液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)(LCT)在體腔積液診斷中的應(yīng)用

左淑英，唐 平，張 帆，汪向明

(1.沙河市人民醫(yī)院 病理科，河北 沙河 054100;2.和縣中醫(yī)院 病理科，安徽 和縣 238200;3.皖南醫(yī)學(xué)院附屬弋磯山醫(yī)院 病理科，安徽 蕪湖 241001)

惡性胸腔積液(MPE)是腫瘤患者的一個(gè)常見(jiàn)臨床癥狀，有時(shí)甚至是首發(fā)癥狀，積液的細(xì)胞學(xué)檢查有助于良惡性的診斷。多年來(lái)應(yīng)用的傳統(tǒng)制片(CP)方法存在著一些不利因素，如背景不清晰、常有大量紅細(xì)胞、炎性滲出物及黏液，細(xì)胞涂片厚、面積過(guò)大、敏感性低等。細(xì)胞學(xué)工作者一直在探討新的制片技術(shù)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外有許多醫(yī)療單位積極開(kāi)展液基細(xì)胞學(xué)簿層涂片(LCT)方法，與傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)涂片方法比較，LCT具有能提高標(biāo)本內(nèi)病變細(xì)胞的檢出率和被檢細(xì)胞單層分布均勻，易于醫(yī)生讀片診斷的優(yōu)越性［1～4］，本文就我科用該方法檢查體腔積液與CP法做一比較，探討其應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 使用儀器及耗材 均由美國(guó)LGM國(guó)際公司中國(guó)地區(qū)總代理萬(wàn)方公司提供。

1.2 標(biāo)本來(lái)源 取自三所醫(yī)院經(jīng)臨床或病理診斷證實(shí)的體腔積液標(biāo)本269份，每份均制備CP和LCT兩種涂片。體腔積液包括胸水136份，腹水109份，腦積液2份，胸、腹、盆腔沖洗液16份，心包積液6份。

1.3 方法 由美國(guó)LGM國(guó)際公司中國(guó)地區(qū)總代理萬(wàn)方公司提供標(biāo)本采集及處理技術(shù)。將液體標(biāo)本(胸腔積液、腹腔積液、腹腔沖洗液)60 ml，平均分成4份離心15 min，1 500～2 000 rpm，吸去上清液。其中兩份用來(lái)做CP兩張，將另外兩份沉淀物加入到Specimen Prenservative標(biāo)本保存液中備用。將保存瓶?jī)?nèi)標(biāo)本用旋渦鷥式混勻器混勻60 s后，在保存瓶?jī)?nèi)至少放置1 h以上，然后取潔凈干燥15 ml試管1只，在其內(nèi)注入清潔液4 ml并輕輕傾斜45°，將保存瓶?jī)?nèi)的標(biāo)本液緩緩注入有清潔液的試管內(nèi)，將試管置于離心機(jī)里離心2 200 rpm 10 min，離心完成后取出試管，將管內(nèi)上清液棄去，將3～5倍于離心后的標(biāo)本沉淀容積的細(xì)胞基液注入試管內(nèi)后震蕩30～60 s，用移液器移5 μl試管內(nèi)標(biāo)本液仔細(xì)均勻涂抹在備好刻有標(biāo)記符號(hào)的涂片上，置于95%乙醇內(nèi)至少放置15 min以上，常規(guī)HE染色，封片、讀片診斷。

1.4 結(jié)果分組 結(jié)果分惡性組、良性組和可疑組。惡性組包括腺癌細(xì)胞、鱗癌細(xì)胞、小細(xì)胞癌、非霍奇金淋巴瘤(NHL)及不能分類的惡性腫瘤細(xì)胞。良性組包括不典型細(xì)胞、間皮細(xì)胞以及鱗狀細(xì)胞。將惡性細(xì)胞組定為陽(yáng)性組，良性細(xì)胞組定為陰性組。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 兩個(gè)樣本率的比較用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 CP和LCT診斷結(jié)果比較 采用兩種方法對(duì)比病例共269 例，χ2=3.844，P ＞0.05，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 269例LCT和CP兩種方法診斷對(duì)照

兩種制片方法共檢出陽(yáng)性病例149例，LCT與CP均為陽(yáng)性者142例，兩者陽(yáng)性符合率95.30%?？梢砂┰\斷中，LCT診斷16例(組織病理結(jié)果為惡性腫瘤)，CP診斷為8例;LCT比CP多檢出8例，兩者符合率50.00%。診斷陰性LCT為104例，CP為119 例;兩者陰性符合率 87.39%［5，6］。

2.2 LCT和CP兩種方法形態(tài)特征對(duì)比 兩種涂片細(xì)胞形態(tài)特征的對(duì)比，LCT涂片背景中缺少了紅細(xì)胞、炎細(xì)胞和細(xì)胞碎片，細(xì)胞散在，但片段仍能保存，分布均勻，保存完好;細(xì)胞小(與CP涂片相比)且無(wú)退變現(xiàn)象。而CP涂片中常有大量紅細(xì)胞、炎性滲出物及黏液，細(xì)胞涂片厚、面積過(guò)大，細(xì)胞常有退變現(xiàn)象［7］。

2.3 CP和LCT細(xì)胞診斷和組織診斷的關(guān)系 269例體腔積液均有組織病理診斷對(duì)照。其中CP陽(yáng)性142例，LCT陽(yáng)性149例;CP和LCT的敏感性分別為52.79%和55.39%，特異性均為100%，兩種涂片均未見(jiàn)假陽(yáng)性。但有假陰性(CP 119例，LCT 101例)。LCT的101例假陰性者均有惡性腫瘤的病史，但在CP和LCT涂片中均未見(jiàn)惡性腫瘤細(xì)胞。

3 討論

液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)制片新技術(shù)，已成功地應(yīng)用于婦科細(xì)胞學(xué)，在非婦科方面的應(yīng)用仍在探索中［8，9］。利普LCT技術(shù)是美國(guó)的第三代液基產(chǎn)品。LCT液基細(xì)胞學(xué)方法操作簡(jiǎn)單，無(wú)需再增加醫(yī)療單位的設(shè)備成本，LCT涂片上減少了紅細(xì)胞、炎性滲出物及黏液成分，背景清晰，腫瘤細(xì)胞形態(tài)保存完好，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞集中到一個(gè)2 cm2的范圍內(nèi)，利于醫(yī)生仔細(xì)觀察診斷，從而減少了閱片時(shí)間，便于提高診斷的準(zhǔn)確性(圖1)。

圖1 兩種細(xì)胞涂片比較(胸水)

本研究中，269例體腔積液標(biāo)本均有組織病理學(xué)結(jié)果證實(shí)。和病理學(xué)對(duì)照，CP中119例，LCT中101例假陰性，原因之一是制片不滿意(可能未涂到惡性細(xì)胞，未發(fā)現(xiàn)有閱片的漏診);二是積液中沒(méi)有脫落的惡性細(xì)胞。CP和LCT診斷陽(yáng)性符合率為95.30%，原因是LCT比CP在惡性診斷中多8例;陰性符合率為 87.39%，低于張智慧等報(bào)道的96.8%和94.7%［10］，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該結(jié)果表明在體腔積液標(biāo)本中，陽(yáng)性診斷的準(zhǔn)確性方面兩種檢查方法結(jié)果基本一致;而在可疑陽(yáng)性的診斷中，LCT診斷16例，CP診斷8例，LCT診斷的靈敏度明顯提高。這表明當(dāng)體液標(biāo)本中的腫瘤細(xì)胞較多時(shí)，LCT和CP都比較容易查到腫瘤細(xì)胞，而當(dāng)標(biāo)本中的腫瘤細(xì)胞較少時(shí)LCT較CP更容易發(fā)現(xiàn)有診斷價(jià)值的細(xì)胞。其原因可能是LCT方法克服了制片過(guò)程中的大部分缺點(diǎn)，幾乎保留了離心后的所有細(xì)胞，提高了樣本的收集率，并使細(xì)胞均勻單層分布于玻片上，去除了黏液、紅細(xì)胞、炎細(xì)胞的干擾，腫瘤細(xì)胞形態(tài)保存完整，細(xì)胞核、核質(zhì)、核仁更清楚，獲得了三維立體結(jié)構(gòu)。本組傳統(tǒng)方法漏診的15例，多為未見(jiàn)到有診斷意義的細(xì)胞或細(xì)胞太少被大量血液、炎性分泌物覆蓋，難以診斷。

液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)因改善了樣本收集方法，使細(xì)胞均勻分布在載玻片上，不僅除去了紅細(xì)胞、黏液等，而且保存細(xì)胞完整性，同時(shí)保全了細(xì)胞抗原性，免疫組化染色不受影響。由于薄片將標(biāo)本儲(chǔ)存于保存液中，還可以用來(lái)重復(fù)制片，也可作特殊染色，如免疫細(xì)胞化學(xué)等［11］。因其背景干凈，減少了非特異性著色，該技術(shù)也可用作DNA倍體圖象分析，熒光原位雜交等，使得細(xì)胞學(xué)工作深入到分子水平，便于各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)取材。LCT技術(shù)也有它的缺點(diǎn)，LCT制片時(shí)將保存瓶?jī)?nèi)標(biāo)本用混勻器混勻60 s，后，在保存瓶?jī)?nèi)至少放置1 h以上，然后將保存瓶?jī)?nèi)的標(biāo)本液注入清潔液的試管內(nèi)，離心10 min，離心完成后將管內(nèi)上清液棄去，將3～5倍于離心后的標(biāo)本沉淀容積的細(xì)胞基液注入試管內(nèi)后震蕩30～60 s，用移液器移5 μl試管內(nèi)標(biāo)本液仔細(xì)均勻涂抹在備好刻有標(biāo)記符號(hào)的涂片上，所以制片時(shí)間比CP明顯延長(zhǎng)。另外收費(fèi)也明顯較CP貴。

上述LCT液基細(xì)胞學(xué)與傳統(tǒng)檢查方法的對(duì)比顯示:LCT技術(shù)操作簡(jiǎn)單，無(wú)需再增加醫(yī)療單位的設(shè)備成本，能提供質(zhì)量好的涂片，能減少細(xì)胞學(xué)醫(yī)生的閱片時(shí)間，從而提高體腔積液標(biāo)本細(xì)胞學(xué)診斷率，還可以用來(lái)重復(fù)制片，也可作免疫細(xì)胞化學(xué)、DNA倍體圖象分析、熒光原位雜交，是一項(xiàng)值得推廣的技術(shù)。

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