不同菌齡銀耳菌種的酶活力測(cè)定

溫志強(qiáng) 白盛鎮(zhèn) 鄧優(yōu)錦

(福建農(nóng)林大學(xué)菌物研究中心,福州 350002)

銀耳(Tremella fuciformis Berk)系我國(guó)久負(fù)盛名的食藥兼用真菌,歷史上被列為 “參、茸、燕、耳”四大滋補(bǔ)珍品之一,并一度作為宮庭貢品,備受人們喜愛(ài)。銀耳也是福建省食用菌產(chǎn)業(yè)中的拳頭產(chǎn)品,栽培規(guī)模不斷擴(kuò)大,產(chǎn)量逐年上升。但目前銀耳生產(chǎn)中存在菌種研究滯后、多代自交、繼代延用等問(wèn)題。銀耳的安全生產(chǎn)必須首先解決菌種問(wèn)題,而菌種的菌齡是影響栽培產(chǎn)量和質(zhì)量的重要因素。[1]銀耳菌種質(zhì)量一般是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)及菌種的生長(zhǎng)狀況來(lái)確定的,要求菌齡不能太長(zhǎng)也不能太短,可至今未見(jiàn)有關(guān)銀耳菌種質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)的報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)不同菌齡的銀耳菌種的羧甲基纖維素酶(CMC酶)、木聚糖酶、淀粉酶、漆酶、多酚氧化酶等5種酶的活性測(cè)定,結(jié)合對(duì)應(yīng)菌齡的出耳試驗(yàn),以期探明銀耳菌種中的酶活性變化與菌種活力的關(guān)系,為銀耳菌種的質(zhì)量檢測(cè)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

(1)供試菌株。為古田縣用于栽培的同一批接種的銀耳原種Tr01和Tr21。

(2)培養(yǎng)基配方。參照福建古田縣菇農(nóng)生產(chǎn)栽培配方:棉籽殼84%,麩皮14%,石膏粉2%,水56%。

1.2 試驗(yàn)方法

(1)酶液制備。分別在菌種瓶中間均勻取白毛團(tuán)和混合菌絲各5 g(鮮重),加入25 mL蒸餾水并攪勻,浸提2 h后進(jìn)行抽濾,抽濾后的溶液即為菌絲粗酶液,每處理設(shè)5個(gè)重復(fù)。

(2)酶活力測(cè)定。酶活力測(cè)定的具體原理和方法參照施特爾馬赫B著、錢嘉淵譯的 《酶的測(cè)定方法》。[2]

(3)出耳。出耳的方法及管理參照古田縣生產(chǎn)上的常規(guī)方法。[3～5]

2 結(jié)果與分析

2.1 出耳情況

從表1可以看出,菌齡為7～12天的菌種,生產(chǎn)的銀耳朵徑較大、耳片適中、展片好、大小均勻、出耳率高,產(chǎn)量和質(zhì)量均較理想。而菌齡小于7天的菌種生產(chǎn)的銀耳,耳片雖然大而展,但耳片之間的大小差別極大,產(chǎn)量也偏低;菌齡為15天以上的菌種生產(chǎn)的銀耳,耳片小,展片差,產(chǎn)量較低。

2.2 羧甲基纖維素酶 (CMC酶)的活性

從圖1看出,不同菌齡的銀耳菌種均可測(cè)到CMC酶活力,白毛團(tuán)和混合菌絲的酶活力隨菌齡的變化而呈現(xiàn)出不同的趨勢(shì)。白毛團(tuán)的CMC酶活力呈現(xiàn)先上升后下降,菌齡5～12天,CMC酶活力逐漸增大,12天時(shí),酶活力達(dá)到最大,其OD值為0.4417。之后開(kāi)始逐漸下降,30天時(shí)其OD值僅為0.2120。而混合菌絲的CMC酶活力隨菌齡的增加而提高,OD值從5天時(shí)的0.1107上升到30天時(shí)的0.4331。

表1 銀耳栽培種不同菌齡用于生產(chǎn)的表現(xiàn)

圖1 不同菌齡銀耳菌種的羧甲基纖維素酶活性變化

2.3 木聚糖酶的活性

從圖2看出,白毛團(tuán)和混合菌絲的木聚糖酶活性均呈現(xiàn)先上升后下降再上升的變化趨勢(shì)。菌齡為5天時(shí),白毛團(tuán)木聚糖酶活力的OD值為1.0168,15天時(shí)達(dá)到最高值,為2.0489,20天時(shí)OD值下降至1.3416,之后又開(kāi)始上升,30天時(shí)為1.6260。混合菌絲木聚糖酶活力變化態(tài)勢(shì)與白毛團(tuán)雷同,菌齡為5天時(shí)OD值比白毛團(tuán)低,僅為0.2121,15天時(shí)為1.7163;20天時(shí)OD值降為0.9920,30天時(shí)OD值上升至1.5779。菌齡越大,兩者的木聚糖酶活力越接近。

2.4 淀粉酶的活性

圖2 不同菌齡銀耳菌種的木聚糖酶活性變化

從圖3看出,白毛團(tuán)與混合菌絲的淀粉酶活力變化趨勢(shì)相差較大,并無(wú)規(guī)律性。菌齡為5～12天時(shí),白毛團(tuán)淀粉酶活力基本呈微下降的趨勢(shì);12～15天,酶活力迅速升高,15天時(shí)達(dá)到最大,其OD值為0.4280;15～25天淀粉酶活力開(kāi)始下降,25天時(shí)的OD值為0.0859,25天后又有所上升,30天時(shí)的OD值為0.1274?；旌暇z的淀粉酶活力比白毛團(tuán)更呈無(wú)序狀態(tài),20天后,酶活力迅速上升,30天時(shí)到達(dá)頂峰,OD值達(dá)0.5355。

圖3 不同菌齡銀耳菌種的淀粉酶活性變化

2.5 漆酶的活性

從圖4看出,銀耳漆酶的活性隨菌齡變大呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),在菌齡為10天時(shí),漆酶活性達(dá)到最大,其他菌齡的酶活力均極低。在菌齡為5天和7天時(shí),白毛團(tuán)漆酶活性很低,OD值接近于0;10天時(shí),酶活性迅速升至最大,OD值為0.2091;此后酶活性開(kāi)始下降,15天后,酶活性的OD值接近于0。菌齡為5天和7天時(shí),混合菌絲的漆酶活性也很低,OD值接近0;在菌齡為10天和12天時(shí),OD值分別為0.2711和0.2807,此時(shí)漆酶活性最大;之后酶活性開(kāi)始降低,20天之后OD值又接近0。

圖4 不同菌齡銀耳菌種的漆酶活性變化

2.6 多酚氧化酶的活性

從圖5看出,多酚氧化酶活性隨菌齡的變大呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),在菌齡為10天時(shí)酶活性達(dá)到最大,其他菌齡的酶活力都極低。在菌齡為5天和7天時(shí),白毛團(tuán)多酚氧化酶活性極低,其OD值接近0,10天時(shí)OD值達(dá)到最高,為1.0009,12天之后,OD值又接近0?；旌暇z多酚氧化酶活性,菌齡為5天和7天時(shí),OD值也接近0;10天時(shí)達(dá)到最高值,為0.9840,之后酶活性開(kāi)始下降,20天后OD值又接近0。

圖5 不同菌齡銀耳菌種的多酚氧化酶活性變化

3 討論

根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果,銀耳菌種木聚糖酶的酶活性較大,不同菌齡菌種的木聚糖酶OD值均在1.00以上,而其他酶的酶活性較低。羧甲基纖維素酶、木聚糖酶、淀粉酶3種酶在不同菌齡菌種的白毛團(tuán)或混合菌絲中,均能檢測(cè)到其活性的變化。漆酶和多酚氧化酶的活性較低,其中漆酶只有在培養(yǎng)10天的白毛團(tuán),以及培養(yǎng)10天和12天的混合菌絲中檢測(cè)到較高的酶活性;多酚氧化酶只在培養(yǎng)10天的白毛團(tuán)和混合菌絲中檢測(cè)到較高的酶活性。

結(jié)合出耳試驗(yàn),可以初步看出,羧甲基纖維素酶 (CMC酶)、木聚糖酶、漆酶和多酚氧化酶的酶活性變化與銀耳出耳結(jié)果存在一定的相關(guān)性:①當(dāng)白毛團(tuán)CMC酶活力OD值較混合菌絲高0.2以上時(shí),對(duì)應(yīng)菌齡的菌種出耳較好;當(dāng)白毛團(tuán)和混合菌絲的CMC酶活力接近,或混合菌絲的酶活性較高時(shí),對(duì)應(yīng)菌齡的菌種出耳較差。②白毛團(tuán)與混合菌絲的木聚糖酶活力OD值相差0.6～0.7時(shí),銀耳菌種的出耳較好;當(dāng)兩者的木聚糖酶活力相近時(shí),菌種的出耳較差。③當(dāng)白毛團(tuán)和混合菌絲的漆酶活性或多酚氧化酶活性都很高時(shí),相對(duì)菌齡的菌種出耳好,菌種活力較高;幼齡和老化菌種的漆酶活性或多酚氧化酶活性均極低,菌種活力也較差。生產(chǎn)上能否將上述酶活測(cè)定結(jié)果作為銀耳菌種活力的檢測(cè)指標(biāo),尚需進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證和完善。

[1]黃年來(lái).銀耳菌種生產(chǎn)的原理和方法[J].食用菌,2007(1):25～27.

[2]B·施特爾馬赫 (German)(錢嘉淵譯).酶的測(cè)定方法 [M].中國(guó)輕工業(yè)出版社,1992:10～280.

[3]鐘冬秀,鐘秀媚.不同菌齡銀耳栽培種應(yīng)用生產(chǎn)試驗(yàn) [J].食用菌,2008(4):26～27.

[4]黃年來(lái).中國(guó)銀耳生產(chǎn) [M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.2000:1～185.

[5]雷銀清.銀耳夏季栽培關(guān)鍵技術(shù)[J].食用菌,2007(3):54.