磷酸二酯酶選擇性抑制劑吡拉米司特抗炎作用的實驗研究

許 格，李 軍

(四川省廣元市第二人民醫(yī)院藥劑科，四川 廣元 628017)

磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDF4)抑制劑通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)第二信使cAMP及cGMP的水平，對細胞活動起重要調(diào)控作用，從而發(fā)揮多種生物效應(yīng)［1］。近年來，選擇性PDF抑制劑的潛在價值被重新認識，而具有抗炎和平滑肌舒張活性的磷酸二酯酶Ⅳ(PDF4)抑制劑的治療用途同樣得到學(xué)者的重視［2］。本研究采用角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠腹腔中性粒細胞聚集及小鼠足趾腫脹模型，觀察腹腔灌洗液白細胞總數(shù)、中性粒細胞數(shù)量，以及足趾腫脹程度，為新一類抗炎免疫調(diào)節(jié)藥物治療炎癥性疾病和哮喘提供理論和實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 健康ICR小鼠50只，雄性，體重(20±5)g;角叉菜膠(遼寧省約物研究所提供)溶于生理鹽水中，配置成10 g/L的溶液，超聲2 h;吡拉米司特(相對分子質(zhì)量381.26，北京昭衍中心，批號:20010411)懸液加入10 g/L羥丙基甲基纖維素溶液中，配成所需懸液;吲哚美辛(SIGMA公司，批號:065K1378)加人10 g/L羥丙基甲基纖維素溶液中，配成所需懸液;羥丙基甲基纖維素(HPMC);肝素(華美生物工程公司，批號:0470);C011型928560光學(xué)顯微鏡(日本OLYmpus公司);Eppendorf高速冷凍離心機(德國Eppendorf公司);灌洗液:配置含5 IU/L肝素的生理鹽水，臨用前配置。

1.2 分組與模型的建立 50只小鼠隨機分為6組，分別為正常組、模型組、吡拉米司特低、中、高3個劑量組和吲哚美辛組。

1.2.1 小鼠腹腔炎模型 除正常組外，另5組均灌胃給藥PDF4(劑量0.2 ml/10 g)，均用角叉菜膠2 mg/kg每只0.5 ml腹腔注射致炎。致炎8 h后用相同劑量再灌胃給PDF4一次。模型組以10 g/L羥丙基甲基纖維素懸液灌胃，吡拉米司特低、中、高3個劑量組分別以吡拉米司特1、3、10 mg/kg懸液灌胃;吲哚美辛組以吲哚美辛懸液2 mg/k灌胃。

1.2.2 小鼠足趾腫脹模型 除正常組外，其余5組均灌胃給藥PDF4(劑量0.2 ml/10 g)，均用1%角叉菜膠于右側(cè)足趾皮下注射，每個足趾0.05 ml;生理鹽水于左側(cè)足趾皮下注射，每個足趾0.05 ml。于足趾致炎4h后采用頸椎脫臼法處死小鼠，并于膝關(guān)節(jié)中縫處分別剪下左右足趾，分別稱重，比較取其差值(mg)。

1.3 數(shù)據(jù)觀測 ①腹腔致炎24 h后采用頸椎脫位法處死小鼠。每只小鼠腹腔注射灌洗液5 ml，輕揉片刻后吸出腹腔灌洗液。將腹腔灌洗液低溫2000 r.min－1離心10 min后，棄去上清液，用移液器打勻后涂片。待涂片在室溫下干后，Wright-Giemsa染色10 min。用自來水小心將染料沖洗干凈，在光學(xué)顯微鏡40倍鏡下進行白細胞分類計數(shù)。②足趾腫脹模型組于足趾致炎4 h后采用頸椎脫位處死小鼠并于膝關(guān)節(jié)中縫處分別剪下左右足趾，分別稱重，比較其差值(mg)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標準差表示，采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件處理，t檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 吡拉米司特對角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠腹腔炎的影響 表1顯示，角叉菜膠致炎的模型組與正常組比較，腹腔灌洗液白細胞總數(shù)明顯升高(P＜0.01)，中性粒細胞數(shù)明顯上升(P＜0.01)吡拉米司特3及10 mg/kg劑量、吲哚美辛2 mg/kg可明顯減少白細胞總數(shù)(P＜0.05)和中性粒細胞數(shù)(P＜0.01)，但吡拉米司特1 mg/kg劑量組與模型組相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。吡拉米司特呈劑量依賴性抑制中性粒細胞數(shù)。

表1 吡拉米司特對角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠腹腔炎的抑制作用和對角叉菜膠致炎小鼠足趾腫脹的影響

2.2 吡拉米司特對角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠足趾腫脹的影響 模型組足趾腫脹程度明顯增高，與正常組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。吡拉米司特3和10 mg/kg劑量、吲哚美辛組足趾腫脹程度明顯減輕，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);吡拉米司特l mg/kg劑量組雖然足趾腫脹程度有所降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

本實驗用角叉菜膠小鼠腹腔注射來建立腹腔炎模型，具有制備方便、模型成熟時間短(白細胞總數(shù)和中性粒細胞數(shù)量均在24 h后達到高峰)等特點，其主要特點是中性粒細胞數(shù)量明顯增高(本次實驗中中性粒細胞達到了70%的比例)，通過檢測中性粒細胞的數(shù)量可以有效地評價急性炎癥的程度。用角叉菜膠制備足趾腫脹模型是一種常用且較為理想的炎癥模型，其腫脹程度在制備4h后最為明顯，并且檢測方便。為避免因個體差異引起的誤差，通過比較足趾腫脹的程度來驗證和分析吡拉米司特藥效學(xué)作用。

孫超淵等［3］報道，吡拉米司特在多種動物模型上能抑制白細胞的數(shù)量。本實驗證明了吡拉米司特對角叉菜膠誘導(dǎo)的腹腔炎模型，能有效地抑制中性粒細胞的募集，并且對由角叉菜膠誘導(dǎo)的足趾腫脹模型有明顯的抑制和治療作用，證實PDF4抑制劑具有明顯抗炎、抗過敏、抗血小板活化作用。有人認為PDF4抑制劑的抗炎仵用僅次于腎上腺皮質(zhì)激素［4，5］。本實驗結(jié)果顯示，吡拉米司特可以明顯呈劑量依賴性降低致炎小鼠的白細胞總數(shù)及中性粒細胞數(shù)量和比例，可以明顯降低致炎小鼠的足趾腫脹程度。因此，吡拉米司特能抑制白細胞的激活與游走和中性粒細胞的募集，對炎癥反應(yīng)有較好的抑制和治療作用;對角叉菜膠制備的足趾腫脹模型也有較好的抑制作用，具有開發(fā)價值。

［1］ Richard FJ.Regulation of meiotic maturation［J］.J Anim Sci，2007，85(13 Suppl):E4-6.

［2］祁紅，張勇，陳紅專.新型磷酸二酯酶Ⅳ抑制劑Ariflo對內(nèi)皮素－1誘發(fā)離體人子宮平滑肌收縮的影響［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2004，9(3):299-301.

［3］孫超淵，張莉，程克棣，等.磷酸二酯酶4研究進展［J］.中國藥理學(xué)通報，.2006，22(10):1161-1166.

［4］Palmer MJ，Bell AS，F(xiàn)ox DN，et al.Design of second generation phosphodiesterase5inhibitors［J］.Curr Top Med Chem，2007，7(4):405-419.

［5］Omori K，Kotera J.Overview of PDEs and their regulation［J］.Circ Res.2007，100(3):309-327.