養(yǎng)腎補(bǔ)血顆粒薄層色譜定性鑒別研究

許 梅，郭 敏

(重慶市江北區(qū)中醫(yī)院，重慶 400020)

養(yǎng)腎補(bǔ)血顆粒由人參、三七、制何首烏、淫羊藿、五味子、靈芝、女貞子、熟地黃[1]等10味中藥組方，是我院使用多年的醫(yī)院協(xié)定處方制劑，具有養(yǎng)腎補(bǔ)血、益氣的功效，對(duì)元?dú)馓潛p、精血不足所致的眩暈耳鳴、失眠健忘、性欲減退、腰膝痿軟、神倦乏力等癥具有較好的治療作用。該制劑原無(wú)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為了確保產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用薄層色譜法對(duì)制劑中的人參、三七、制何首烏、淫羊藿進(jìn)行了定性鑒別研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

ZF－1型三用紫外分析儀(上海市顧村電光儀器廠);定量毛細(xì)管(美國(guó)Drummond公司);939薄層制板器(重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠);ZFQ－85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海醫(yī)械專(zhuān)機(jī)廠);CQ－100型超聲波清洗機(jī)(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠);硅膠G(青島海洋化工有限公司)。羧甲基纖維素納(上海化學(xué)試劑采購(gòu)站);人參皂苷Rg1對(duì)照品(批號(hào)為0703－200016)，人參皂苷 Rb1對(duì)照品(批號(hào)為0704－200013)，三七皂苷 R1對(duì)照品(批號(hào)為110745－200312)，淫羊藿苷對(duì)照品(批號(hào)為0703－200111)，何首烏對(duì)照藥材(批號(hào)為0934－9704)，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;養(yǎng)腎補(bǔ)血顆粒(本院制劑室生產(chǎn));其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 人參[2]、三七[3]薄層色譜鑒別

取本品內(nèi)容物10 g，研細(xì)，加三氯甲烷50 mL，置水浴上加熱回流30 min，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加甲醇50 mL，置水浴上加熱回流2 h，濾過(guò)，濾液置水溶上蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽合的正丁醇振搖提取3次(20，20，10 mL)，合并正丁醇液，用水洗滌2次，每次50 mL，分取正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，取上清液作為供試品溶液。取不含人參、三七的陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照2005年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10 μL、對(duì)照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水(15∶40∶25∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的3個(gè)紫紅色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜中則無(wú)此斑點(diǎn)(圖1 A)。

2.2 淫羊藿[4]薄層色譜鑒別

取本品內(nèi)容物10 g，研細(xì)，加乙醇40 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取不含淫羊藿的陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照2005年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10 μL、對(duì)照藥品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水(10∶1∶1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在105℃加熱約2～5 min，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜中則無(wú)此斑點(diǎn)(圖 1 B)。

2.3 制何首烏[5]薄層色譜鑒別

取本品內(nèi)容物8 g，研細(xì)，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)酉←}酸10 mL使溶解，置水浴上加熱30 min，放冷，用乙醚振搖提取3次，每次15 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)右颐? mL使溶解，作為供試品溶液。取不含制何首烏的陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。取何首烏對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照2005年版《中華人民共和國(guó)藥典(一部)》附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10 μL、對(duì)照藥材溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。在105℃加熱約5 min，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜中則無(wú)此斑點(diǎn)(圖1 C)。

圖1 薄層色譜圖

3 討論

本品組方較復(fù)雜，干擾因素較多。筆者經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，選用多種展開(kāi)系統(tǒng)和純化方法，以及樣品的不同取樣量，摸索出處方中人參、三七、制何首烏、淫羊藿4味藥材的薄層色譜定性鑒別方法。方法分離度高、重現(xiàn)性好、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可有效控制養(yǎng)腎補(bǔ)血顆粒的質(zhì)量。

筆者對(duì)方中五味子、女貞子和靈芝藥材成分也進(jìn)行了薄層色譜定性鑒別研究。五味子[6]中主要成分為五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲，樣品經(jīng)提取分離、薄層展開(kāi)后，層析斑點(diǎn)不清晰、顏色較淺。女貞子[7]中主要成分為齊墩果酸，樣品經(jīng)提取分離后，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，斑點(diǎn)顏色較淺，且拖尾現(xiàn)象較嚴(yán)重。靈芝[8]主要成分為多糖類(lèi)，以靈芝藥材作為對(duì)照，經(jīng)點(diǎn)樣展開(kāi)后，在365 nm紫外光燈下觀察，陰性對(duì)照品溶液色譜中含有相同的熒光斑點(diǎn)，因此沒(méi)有將上述方法列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:7，10，31，44，123，229，83，130.

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