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    山楂葉總黃酮對(duì)缺血性腦卒中活血化瘀作用研究*

    2011-08-02 02:24:10胡敏張曉丹涂映陳敏萬(wàn)云輝
    關(guān)鍵詞:血瘀黃酮

    胡敏 張曉丹 涂映 陳敏 萬(wàn)云輝

    (江西護(hù)理職業(yè)技術(shù)學(xué)院 南昌330029)

    心腦血管疾病是目前發(fā)病率最高、對(duì)人類健康威脅最為嚴(yán)重的疾病之一。山楂葉總黃酮(flavone mixture of crataegus leaves,F(xiàn)MCL)為花期山楂葉中提取的抗自由基組分,淺棕色至黃色粉末,味澀微苦,含黃酮苷類、葡荊牡黃酮、葒草素、異葒草素、山楂納酰及去乙酰山楂納酰等。已有研究證實(shí)山楂葉總黃酮具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、降血壓、強(qiáng)心、降血脂等心血管方面的作用[1]。我們采用血瘀大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)P停^察山楂葉總黃酮對(duì)血栓形成、血小板聚集、全血和血漿黏度的影響,探討山楂葉總黃酮通過(guò)改善凝血狀態(tài)發(fā)揮其腦保護(hù)作用的機(jī)理,為其進(jìn)一步深入研究和開發(fā)提供了理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 藥品及試劑 注射用山楂葉總黃酮(益心酮注射液)批號(hào):090510,由長(zhǎng)春三九生物制藥提供;舒血寧注射液(銀杏葉提取物注射液)萬(wàn)榮三九藥業(yè)有限公司提供,批號(hào)090620。

    1.2 動(dòng)物 Wistar大鼠,由南昌大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。

    1.3 儀器 CNOOOO5256型6010紫外分光光度計(jì)(安捷倫分析儀器);GF-D200型半自動(dòng)生化分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司);BV-100型血液流變測(cè)試儀,北京泰諾德新技術(shù)研究所;D-37520型超速冷凍離心機(jī),德國(guó)索孚。

    1.4 分組及造模 取60只雄性大鼠,體重280~300 g,按體重隨機(jī)分為六組,每組10只,分別為:空白對(duì)照組、血瘀模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(注射舒血寧注射液0.9 mL/kg)、山楂葉總黃酮高劑量組(60 mg/kg)、山楂葉總黃酮中劑量組(30 mg/kg)、山楂葉總黃酮低劑量組(15 mg/kg)。陽(yáng)性對(duì)照組及山楂葉總黃酮高、中、低劑量組連續(xù)給藥7 d,空白對(duì)照組及模型組腹腔注射等劑量的生理鹽水。于末次給藥30 min后,造血瘀模型。造模方法:皮下注射0.1%腎上腺素0.07 mL/100 g,共兩次,每次間隔4 h,并在此兩次間(前后各2 h)將大鼠浸入冰水中5 min,然后動(dòng)物禁食不禁水[2]??瞻讓?duì)照組動(dòng)物不造血瘀模型。

    1.5 觀察及檢測(cè)指標(biāo)

    1.5.1 血瘀大鼠的全血黏度和血漿黏度的測(cè)定造模后次晨,動(dòng)物腹腔注射水合氯醛350 mg/kg麻醉,腹主動(dòng)脈取血,肝素抗凝置血液黏度計(jì)上測(cè)定不同切變率時(shí)的全血黏度。上述抗凝血測(cè)完全血黏度所余血液以2 000 r/min離心10 min,取上清測(cè)血漿黏度。

    1.5.2 血瘀大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間的測(cè)定 麻醉后將大鼠固定于固定臺(tái)上,切開頸部皮膚,分離右側(cè)頸總動(dòng)脈約15 mm,將實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成測(cè)定儀的刺激電極及溫度傳感器探頭置于動(dòng)脈上,用2 mA的電流刺激血管7 min以損傷動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,隨著動(dòng)脈管腔內(nèi)血栓逐漸形成,血流逐漸被阻斷,動(dòng)脈遠(yuǎn)端溫度逐漸下降,當(dāng)血流完全阻斷時(shí),溫度突降,儀器報(bào)鳴,此時(shí)儀器顯示時(shí)間即為體內(nèi)血栓形成時(shí)間。

    1.5.3 ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率的測(cè)定 取50只雄性大鼠,體重200~220 g,隨機(jī)分為五組(每組10只):空白對(duì)照組(給予生理鹽水),陽(yáng)性對(duì)照組(阿司匹林7.0 mg/kg),山楂葉總黃酮高、中、低劑量組連續(xù)給藥7 d。末次給藥后禁食不禁水12~18 h,腹腔注射水合氯醛350 mg/kg麻醉,腹主動(dòng)脈取血注入放有枸櫞酸鈉溶液的硅化離心管中(枸櫞酸鈉與血比例1:9),將血液與抗凝劑混合后1 000 rpm離心10 min,得富血小板(PRP),然后再3 000 rpm離心15 min,得貧血小板(PPP)。于血小板聚集儀上測(cè)定ADP誘導(dǎo)的血小板最大聚集率。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 11.5 for windows統(tǒng)計(jì)軟件包分析數(shù)據(jù),所有數(shù)據(jù)均表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±S),采用t檢驗(yàn)法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 山楂葉總黃酮對(duì)血瘀大鼠全血黏度及血漿黏度的影響 與空白對(duì)照組比較,模型組全血高、中、低切黏度均明顯增加(P<0.01或P<0.001),表明血瘀模型成立。與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組及山楂葉總黃酮大劑量、中劑量組的全血黏度均有所下降,陽(yáng)性對(duì)照組和山楂葉總黃酮組的血漿黏度也有所下降。見表1。

    表1 山楂葉總黃酮對(duì)血瘀大鼠全血黏度與血漿黏度的影響 (±S) mPa·s

    表1 山楂葉總黃酮對(duì)血瘀大鼠全血黏度與血漿黏度的影響 (±S) mPa·s

    注:與模型組比較,*P <0.05,**P <0.01;與空白對(duì)照組比較,△P <0.001,△△P <0.01。

    全血黏度組別 n 劑量(mg/kg)血漿黏度9/s 30/s 100/s空白對(duì)照組 10 - 6.03±1.88 4.71±0.66 3.66±0.35 0.85±0.09模型組 10 - 10.16±2.13△ 6.83±1.00△△ 5.15±0.36△△ 1.13±0.14陽(yáng)性對(duì)照組 10 0.9 mL/kg 7.28±1.48** 5.53±0.45* 4.04±0.22* 1.01±0.21*10 60 8.31±1.59** 5.77±0.52* 4.15±0.43** 1.02±0.12*山楂葉總黃酮組 10 30 8.62±1.00* 5.97±0.7 4.43±0.40 1.09±0.10*10 15 8.79±1.21 6.52±0.34 4.55±0.68 1.10±0.08

    2.2 山楂葉總黃酮對(duì)血瘀大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間的影響 與空白對(duì)照組比較,模型組血栓形成時(shí)間明顯縮短(P<0.001)。與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組及山楂葉總黃酮大、中劑量組均能明顯延長(zhǎng)體內(nèi)血栓的形成時(shí)間,山楂葉總黃酮小劑量組也能延長(zhǎng)血栓形成時(shí)間,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

    表2 山楂葉總黃酮對(duì)血瘀大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間的影響 (±S)

    表2 山楂葉總黃酮對(duì)血瘀大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間的影響 (±S)

    注:與空白對(duì)照比較,△P<0.001;與模型組比較,*P <0.05,**P <0.01。

    組別 n 劑量(mg/kg) 體內(nèi)血栓形成時(shí)間(min)空白對(duì)照組 10 - 13.51±2.15模型組 10 - 10.15±1.31△陽(yáng)性對(duì)照組 10 0.9 mL/kg 12.90±2.31**10 60 12.01±1.34**山楂葉總黃酮組 10 30 11.85±1.66*10 15 11.36±1.50

    2.3 山楂葉總黃酮對(duì)大鼠血小板聚集率的影響與空白對(duì)照組比較,陽(yáng)性對(duì)照組可以明顯抑制血小板聚集,山楂葉總黃酮大劑量和中劑量對(duì)血小板的聚集也有一定程度的降低。見表3。

    表3 山楂葉總黃酮對(duì)大鼠血小板聚集率的影響 (±S)

    表3 山楂葉總黃酮對(duì)大鼠血小板聚集率的影響 (±S)

    注:與空白對(duì)照組比較,*P<0.05,**P <0.01。

    組別 n 劑量(mg/kg) 血小板聚集率(%)空白對(duì)照組 10 - 67.33±11.86陽(yáng)性對(duì)照組 10 0.9 mL/kg 49.22±15.01**10 60 52.41±7.96*山楂葉總黃酮組 10 30 57.53±9.07*10 15 61.25±9.24

    3 討論

    中醫(yī)理論認(rèn)為,缺血性中風(fēng)的發(fā)展演變主要是由于瘀血痹阻腦脈并進(jìn)一步派生出痰飲、風(fēng)熱、瘀毒等病理毒素,從而加劇腦脈病變,閉塞不通從而引發(fā)或加重各種臨床癥狀,甚至成為不可逆的腦缺血損傷[3]。血液流變學(xué)的研究?jī)?nèi)容涵蓋了血栓形成的三種要素:血液成分、血液狀態(tài)和血管壁狀況,因此與缺血性腦血管病有著密切的聯(lián)系。血液流變學(xué)因素與血液的高凝狀態(tài)和腦血流灌注不良有關(guān),大多數(shù)的腦缺血患者血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)異常。隨著病情的好轉(zhuǎn),腦缺血患者的血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)也逐漸好轉(zhuǎn)。在血液流變學(xué)中,全血黏度是反映血液流變性的一個(gè)重要指標(biāo),患者腦缺血后全血黏度和血漿黏度皆升高,尤其全血黏度低切升高更為顯著[4~5]。說(shuō)明全血黏度對(duì)臨床診斷缺血性腦血管病及判斷其嚴(yán)重程度具有重要意義。腦缺血時(shí),由于腦組織的缺血缺氧,造成腦內(nèi)能量物質(zhì)的缺乏,細(xì)胞膜的流動(dòng)性下降,膜的脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強(qiáng),紅細(xì)胞變形性下降,在毛細(xì)血管內(nèi)的流動(dòng)性降低,血流速度減慢,紅細(xì)胞聚集,最終導(dǎo)致血黏度上升,血流淤滯,引起一系列病理變化。除了紅細(xì)胞的作用外,血小板的粘附和聚集增強(qiáng)也可造成血黏度的上升。有研究顯示[6]血小板功能變化是腦梗死發(fā)病的因素之一,還是造成腦梗死之后缺血性加重的主要原因之一。Uchiyama[7]報(bào)道腦梗死、一過(guò)性腦缺血患者不僅血小板粘附性、聚集性增加,而且參與粘附反應(yīng)的凝血因子增多,因此認(rèn)為血小板的高反應(yīng)性(粘附、聚集、釋放增強(qiáng))與缺血性腦血管病的發(fā)生有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示山楂葉總黃酮高、中劑量對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集有一定的抑制作用,表明山楂葉總黃酮有降低血小板聚集、抗血栓形成的作用。綜上所述,山楂葉總黃酮對(duì)缺血性腦卒中具有保護(hù)作用,其機(jī)制是通過(guò)降低血黏度、抑制血小板聚集實(shí)現(xiàn)的。

    [1]董英杰,張乃先,張明壘.大果山楂葉黃酮成分研究[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1996,13(1):31

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    [6]張新江,周大柱.血小板形態(tài)變化與腦梗死[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)·腦血管疾病分冊(cè),1997,5(4):197

    [7]Uchiyama S,Takeuchi M,Osawsa M,et al.Platelet function tests in thromboic cerebrovascular disorders[J].Stroke,1983,14(4):511-517

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