金玉琴 王增壽
溫州醫(yī)學院附屬二院 溫州 325000
曾國武 浙江省溫州市第三人民醫(yī)院
王龍虎 浙江大學藥學院
浙貝母為百合科植物浙貝母Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鱗莖,是道地藥材“浙八味”之一,以金華磐安、寧波鄞州為主產(chǎn)地。具有清熱化痰止咳、解毒散結(jié)消癰等功效[1]。主要有效成分為生物堿和皂苷[2],其中貝母素甲和貝母素乙的含量是《中國藥典》規(guī)定檢測的指標成分。近年來浙貝母的炮制方法不一,厚片在常規(guī)煎煮時常有白心難以煎透,影響藥效[3]。為了符合2009年國家中醫(yī)藥管理局頒布的《醫(yī)療機構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》藥料應充分煎透,做到無糊狀塊、無白心、無硬心的要求,本文通過HPLC-ELSD法檢測浙貝母三種主流炮制規(guī)格(鮮切烘干薄片、鮮切無硫厚片、硫熏厚片)的貝母素甲、貝母素乙含量,明確質(zhì)量最佳的炮制品;考察煎膏得率和有效成分含量的相關(guān)性,確定合理的煎煮方法。
1.1 樣 品 同批浙貝母原藥材均來自浙江磐安縣新渥鎮(zhèn)浙貝母標準化生產(chǎn)基地,由浙江中醫(yī)藥大學飲片廠鄭建寶和溫州市第三人民醫(yī)院曾國武藥師鑒定為百合科植物浙貝母Fritillaria thunbergii Miq.的鱗莖。鮮切烘干薄片:原產(chǎn)地趁鮮切薄片,通過帶式干燥機80℃干燥,外觀平展呈黃白色;鮮切無硫厚片:原產(chǎn)地趁鮮切厚片,曬干,外觀皺縮呈灰褐色;硫熏厚片:原產(chǎn)地趁鮮熏硫,切厚片,曬干,外觀光潔呈粉白色。
1.2 試 藥 貝母素甲對照品(110750-200608,中國藥品生物制品鑒定所),貝母素乙對照品(110751-200606,中國藥品生物制品鑒定所);乙腈(色譜純,美國Tedia公司);甲醇、二乙胺、鹽酸、氨水、氯仿、石油醚均為分析純。
1.3 儀 器 DIONEX U-3000高效液相色譜儀(配Chromeleon色譜工作站,美國戴安公司);Alltech ELSD 3300蒸發(fā)光散射檢測器(美國奧泰科技有限公司)。
2.1 三種炮制規(guī)格浙貝母飲片有效成分含量比較
2.1.1 色譜條件 色譜柱:DIONEX Acclaim C18色譜柱(4.6mm×250mm,5um);流動相:乙腈-0.1%二乙胺(70:30);流速:1.0mL/min[1];ELSD 條件:漂移管溫度為 42℃,載氣(高純N2)流速為 1.0L/min。
2.1.2 對照品溶液制備 精密稱取貝母素甲2.92mg、貝母素乙2.16mg置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,制成含貝母素甲0.292g/L、貝母素乙0.216g/L對照品溶液。
2.1.3 供試品溶液制備 取各樣品粉末(過四號藥篩)約2g,精密稱定,置燒瓶中,加濃氨試液4mL浸潤1h,精密加入三氯甲烷-甲醇(4:1)的混合溶液40mL,稱定重量,混勻,置80℃水浴中加熱回流2h,放冷,再稱定重量,加上述混合溶液補足減失的重量,濾過。精密量取續(xù)濾液10mL,置蒸發(fā)皿中蒸干,殘渣加甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻過0.45μm微孔濾膜即得。每個樣品平行制備兩份供試液。
2.1.4 測定方法 分別精密吸取對照品溶液5μL、10μL、20μL,供試品溶液 10μL,注入液相色譜儀,每份樣品液進樣兩次測定,用外標法對數(shù)方程分別計算各樣品貝母素甲、貝母素乙的含量。
2.1.5 測定結(jié)果 分別進樣對照品溶液5μL、10μL、20μL各測定兩次,以進樣量(μg)對數(shù)值為橫坐標,峰面積對數(shù)值為縱坐標繪制標準曲線。得到貝母素甲的線性方程為Y=1.3032X+0.9163(r=0.09996);貝母素乙的線性方程為Y=1.3858X+0.0.8261(r=0.09997)。浙貝母的三種炮制規(guī)格中,鮮切無硫厚片的貝母素甲和貝母素乙的含量最高,見表1。
表1 三種炮制規(guī)格浙貝母飲片有效成分含量比較(n=2) %
2.2 煎煮方法對浙貝母煎膏得率和有效成分含量影響
2.2.1 浸泡時間對煎膏得率的影響 精密稱取浙貝母鮮切無硫厚片10g,分別置于燒杯中浸泡0.5h、1h、2h后煎煮兩次:第一次加10倍量的水煎煮30min,不時補足水量;第二次加8倍量的水煎煮15min,不時補足水量。煎煮后藥渣稱重,用剪刀小心剝離出白心部分,60℃烘干3h后稱重,比較白心部分占所取飲片的質(zhì)量比率;煎液分別用三層紗布過濾,合并濾液濃縮至適量置以干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上蒸干后,于105℃干燥3h,置干燥器中冷卻30min,迅速精密得到煎膏重量,并計算煎膏占飲片的含量(煎膏得率)。每種浸泡時間平行制樣兩份。
2.2.2 浸泡時間與對煎膏有效成分含量的影響 取前面制得的各煎膏加2%HCl溶解,酸水溶液以石油醚萃取,棄去石油醚層,以氨水調(diào)pH值至9以上后再以氯仿萃取,取氯仿萃取液合并后水浴蒸干,殘渣加甲醇使溶解并轉(zhuǎn)移2mL量瓶中,加甲醇至刻度[4],搖勻過0.45μm微孔濾膜即得供試品溶液。按同樣的色譜條件,取各供試品溶液10μL,注入液相色譜儀,每份樣品液進樣兩次測定,用外標法對數(shù)方程分別計算各樣品貝母素甲、貝母素乙的含量。
隨著浙貝母鮮切無硫厚片浸泡時間的延長,煎煮后藥渣的白心比率降低,而煎膏得率及其中貝母素甲、貝母素乙總含量均是增高,見表2,圖1。
表2 浸泡時間對浙貝母飲片煎膏得率和有效成分含量的影響(n=2) %
通過HPLC-ELSD法檢測浙貝母三種主流炮制規(guī)格的貝母素甲、貝母素乙含量,結(jié)果鮮切無硫厚片>硫熏厚片>鮮切烘干薄片,而且其單獨含量和總量都是上述的排序,初步判定,鮮切無硫厚片質(zhì)量最佳,硫磺熏蒸次之,后者雖然飲片外觀美白,有一定的防霉作用,但有效成分含量降低,殘留硫有損人體健康,不宜采用;鮮切烘干薄片有效成分含量最低,可能是浙貝母生物堿不耐高溫的原因,建議采用低溫干燥技術(shù)。
浙貝母的煎膏量與有效成分含量成正相關(guān)。浙貝母飲片在常規(guī)煎煮前應先浸泡1h以上,才能使有效成分溶出更多。建議將“厚片”改為“薄片”,避免飲片白心、硬心、煮不透,這樣既能提高臨床療效,又能節(jié)約資源。
本文通過摸索一系列的漂移管溫度和載氣流速,比較對照品溶液的圖譜響應值和峰面積大小,最終確定漂移管溫度42℃、載氣(高純N2)流速1.0L/min為最佳ELSD參數(shù)。
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:274.
[2]李萍,季暉,徐國鈞.貝母類中藥的鎮(zhèn)咳祛痰作用研究[J].中國藥科大學學報,1993,24(6):360.
[3]方錦霞,鄭師明,伍月紅.浙貝母炮制成厚片對藥材成分煎出量的影響[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2008,8(6):77.
[4]韋敏.不同炮制方法對浙貝母中貝母素含量的影響研究[J].中藥材,2008,31(8):1129.