AQP5在宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義

蘇 琳,吳王飛,張 翔

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京市婦幼保健院,1.婦產(chǎn)科;2.病理科,江蘇南京,210004)

水的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)是細(xì)胞生存生長的關(guān)鍵條件。尤其對于腫瘤細(xì)胞來說,其快速增殖、分裂和侵襲轉(zhuǎn)移等特性更離不開水的微環(huán)境,腫瘤細(xì)胞比正常細(xì)胞更需要水分子的快速跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。近年來,人們發(fā)現(xiàn)水通道蛋白(AQPs)能夠介導(dǎo)水快速被動(dòng)的跨生物膜轉(zhuǎn)運(yùn),是水進(jìn)出細(xì)胞的主要途徑[1],AQPs作為一個(gè)關(guān)鍵因素參與多種腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移[2]。已經(jīng)發(fā)現(xiàn),哺乳動(dòng)物水通道蛋白家族有13個(gè)成員(AQP0～AQP12)[3]。到目前為止,只報(bào)道了AQP1、AQP4和AQP8與宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后有關(guān)。而AQP5與宮頸鱗癌的相關(guān)研究在國內(nèi)外鮮有報(bào)道。因此,本研究旨在應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測AQP5在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)和分布特點(diǎn),并且分析AQP5與宮頸鱗癌的臨床病理因素之間的關(guān)系,探討其在宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標(biāo)本取自南京市婦幼保健院病理科2009年1月～2010年12月手術(shù)及門診活檢宮頸標(biāo)本共85例,其中正常宮頸上皮組織35例,年齡28～67歲,平均48.5歲;宮頸鱗癌患者 50例,年齡25～68歲,平均46.7歲。所有患者術(shù)前未接受化療、放療或免疫治療。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的處理:收集的全部標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛液固定,梯度脫水、浸蠟和包埋。所取蠟塊行5 μ m連續(xù)切片 、烘烤、脫蠟 、HE 染色、透明和封片。以上標(biāo)本均經(jīng)醫(yī)院病理科2位副主任以上職稱的病理醫(yī)師診斷證實(shí),并有完整的臨床和病理資料。

1.2.2 免疫組織化學(xué):應(yīng)用兔抗人AQP5多克隆抗體(購自美國ABCAM公司)對宮頸鱗癌組織及對照正常組織AQP5蛋白行免疫組化DAB法檢測。染色過程如下:石蠟切片梯度酒精脫水后,3%過氧化氫孵育10 min,微波修復(fù)抗原10 min,滴加非免疫血清,室溫孵育1.5 h,加入1∶200兔抗人AQP5多克隆抗體4°C過夜,經(jīng)DAB顯色,蘇木素復(fù)染,封片。存在棕黃色或棕褐色顆粒判為陽性細(xì)胞,選背景清晰陽性表達(dá)效果好的切片作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。每張切片隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野,計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞取其平均數(shù)計(jì)算陽性細(xì)胞表達(dá)率(%)。

2 結(jié) 果

2.1 AQP5蛋白在不同宮頸組織的表達(dá)

AQP5蛋白在正常宮頸組織中幾乎不表達(dá),但是在宮頸鱗癌組織中主要位于細(xì)胞膜上。以細(xì)胞膜上表達(dá)AQP5的細(xì)胞認(rèn)為是AQP5表達(dá)陽性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)AQP5在宮頸鱗癌組織中平均表達(dá)陽性率為36.89%。宮頸鱗癌組織中AQP5的表達(dá)顯著高于正常宮頸組織(P<0.01)。見圖1。

圖1 AQP5在正常宮頸組織和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)和定位(400倍)

表1 50例宮頸鱗癌組織中AQP5與臨床病理因素間的關(guān)系

2.2 AQP5與臨床病理因素之間的關(guān)系

通過免疫組織化學(xué)方法,對50例宮頸鱗癌組織中AQP5的表達(dá)率進(jìn)行分析。AQP5與宮頸鱗癌臨床病理因素之間的關(guān)系,見表1。根據(jù)平均表達(dá)陽性率高低將宮頸鱗癌組織分為2組:高表達(dá)組24例和低表達(dá)組26例。腫瘤組織中AQP5蛋白表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、分級(jí)、FIGO分期無關(guān),但伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤組織中AQP5表達(dá)明顯高于未轉(zhuǎn)移者(P<0.01)。

3 討 論

宮頸鱗癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅女性的健康和生命。盡管目前宮頸鱗癌的治療手段在不斷提高,但是人們對宮頸鱗癌的預(yù)后還不是特別滿意。人們認(rèn)為提高宮頸鱗癌的預(yù)后關(guān)鍵還依賴于早期預(yù)測。因此尋找好的宮頸鱗癌預(yù)測及預(yù)后指標(biāo)至關(guān)重要。

AQPs是具有高度選擇性的水通道特異蛋白質(zhì)家族,種類多,在機(jī)體中的分布比較廣泛。目前研究顯示,AQPs主要在細(xì)胞質(zhì)膜上表達(dá),它能夠促進(jìn)細(xì)胞遷移和參與血管形成[4-5],在多種不同來源的腫瘤中都有強(qiáng)表達(dá),尤其是具有侵蝕性的腫瘤。AQP5是AQPs家族蛋白成員之一,它定位于人染色體12q3,由265個(gè)氨基酸組成,分子量27kD。研究表明AQP5在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用[6-7]。Shen等[8]發(fā)現(xiàn)AQP5在胃癌組織中高表達(dá),并且和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和淋巴血管侵襲相關(guān);AQP5在非小細(xì)胞肺癌的侵襲中具有重要作用,是非小細(xì)胞肺癌新的治療靶點(diǎn)和預(yù)后指標(biāo)[9];卵巢惡性及交界性腫瘤組織中AQP5表達(dá)明顯高于良性腫瘤和正常卵巢組織,且和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5];此外,沉默AQP5能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖,并且體外成瘤實(shí)驗(yàn)表明抑制AQP5能夠影響裸鼠成瘤并且抑制腫瘤生長[10]。

盡管很多研究表明AQP5在腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移中具有重要的作用,但是在宮頸鱗癌中的作用卻鮮有報(bào)道。本研究中通過免疫組織化學(xué)方法,檢測了AQP5在宮頸鱗癌和正常宮頸組織中的表達(dá)和定位,發(fā)現(xiàn)AQP5在正常宮頸組織中幾乎不表達(dá),而在宮頸鱗癌組織中主要定位癌細(xì)胞的細(xì)胞膜上。進(jìn)一步通過分析宮頸鱗癌組織中AQP5的表達(dá)與臨床病理因素間的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)AQP5表達(dá)高低和患者的年齡、腫瘤大小、分級(jí)、FIGO分期無關(guān),僅僅和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),提示AQP5可能參與宮頸鱗癌的轉(zhuǎn)移,可能成為宮頸鱗癌有效的預(yù)后指標(biāo)。

總之,AQP5蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),而與年齡、腫瘤大小、分級(jí)、國際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(FIGO)分期無關(guān),宮頸鱗癌中AQP5蛋白高表達(dá)可能和惡性腫瘤的生物學(xué)行為相關(guān)。

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