噠嗪酮類新衍生物的合成及其對血小板聚集的抑制作用

王曙東，陳興東，趙慶杰，鄒 燕，胡宏崗，俞世沖，汪 亭，柴曉云，任海祥(.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院，江蘇 南京 000;.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 00433)

血小板聚集在血栓形成中起著關(guān)鍵的作用，嚴重威脅人類生命健康的心腦血管疾病多數(shù)與血栓形成和血栓栓塞有著密切的聯(lián)系［1］。二氫噠嗪酮類化合物對抑制血小板聚集有較強的藥理活性，對二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)、血小板活化因子(PAF)和膠原引起的血小板聚集均有抑制作用。深入研究二氫噠嗪酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系，尋找高效低毒的藥物，是開發(fā)新型心腦血管系統(tǒng)疾病藥物的重要研究方向之一。

為進一步探討二氫噠嗪酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系，以期尋找藥理活性更強的血小板聚集抑制劑，筆者設(shè)計合成了10個6-(4-取代苯甲酰氨基苯基)-5-甲基-4，5二氫-3(2H)-噠嗪酮類衍生物。參考文獻方法［2～4］以乙酰苯胺為原料經(jīng)付克?；磻?yīng)、氰化、水解、水合肼環(huán)化反應(yīng)得6-(4-氨基苯基)-5-甲基-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮，將其與不同酰鹵反應(yīng)得目標化合物，并測定了其體外由ADP誘導(dǎo)的人血小板聚集的抑制。

1 化合物設(shè)計

由 6-(4-取代苯基)-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮類化合物的作用機制及其構(gòu)效關(guān)系可知［3］:二氫噠嗪酮環(huán)中酰胺氮上的氫必須處于游離狀態(tài)，烷基取代后活性降低或消失;二氫噠嗪酮環(huán)6位取代苯基的對位可以為吸電子基，也可以為供電子基，但必須處于對位。我們以CCI-17810和MCI-154為先導(dǎo)化合物(圖1)，保留了此類化合物中抗血小板聚集藥理活性的基本結(jié)構(gòu)二氫噠嗪酮，同時保持了二氫噠嗪酮環(huán)中酰胺氮上的氫必須處于游離狀態(tài)。通過對R基團的結(jié)構(gòu)改造，設(shè)計并合成了10個化合物，以期尋找具有較強抗血小板凝集活性的噠嗪酮類衍生物。其合成路線見圖2。

2 實驗部分

柳本顯微熔點測定儀，溫度未經(jīng)校正;元素分析用Elementa Varoo ELⅢ測定;紅外光譜用Shimadzu型紅外光譜儀測定;核磁圖譜用Bruker AC-300D型核磁共振儀測定，DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標;G薄層層析(TLC)用硅膠 H(10-40μ);PAM2-PPP型自動平衡血小板聚集儀。新西蘭大白兔，♂。ADP(美國Sigma公司);CCI-17810為6-{4-［(4苯乙?；?哌嗪基］苯基}-5-甲基-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮，由第二軍醫(yī)大學(xué)有機化學(xué)教研室合成。

2.1 6-［4-(氯乙酰氨基)苯基］-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮的制備

2.1.1 6-(4-氨基苯基)-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮的制備參考蔣勤等［2］研究方法由乙酰苯胺合成，mp 194～195 ℃，產(chǎn)率 61.28%(蔣勤等［2］研究表明，mp 194～195 ℃，收率 58.2%)。

2.1.2 6-［4-(氯乙酰氨基)苯基］-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮的制備 6-(4-氨基苯基)-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮 1.00 g(5.29 mmo1)，加入 N，N-二甲基甲酰胺(DMF)15 ml和三乙胺 0.74 ml，于 0～5℃緩慢滴加氯乙酰氯0.43 ml(5.30 mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)2 ml的混合液，加畢，室溫攪拌5 h，TLC(展開劑氯仿∶甲醇20∶1)跟蹤反應(yīng)，反應(yīng)完畢加適量水，有沉淀析出，過濾，水洗數(shù)次，用無水乙醇重結(jié)晶，干燥得 1.09 g，mp 232～235℃，收率 77.61%(文獻［2］報道，mp 233 ℃，收率70.12%)。

2.2 6-［4-(環(huán)己基乙酰氨基)苯基］-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮的制備 6-［4-(氯乙酰氨基)苯基］-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮 0.20 g(0.7 mmol)加入 8 ml DMF中，室溫條件下滴加環(huán)己胺 0.10 ml(0.9 mmol)，反應(yīng)4 h，TLC(展開劑氯仿∶甲醇20∶1)跟蹤，反應(yīng)畢，將反應(yīng)液傾入水中，放置3～4 h，過濾得化合物9a 0.18 g，收率84%。合成10個化合物的理化和波譜數(shù)據(jù)詳見表1。

表1 目標化合物的理化和波譜數(shù)據(jù)

2.3 藥理實驗 參考Born比濁法［2］，我們以先導(dǎo)化合物MCI-154，CCI-17 810為陽性對照，測定了所有目標化合物對ADP誘導(dǎo)的新西蘭大白兔血小板聚集的IC50值。取新西蘭大白兔心臟血，離心制備富含血小板的血漿(PRP)和貧含血小板的血漿(PPP);用PRP和PPP調(diào)整血小板聚集儀;取200 μl PRP于比色管中，加入 1 μl二甲亞砜(DMSO)，37℃溫孵10 min，攪拌40 s后，分別加入不同劑量的ADP，攪拌下觀察5 min內(nèi)血小板的最大聚集程度，從而摸出誘導(dǎo)劑的閾劑量;再將供試品10、5、1、0.5、0.25 μmol/L 的 DMSO 溶液，加入到含200 PRP的比色管中，37℃溫孵10 min，攪拌40 s后，加入閾劑量的ADP，攪拌下觀察5 min內(nèi)血小板的最大聚集程度，計算血小板聚集的抑制百分率并用回歸法求出IC50。結(jié)果見表2。

表2 目標化合物的生物活性數(shù)據(jù)(μmol/L)

3 討論

所合成的10個目標化合物均未見文獻報道，其結(jié)構(gòu)經(jīng)元素分析、紅外光譜和核磁共振譜所證實，數(shù)據(jù)見表1。在以乙酰苯胺制備中間體6-(4-氨基苯基)-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮時，反應(yīng)中間產(chǎn)物可不經(jīng)精制，直接投入下步反應(yīng)，簡化了操作。在目標化合物制備過程中，把反應(yīng)液直接傾入到水中，過濾即得目標化合物，避免了文獻報道的柱層析等復(fù)雜的操作。初步的體外藥理結(jié)果表明(表2)，所有目標化合物都有不同程度的體外抑制ADP誘導(dǎo)的新西蘭大白兔血小板聚集作用，且都強于對照化合物MCI-154和CCI-17810。其中化合物 9f的活性最強，IC50為MCI-154的25倍，是CCI-17810的33倍，此外，化合物9b、9c、9j也顯示了較強的活性?；衔?f等的作用機制及其他藥理作用還有待于進一步的研究。從上面的藥理活性數(shù)據(jù)來看，R基團引入取代雜環(huán)可以增強其血小板聚集的抑制作用，但由于目標化合物的數(shù)目有限，難以得出構(gòu)效關(guān)系的結(jié)論，有待于進一步的研究。

［1］Bristol JA，Sircar L，Moos WH，et al.Cardiotonic agents.1.4，5-Dihydro-6-［4-(1H-imidazol-1-yl)phenyl］-3(2H)-pyridazinones:novel positive inotropic agents for the treatment of congestive heart failure［J］.J Med Chem，1984，27(9):1099.

［2］蔣 勤，孫常晟.6-(4-取代苯基)-4，5-二氫-3(2H)-噠嗪酮類化合物的合成及其抑制血小板的作用［J］.藥學(xué)學(xué)報，1990，25(8):598.

［3］Mikashima H，Nakao T，Goto K.Y-590(A new pyridazinone derivative)，a potent anti-thrombotic agent-I.Effect on platelet function［J］.Thromb Res，1983，31(4):599.

［4］王恩思，沈家聰.新型強心藥匹莫苯的合成［J］.中國藥物化學(xué)雜志，1997，7(3):185.

［5］Bom GVR.Aggregation of bloodplatelets by adenosine diphosphate and its reversal［J］.Nature，1962，194(4832):927.