12只、熱醋組(熱因素+醋酸涂抹)36只、寒醋組(寒因素+醋酸涂抹)36只、熱假組(熱因素+假手術(shù))36只、寒假組(寒因素+假手術(shù))36只。

2.2 造模方法 參照本課題組前期成果［1－3］。

2.3 實(shí)驗(yàn)步驟

2.3.1 消炎痛型胃潰瘍寒、熱證模型的建立及寒、熱方劑干預(yù)實(shí)驗(yàn)

將各組動(dòng)物分別按上述胃寒、熱證造模方法，進(jìn)行寒、熱因素灌胃，給予相應(yīng)造模劑;單消組及空白對(duì)照組則給予等體積生理鹽水，連續(xù)7天。寒、熱因素造模后，將受試大鼠(除空白對(duì)照組、單消組)，在各自組別內(nèi)再按體質(zhì)量隨機(jī)分成3組，每組10只，即:熱消、熱消大、熱消理;寒消、寒消大、寒消理;單熱、單熱大、單熱理;單寒、單寒大、單寒理。按組別，各給藥組分別給予相應(yīng)治療方劑，大黃黃連瀉心湯1.8g/Kg，理中丸3.6g/Kg，每天2次;其它組給予等體積生理鹽水，連續(xù)4天;末次給藥后將受試大鼠禁食不禁水30h(注意勿使動(dòng)物食入糞便和墊料等雜物，以免影響造模結(jié)果)，進(jìn)行腹腔注射消炎痛，并于消炎痛注射開(kāi)始前30min，再給藥1次。

2.3.2 醋酸涂抹型胃潰瘍寒、熱證模型的建立及寒、熱方劑干預(yù)實(shí)驗(yàn)

將各組動(dòng)物分別按上述胃寒、熱證造模方法，進(jìn)行寒、熱因素灌胃，給予相應(yīng)造模劑;模醋組及空白對(duì)照組則給予等體積生理鹽水，連續(xù)7天。再將各組(除空白對(duì)照組、模醋組)大鼠在各自組別內(nèi)再按體質(zhì)量隨機(jī)分成3組，每組12只:熱醋、熱醋大、熱醋理;寒醋、寒醋大、寒醋理;熱假、熱假大、熱假理;寒假、寒假大、寒假理。末次寒、熱因素給藥后30min，將相應(yīng)組別分別行醋酸涂抹術(shù)及假手術(shù)，建立醋酸涂抹型胃潰瘍寒、熱證模型。術(shù)后24h，各給藥組按組別分別給予相應(yīng)受試方劑，大黃黃連瀉心湯1.8g/kg，理中丸3.6g/Kg，2次/天;其他組給予等體積生理鹽水，2次/天，連續(xù)灌服治療藥物11天。

2.4 實(shí)驗(yàn)取材 分別于消炎痛腹腔注射7h后，醋酸涂抹型末次給藥24h后眼球取血，分離血清。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS 13.0軟件包用單因素方差分析(one－way ANOVA)LSD或S－N－K法進(jìn)行兩兩比較檢驗(yàn)，用(s)表示結(jié)果。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 寒、熱方劑對(duì)消炎痛型胃潰瘍寒、熱證模型大鼠血清COR含量的影響 結(jié)果見(jiàn)表1，2，3。

表1 消炎痛型胃潰瘍寒、熱證模型間血清COR含量的變化(s)

表1 消炎痛型胃潰瘍寒、熱證模型間血清COR含量的變化(s)

注:與空白組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與熱消組比較，△△P＜0.01;與單寒組比較，▲▲P ＜0.01。

組別 n COR(ng/ml)空白10 34.54 ±10.88模消 9 32.73 ±6.09△△寒消 9 28.35 ±9.59△△單寒 10 30.80 ±7.87熱消 9 45.54 ±11.07*單熱 9 49.04 ±10.05＊＊▲▲

由表1可知，熱消、單熱組與空白對(duì)照組比較血清COR的含量明顯升高，具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。熱消組與寒消組、模消組比較升高顯著，具有顯著性差異(P＜0.01)，單熱組與單寒組比較血清COR的含量明顯升高，具有顯著性差異(P＜0.01)，說(shuō)明熱因素作用效果顯著。提示COR可作為臨床急性潰瘍熱證的微觀指征。由表2、3可知，熱消大治療組、單熱大治療組與熱消模型組、單熱模型組比較血清COR的含量明顯降低，具有顯著性差異(P＜0.05)。

表2 寒、熱方劑對(duì)消炎痛型胃潰瘍寒證大鼠血清COR含量的影響(s)

表2 寒、熱方劑對(duì)消炎痛型胃潰瘍寒證大鼠血清COR含量的影響(s)

組別 n COR(ng/ml)寒消28.35 ±9.59寒消大 8 30.79 ±7.87寒消理 8 32.43 ±6.44單寒 10 30.80 ±7.87單寒大 9 36.21 ±7.44單寒理9 37.89 ±10.02 9

表3 寒、熱方劑對(duì)消炎痛型胃潰瘍熱證大鼠血清COR含量的影響(s)

表3 寒、熱方劑對(duì)消炎痛型胃潰瘍熱證大鼠血清COR含量的影響(s)

注:與單熱組比較，★P＜0.05;與熱消組比較，△P＜0.05。

組別 n COR(ng/ml)熱消45.54 ±11.07熱消大 8 35.56 ±6.23△熱消理 8 50.00 ±9.36單熱 9 49.04 ±10.05單熱大 9 36.95 ±11.89★單熱理9 9 55.09 ±16.94

3.2 寒、熱方劑對(duì)醋酸涂抹型胃潰瘍寒、熱證模型大鼠血清COR含量的影響 結(jié)果見(jiàn)表4，5，6。

表4 醋酸涂抹型胃潰瘍寒、熱證模型間大鼠血清COR的含量變化(s)

表4 醋酸涂抹型胃潰瘍寒、熱證模型間大鼠血清COR的含量變化(s)

注:與空白組比較，＊＊P＜0.01;與熱醋組比較，△P＜0.05;與寒假組比較，▲P＜0.05。

組別 n COR(ng/ml)空白10 33.00 ±8.69 12 29.43 ±7.46模醋 9 31.95 ±16.00寒醋 9 30.24 ±6.56△熱醋 8 41.03 ±9.93＊＊單熱假 10 43.92 ±8.38＊＊▲單寒假

由表4可知，熱醋組、熱假組大鼠血清COR的含量明顯高于空白對(duì)照組，具有顯著性差異(P＜0.01)。熱醋組與寒醋組、熱假組與寒假組比較血清COR的含量明顯升高，具有顯著性差異(P＜0.05)。

表5 寒、熱方劑對(duì)醋酸涂抹型胃潰瘍寒證大鼠血清COR含量的影響(s)

表5 寒、熱方劑對(duì)醋酸涂抹型胃潰瘍寒證大鼠血清COR含量的影響(s)

組別 n COR(ng/ml)寒醋30.24 ±6.56寒醋理 10 32.34 ±10.20寒醋大 9 34.78 ±8.83單寒假 10 33.00 ±8.69寒假理 10 31.29 ±10.06寒假大9 10 36.84 ±10.06

表6 寒、熱方劑對(duì)醋酸涂抹型胃潰瘍熱證大鼠血清COR含量的影響(s)

表6 寒、熱方劑對(duì)醋酸涂抹型胃潰瘍熱證大鼠血清COR含量的影響(s)

注:與熱醋組比較，△P＜0.05;與熱假組比較，★P＜0.05。

組別 n COR(ng/ml)41.03 ±9.93熱醋理 8 43.98 ±13.19熱醋大 8 31.31 ±5.39△單熱假 10 43.92 ±8.38熱假理 10 45.20 ±13.37熱假大 10 33.30 ±9.76熱醋8★

由表5、6可知，熱醋大組、熱假大組與熱醋、熱假組比較血清COR的含量明顯降低，具有顯著性差異(P ＜0.05)。

4 討論

皮質(zhì)醇是腎上腺皮質(zhì)合成的一種主要激素，對(duì)人體糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝有重要的影響，主要作用是促進(jìn)蛋白質(zhì)的分解，抑制其合成。在應(yīng)激反應(yīng)中，腎上腺被認(rèn)為是一個(gè)關(guān)鍵性的器官［4］，機(jī)體受到刺激時(shí)，腎上腺皮質(zhì)功能增強(qiáng)，分泌出大量的皮質(zhì)醇(COR)，可提高機(jī)體的抵抗能力，是機(jī)體的一種保護(hù)性機(jī)制。然而，過(guò)強(qiáng)的刺激又會(huì)出現(xiàn)負(fù)面的并發(fā)癥，最常見(jiàn)的是潰瘍的發(fā)生。

本研究發(fā)現(xiàn)，血清COR的含量在潰瘍熱證上升明顯，熱因素對(duì)本研究建立的消炎痛型、醋酸涂抹型胃潰瘍寒、熱證“病證結(jié)合”模型的損傷有明顯影響，可以加重潰瘍，說(shuō)明COR在熱證中發(fā)揮了損傷作用，可作為臨床潰瘍熱證的微觀指征。其作用機(jī)制可能為熱證造模后中樞神經(jīng)系統(tǒng)通過(guò)激活垂體－腎上腺軸導(dǎo)致皮質(zhì)激素分泌增加，破壞胃黏膜保護(hù)屏障，從而加速潰瘍的發(fā)生。經(jīng)寒性方劑大黃黃連瀉心湯治療后，熱性模型組大鼠血清COR的含量明顯降低，對(duì)單純寒因素、寒因素結(jié)合實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍模型血清COR的含量無(wú)影響。寒性方劑大黃黃連瀉心湯預(yù)防消炎痛型胃潰瘍熱證，治療醋酸涂抹型胃潰瘍熱證的作用機(jī)制可能與抑制皮質(zhì)醇分泌有關(guān)。熱性方劑理中丸對(duì)寒證模型COR的含量影響不大，寒性方劑大黃黃連瀉心湯對(duì)寒證模型亦無(wú)影響，說(shuō)明在潰瘍病的病理狀態(tài)下，寒性方劑通過(guò)“方證相應(yīng)”降低熱證模型大鼠血清COR的含量而達(dá)到預(yù)防潰瘍或促進(jìn)潰瘍愈合的目的。

［1］畢珺輝，李冀，謝田，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對(duì)四種模型胃潰瘍寒熱證大鼠血清 PAF含量的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(2):51－55.

［2］李冀，謝田，柴劍波，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對(duì)幽門(mén)結(jié)扎型、醋酸涂抹型胃潰瘍寒熱證模型大鼠血清NT含量的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(1):38 －41.

［3］李冀，柴劍波，畢珺輝，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對(duì)胃寒證、胃熱證模型大鼠基礎(chǔ)代謝的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38(5):55－57.

［4］馮新為.病理生理學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991:170.