HPLC 法同時(shí)測(cè)定復(fù)方阿托伐他汀鈣分散片中2組分含量

袁如彩，邵珠民，姬懷雪，王福貴#，邵茜（.徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，徐州市00；.徐州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，徐州市 004）

氨氯地平（Amlodipine）系二氫吡啶類鈣拮抗藥，其選擇性抑制鈣離子跨膜進(jìn)入平滑肌細(xì)胞和心肌細(xì)胞，對(duì)平滑肌的作用強(qiáng)于心??；絕對(duì)生物利用度為64%～90%，不受飲食影響，適用于治療高血壓以及心絞痛，尤其是非勞力性心絞痛[1]。在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[2]和文獻(xiàn)[3，4]報(bào)道中，苯磺酸氨氯地平片的含量測(cè)定主要采用高效液相色譜（HPLC）法。阿托伐他?。ˋtorvastatin）為第2代選擇性3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶抑制劑，通過(guò)抑制HMG-CoA還原酶和膽固醇在肝臟的生物合成而降低血漿中膽固醇和甘油三酯水平，是目前常用的調(diào)脂調(diào)血壓的藥物[5]，用于各型高膽固醇血癥和混合性高脂血癥治療以及冠心病和腦卒中的防治。阿托伐他汀鈣的含量測(cè)定方法已有文獻(xiàn)報(bào)道[6，7]。復(fù)方阿托伐他汀鈣分散片是由苯磺酸氨氯地平和阿托伐他汀鈣組成的制劑，是首個(gè)同時(shí)治療高血壓與高血脂2種不同疾病的復(fù)方制劑。為控制該復(fù)方制劑的質(zhì)量，筆者根據(jù)2種成分的性質(zhì)及上述文獻(xiàn)報(bào)道的測(cè)定方法，建立了采用HPLC法同時(shí)測(cè)定2組分含量的方法，結(jié)果表明所建立的方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方阿托伐他汀鈣分散片的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

HPLC儀，包括1525二元高壓梯度泵、717自動(dòng)進(jìn)樣器、2487雙波長(zhǎng)檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）；FA1004B分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；KS-80D型超聲波清洗機(jī)（寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司）；XW-80A旋渦混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；UV-2401PC紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司）。

苯磺酸氨氯地平（以下簡(jiǎn)稱氨氯地平）對(duì)照品（批號(hào)：20090201，純度：99.8%）、阿托伐他汀鈣（以下簡(jiǎn)稱阿托伐他?。?duì)照品（批號(hào)：20091201，純度：99.6%）、復(fù)方阿托伐他汀鈣分散片（批號(hào)：20090312、20100720、20101201，規(guī)格：每片含氨氯地平、阿托伐他汀分別為5、10 mg）均由某藥業(yè)有限公司提供；其他輔料均為藥用級(jí)；甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸二氫鉀、醋酸均為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters XTerra RP18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.03 moL·L－1磷酸二氫鉀溶液＝58∶42，流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；靈敏度：2.000 AUFS；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取氨氯地平、阿托伐他汀對(duì)照品各適量，分別置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；經(jīng)折算后得二者貯備液濃度分別為0.772 9、1.857 mg·mL－1，混勻。

2.2.2 供試品溶液的制備。取同一批號(hào)復(fù)方阿托伐他汀鈣分散片20片，精密稱定，置于干燥潔凈的研缽中充分研磨均勻，精密稱取（約相當(dāng)于氨氯地平5 mg）片粉，置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇充分溶解，超聲處理10 min，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液即得。

2.2.3 輔料溶液的制備。按復(fù)方阿托伐他汀鈣分散片處方比例混合各輔料，精密稱取相當(dāng)于復(fù)方阿托伐他汀鈣分散片1片所用輔料的量置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和輔料溶液適量，置于10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果氨氯地平的保留時(shí)間約為3.6 min，阿托伐他汀的保留時(shí)間約為5.8 min，輔料對(duì)主成分測(cè)定無(wú)干擾，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

準(zhǔn)確量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液50、100、200、400、800 μL，分別置于不同的10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋，搖勻，得氨氯地平濃度為3.86、7.73、15.46、30.92、61.83 μg·mL－1和阿托伐他汀濃度為9.28、18.57、37.14、74.28、148.56 μg·mL－1的溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，分別以氨氯地平、阿托伐他汀峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A氨氯地平＝ 59 146c+12 031（r＝0.999 9，n＝5）、A阿托伐他?。?1 975c－21 447（r＝0.999 9，n＝5）。結(jié)果，氨氯地平、阿托伐他汀檢測(cè)濃度線性范圍分別為3.86～61.83、9.28～148.56 μg·mL－1。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，用流動(dòng)相稀釋成含氨氯地平7.73 μg·mL－1、阿托伐他汀18.57 μg·mL－1的溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果，氨氯地平峰面積的RSD為0.49%；阿托伐他汀峰面積的RSD為0.31%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，用流動(dòng)相稀釋成適當(dāng)濃度，在室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，氨氯地平、阿托伐他汀峰面積的RSD分別為0.53%、0.38%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

按分散片處方組成精密稱取相當(dāng)于1片量的輔料共6份，每2份1組，每組分別按照氨氯地平/阿托伐他汀（5 mg/10 mg）的低（80%）、中（100%）、高（120%）濃度加入“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，置于50 mL容量瓶中，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液；取供試品溶液適量，置于10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表1（表中“氨”指氨氯地平，“阿”指阿托伐他?。?。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（sn＝6）

2.8 樣品的含量測(cè)定

取3批樣品各1份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定氨氯地平、阿托伐他汀的含量。結(jié)果，3批樣品中以氨氯地平計(jì)算，分別為標(biāo)示量的99.8%、98.7%和98.9%；以阿托伐他汀計(jì)算，分別為標(biāo)示量的102.1%、101.3%和101.5%。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別取氨氯地平、阿托伐他汀對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋，進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果氨氯地平在238、360 nm波長(zhǎng)處均有最大吸收，阿托伐他汀在245 nm波長(zhǎng)處有最大吸收；根據(jù)紫外吸收峰的高低和分散片中氨氯地平5 mg和阿托伐他汀10 mg的處方組成情況，最終選擇240 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果優(yōu)于文獻(xiàn)[4]報(bào)道的測(cè)定波長(zhǎng)237nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇

文獻(xiàn)[4]選擇用磷酸調(diào)pH＝2.5的磷酸鹽緩沖液組成流動(dòng)相，文獻(xiàn)[6]選擇pH為8.5的磷酸鹽緩沖液組成流動(dòng)相，但pH值較低或較高都對(duì)色譜柱損害較大。也有文獻(xiàn)[7]選擇醋酸調(diào)pH的醋酸鹽緩沖液，但醋酸易揮發(fā)使流動(dòng)相的pH值不穩(wěn)定，影響色譜峰的位置。最終，筆者選擇0.03 moL·L－1磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相的水相，測(cè)得其pH值約為4.8，分離結(jié)果較理想。

筆者曾選擇甲醇-水、乙腈-0.05%醋酸、乙腈-磷酸鹽緩沖液等作為流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，并調(diào)節(jié)各成分的不同比例。結(jié)果，乙腈-0.03 moL·L－1磷酸二氫鉀（58∶42）作為流動(dòng)相系統(tǒng)，色譜峰形較好，2組分完全分離，且片劑輔料不干擾2組分的分析。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的同時(shí)測(cè)定復(fù)方阿托伐他汀鈣分散片中2組分含量的方法，可較好地控制該分散片的質(zhì)量。

[1] 李家泰.臨床藥理學(xué)[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：1 363.

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