RP-HPLC 法測(cè)定甲磺酸酚妥拉明滴鼻劑中甲磺酸酚妥拉明的含量

葉 勇，晏亦林，張健泓（1.廣西醫(yī)科大學(xué)，南寧市 53001；.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣州市 51050）

甲磺酸酚妥拉明為α腎上腺素受體阻滯藥，臨床上應(yīng)用比較廣泛，主要用于血管痙攣性疾病的治療，近來由于其治療勃起功能障礙而受到關(guān)注，臨床上要求該藥作用迅速，而目前其給藥途徑有口服及注射[1～3]，尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)外用制劑的報(bào)道。滴鼻劑是鼻腔給藥最簡(jiǎn)單的一種劑型，即以藥物的溶液（包括混懸液）直接滴入鼻腔給藥。該劑型制備簡(jiǎn)單，無需特殊的給藥裝置，目前已經(jīng)有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[4]。鑒于以上特點(diǎn)，筆者試制了新型速效制劑甲磺酸酚妥拉明滴鼻劑，并建立其質(zhì)量控制方法，旨在為臨床提供更優(yōu)良的制劑。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：Dionex Summit P680 HPLC（DIONEX公司），包括P680A高壓二元梯度泵、四通道紫外-可見檢測(cè)器、UVD 170U、CHROMELEONTM色譜工作站；BP211D Sartorius電子天平（Sartourius Co.，Ltd.）；pHS-25型酸度計(jì)（上海雷磁儀器廠）。

甲磺酸酚妥拉明滴鼻劑（廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院自制，批號(hào)：20090308-1、20090308-2、20090308-3，規(guī)格：5 mL∶50 mg甲磺酸酚妥拉明）；甲磺酸酚妥拉明對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100110-199501，供含量測(cè)定用）；乙腈為色譜純（DIMA公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：大連依利特Hypersil BDS柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：0.2%甲酸-2.5%磷酸二氫鉀溶液-乙腈（48∶15∶37，三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.0）；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長：278 nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：25℃。理論板數(shù)按甲磺酸酚妥拉明峰計(jì)應(yīng)不得低于3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取干燥至恒重的甲磺酸酚妥拉明對(duì)照品約12 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.502 mg·mL－1的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取甲磺酸酚妥拉明滴鼻劑1.0 mL，置于25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，再從中精密吸取1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 空白溶液的制備 按處方比例取輔料，同“2.2.2項(xiàng)下”方法制成空白輔料溶液，0.45μm微孔濾膜濾過，即得。分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及空白輔料溶液各10μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的色譜峰（甲磺酸酚妥拉明的保留時(shí)間約為4 min）；空白輔料溶液在相應(yīng)的位置上無干擾色譜峰，說明輔料對(duì)測(cè)定結(jié)果無干擾。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取上述制備好的對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別取10μL進(jìn)樣測(cè)定，以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計(jì)算得線性回歸方程Y＝18.507X+1.235（r＝0.999 9，n＝6）。結(jié)果表明，甲磺酸酚妥拉明進(jìn)樣量在0.100 4～0.602 4μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為0.030 1 mg·mL－1的對(duì)照品溶液適量，連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣體積為10μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.29%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品（批號(hào)：090308-1）5份，分別按供試品制備方法制備供試品，0.45μm微孔濾膜濾過，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，分別計(jì)算含量。結(jié)果，平均含量為99.76%，RSD＝0.59%，表明溶液重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號(hào)：090308-1）分別于0、2、4、8、12 h內(nèi)測(cè)定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.50%，表明本品的溶液在室溫放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn)

按處方比例取空白輔料，加入相當(dāng)于主藥濃度的80%、100%、120%的對(duì)照品溶液，照“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果，回收率均在98.0%～102.0%之間，詳見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

2.8 樣品含量測(cè)定

精密量取本品1.0 mL，置于25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，再從中精密吸取1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果，3批樣品含量均符合標(biāo)示量（應(yīng)為標(biāo)示量90.0%～110.0%），詳見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

固定流動(dòng)相的pH至4.0，甲酸濃度為0.2%，筆者分別考察濃度為2.0%、2.5%、3.0%的磷酸二氫鉀溶液制備的流動(dòng)相。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)濃度為2.5%時(shí)，甲磺酸酚妥拉明峰的峰形對(duì)稱，柱效高，故最終選擇0.2%甲酸-2.5%磷酸二氫鉀溶液-乙腈（48∶15∶37，三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.0）作為流動(dòng)相。

有文獻(xiàn)報(bào)道[5]甲磺酸酚妥拉明的分子結(jié)構(gòu)含有酚羥基，遇水易氧化，加入酸可以抑制其氧化。本試驗(yàn)參照文獻(xiàn)使用甲醇作為制備溶液的溶劑。結(jié)果表明，甲醇制備的溶液可以克服上述問題。

綜上所述，采用高效液相色譜法測(cè)定甲磺酸酚妥拉明滴鼻劑含量專屬性強(qiáng)，靈敏度高，精密度和回收率均符合要求，能夠滿足制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。

[1] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：165.

[2] 翁水旺，沙吉達(dá).HPLC法測(cè)定甲磺酸酚妥拉明分散片的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2000，17（6）：474.

[3] 陳 樂.HPLC法測(cè)定甲磺酸酚妥拉明咀嚼片的含量[J].江西醫(yī)藥，2008，43（12）：1 398.

[4] 姬懷雪，王 艷，呂冬梅，等.RP-HPLC法測(cè)定環(huán)丙沙星殼聚糖滴鼻劑中主藥的含量[J].中國藥房，2009，20（19）：1 504.

[5] 單 利，高春生，崔光華.反相高效液相色譜法測(cè)定甲磺酸酚妥拉明速崩片的含量[J].藥物分析雜志，2000，20（1）：41.