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    紅花提取物對腎缺血再灌注損傷的影響

    2011-07-30 08:20:36曹譯心張翠薇馬躍榮
    中國醫(yī)藥導報 2011年25期
    關鍵詞:紅花低劑量提取物

    曹譯心 ,張 旭 ,張翠薇 ,何 穎 ,馬躍榮

    1.瀘州醫(yī)學院組織學與胚胎學教研室,四川瀘州 646000;2.瀘州醫(yī)學院病理教研室,四川瀘州 646000;3.瀘州醫(yī)學院藥學院中藥學實驗室,四川瀘州 646000

    腎臟缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,IRI)是常見的臨床疾病,可導致急性腎功能衰竭。紅花是治療慢性腎臟疾病常用的活血化瘀藥物,有一定的臨床療效,但在IRI方面尚無研究。本研究建立IRI大鼠模型并利用紅花提取物進行干預,旨在觀察紅花提取物是否對IRI具有保護作用。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物

    動物為清潔級、健康9周齡SD大鼠,雌雄不拘,體重180~220 g,均由瀘州醫(yī)學院動物實驗中心提供。

    1.2 主要試劑

    紅花注射液(主要成分:紅花黃色素、紅花醌苷、紅花素、新紅花苷,20 ml/支;十堰麥克制藥有限公司)。大鼠血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)試劑盒(購自上海碧云天生物技術有限公司)、內皮素-1(ET-1)放免試劑盒(購自北京經緯博恒生物科技開發(fā)有限公司)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和血丙二醛(MDA)檢測試劑盒(南京建成生物醫(yī)學公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 實驗分組 將40只大鼠隨機分為4組(每組各10只):缺血再灌注組(陽性對照組)、假手術組(陰性對照組)、紅花低劑量干預組和紅花高劑量干預組。按照文獻[1]的方法處理如下:均以戊巴比妥鈉(5 mg/kg)腹腔麻醉,腹部正中切口,暴露雙側腎,之后各組分別處理如下,①缺血再灌注組,缺血前10 min,腎靜脈給予等容積生理鹽水,夾閉雙側腎動脈,60min后去除動脈夾,同法再給生理鹽水,縫合切口。24 h后各組大鼠以1.5%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔麻醉后,腹部正中切開,于下腔靜脈采血;同時取雙腎。②假手術組,不夾閉雙側腎動脈,不給生理鹽水,其余同缺血再灌注組。③紅花低劑量干預組和紅花高劑量干預組分別以10 ml/kg和20 ml/kg的紅花注射液代替生理鹽水,其余同缺血再灌注組。

    1.3.2 檢測方法 采集的血液經離心后取血清按試劑盒方法分別測定Scr、BUN和MDA的的含量。取一側腎按其重量加生理鹽水制成10%的組織勻漿,按試劑盒方法測定SOD,同時用放免法測定腎組織ET-1含量。取另一側腎進行石蠟切片行HE染色。

    1.3.3 腎臟的病理學觀察 腎組織以中性緩沖甲醛固定,石蠟包埋,切成4 μm厚的切片,行HE染色,用普通光學顯微鏡檢查。觀察腎缺血再灌注后腎小球、腎小管充血、變性、壞死及白細胞浸潤等病理變化。

    1.4 統(tǒng)計學分析

    采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析,計量資料數據以均數±標準差(±s)表示,多組間比較采用方差分析,組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 腎功能指標的變化

    假手術組Scr及BUN含量均低于其他各組,差異有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01);缺血再灌注組和紅花低劑量干預組之間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);但紅花高劑量干預組明顯低于缺血再灌注組和和紅花低劑量干預組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 見表1。

    表1 各組大鼠Scr和BUN的變化(±s)

    表1 各組大鼠Scr和BUN的變化(±s)

    注:與假手術組比較,aP<0.01;與缺血再灌注組和紅花低劑量干預組比較,bP<0.05

    組別 例數10101010假手術組缺血再灌注組紅花低劑量干預組紅花高劑量干預組Scr(μmol/L)85.59±11.37722.44±77.02a 673.06±102.59a 485.57±77.90ab BUN(mmol/L)6.74±1.0249.54±3.39a 45.11±6.74a 34.05±4.04ab

    2.2 ET-1、SOD和MDA檢測

    ET-1的含量水平,假手術組均低于其他各組,差異有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01);缺血再灌注組和紅花低劑量干預組之間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);紅花高劑量干預組明顯低于缺血再灌注組和和紅花低劑量干預組 (P<0.05)。SOD的含量水平,假手術組均高于其他各組(P<0.01);紅花低劑量干預組和紅花高劑量干預組之間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但二者都同時高于缺血再灌注組(P<0.05)。MDA的含量水平,假手術組均低于其他各組(P<0.01);紅花低劑量干預組和紅花高劑量干預組之間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但二者都同時低于缺血再灌注組(P<0.05)。見表2。

    表2 各組大鼠ET-1、SOD和血MDA的變化(±s)

    表2 各組大鼠ET-1、SOD和血MDA的變化(±s)

    注:與假手術組比較,aP<0.01;與缺血再灌注組和紅花低劑量干預組比較,bP<0.05;與缺血再灌注組比較,cP<0.05

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    2.3 病理組織學改變

    除假手術組外,各組均出現不同程度的腎小球毛細血管擴張充血,腎小球囊腔擴張,腎小管上皮細胞空泡樣變性,近曲小管管壁腫脹,管腔變小及少量炎癥細胞浸潤。其中,以缺血再灌注組最重,甚至還出現腎小管上皮細胞顆粒樣變以及明顯的腎小管壞死、管腔堵塞和刷狀緣脫落。此外,腎小管腔可見炎癥細胞和蛋白管型,而紅花高劑量干預組最輕。見圖1。

    圖1 各組大鼠腎組織病理學改變(HE染色,×400)

    3 討論

    IRI屬急性腎損傷的范疇,在臨床上十分常見,但目前尚無有效的防治方法。IRI所致的急性腎功能衰竭在臨床較為常見,IRI系氧自由基引起的微循環(huán)血流障礙以及由細胞因子介導的對內皮細胞及實質細胞的免疫損傷。缺血期間,首先造成器官的ATP儲備衰竭,繼而通過無氧代謝提供能量,表現為糖酵解增加。灌注早期,大量注入的血氧一時不能充分利用,作為各種氧化酶的底物而產生氧自由基。再灌注時往往存在紅細胞外滲,同時紅細胞又易受到氧自由基的攻擊,出現形態(tài)改變和聚積,導致血液黏度增加,紅細胞溶解,進而產生大量血紅蛋白。血紅蛋白通過損傷脂質雙分子層、細胞骨架、細胞代謝酶及DNA,并促進氧自由基產生,從而加重內皮細胞損傷[2]。本研究結果顯示缺血再灌注后大鼠的Scr和BUN顯著上升,說明其腎功能顯著減退,表明IRI對腎功能影響顯著。

    紅花屬菊科植物,其主要活性成分有紅花黃素、脂肪酸、黃酮醇類、紅花多糖、鏈烷雙醇、豆甾醇和紅花胺等。紅花有活血通經、去瘀止痛的功能[3]。紅花提取物能抑制血小板聚集,降低血液黏度,其有效成分紅花黃色素能延長凝血酶原時間和凝血酶時間[4]。

    SOD是廣泛存在于需氧物體內的一種金屬酶,能催化超氧陰離子自由基產生歧化反應,是體內最為重要的自由基清除劑??梢云缁疧2生成H2O2,從而保護細胞不受毒性氧自由基損傷[5]。MDA是機體內氧自由基代謝中產生的脂質過氧化產物,它可以反映該體系中脂質過氧化自由基的存在及反應的程度,引發(fā)細胞膜大分子物質(如蛋白、脂質等)相互交聯、聚合,從而加重細胞膜變性和功能障礙[6]。

    本實驗結果顯示相對假手術組,缺血再灌注組SOD含量顯著減少,MDA含量顯著升高,BUN、Scr明顯增加。表明缺血再灌注后,腎組織因為SOD的顯著減少,清除氧自由基的能力降低,導致腎結構被破壞,同時功能下降。同時本實驗應用紅花提取物干預缺血再灌注損傷過程,發(fā)現相對沒有使用紅花提取物干預的組分,干預組SOD含量較高,MDA含量明顯較低,而對應的BUN、Scr明顯較低,說明紅花提取物可能能在一定程度上維持缺血性腎臟組織中的SOD活性,進而可以保持較高的氧自由基清除能力而起到保護腎臟的作用。

    綜上所述,本研究發(fā)現紅花提取物可以減輕IRI的程度,可改善相應的腎功能。但其具體機制有待進一步研究。

    [1]謝智慧,曹瑞,陳宗,等.高壓氧干預對大鼠腎缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究[J].中華物理醫(yī)學與康復雜志,2010,32(2):98-101.

    [2]梁鋼,黃巨恩,張肅,等.表沒食子兒茶素沒食子酸酯對腎缺血再灌注損傷的保護作用[J].中國藥理學通報,2003,19(1):97-100.

    [3]郭曉鳳.中藥紅花的研究進展[J].中國民族民間醫(yī)藥,2008,17(2):73-74.

    [4]賈菲菲,柴秋彥,賈俊.紅花黃色素B抗凝作用研究[J].山西中醫(yī)學院學報,2009,10(3):13-15.

    [5]楊佳丹,董志,歐陽凈.兩維來司鈉對實驗性大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用[J].重慶醫(yī)科大學學報,2007,32(6):578-580.

    [6]Patel NS,Sharples EJ,Cuzzocrea S,et al.Pretreatment with EPO reduces the injury and dysfunction caused by ischemia/reperfusion in the mouse kidney in vivo[J].Kidney Int,2004,66(3):983-989.

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