反相高效液相色譜法測定利鼻片中木蘭脂素含量

伍 娟

(湖南省邵陽市藥品檢驗(yàn)所，湖南 邵陽 422000)

利鼻片是由蒼耳子、辛夷和蒲公英等7味中藥加工制成的中藥制劑，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊)》中，具有清熱解毒、祛風(fēng)開竅的功效，用于鼻淵、鼻塞流涕等癥[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有定量指標(biāo)，不能有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量。方中臣藥辛夷主含木蘭脂素[2]。為此，故本試驗(yàn)以木蘭脂素為指標(biāo)成分，建立了測定利鼻片中木蘭脂素含量的反相高效液相色譜法，為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供客觀的質(zhì)量評價方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－20A型高效液相色譜儀;AG－135型電子天平、AB204－N型電子天平(梅特勒－托利多(上海)有限公司)。木蘭脂素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110722－200610，供含量測定用);乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純;利鼻片(長春銀諾克藥業(yè)有限公司，批號為20090110)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[3]

色譜柱:UltimateTMXB－C18色譜柱(205 mm ×5.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－四氫呋喃－水(35∶1∶64);檢測波長:278 nm;柱溫:35 ℃;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取木蘭脂素對照品5.14 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液(0.0514 mg/L)。取本品20片，去衣，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯20 mL，稱定質(zhì)量，浸泡30 min，超聲處理(功率250 W，頻率30 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，加于中性氧化鋁(100～200目，2g，內(nèi)徑10 mm，濕法裝柱，用乙酸乙酯5 mL預(yù)洗)上，用甲醇15 mL洗脫，收集洗脫液，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。按制備工藝方法制備不含辛夷的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成不含辛夷的陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果色譜行為良好，木蘭脂素峰與其他組分色譜可達(dá)基線分離，且與相鄰色譜峰分離度大于1.5;理論板數(shù)按供試品木蘭脂素峰計(jì)，在2000以上;而陰性對照品溶液色譜中在對照品溶液相應(yīng)的位置無色譜峰，說明陰性對照品溶液無干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:分別精密吸取質(zhì)量濃度為0.0514 g/L的木蘭脂素對照品溶液 2，4，8，12，16，20 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定峰面積積分值，以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A=24961 C+1232，r=0.9998(n=6)。結(jié)果表明，木蘭脂素進(jìn)樣量在 0.1028 ～1.028μg范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一質(zhì)量濃度的木蘭脂素對照品溶液，在上述色譜條件下測定，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值。結(jié)果的RSD=0.20%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):分別精密吸取同一供試品溶液10 μL，于配制后0，4，8，12，24 h 時進(jìn)樣。結(jié)果峰面積積分值的 RSD 為 1.36%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取利鼻片樣品，配制供試品溶液5份，在上述色譜條件下進(jìn)行測定。結(jié)果含量為2.35 mg/g，RSD為0.85%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的供試品(批號為20090110，含量為2.35 mg/g)6份，精密稱定，按低、中、高劑量分別加入木蘭脂素對照品溶液(0.7952 g/L)適量，按供試品溶液的制備方法處理，依法測定。結(jié)果見表1。

表1 木蘭脂素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

按擬訂的條件和方法，測定3批樣品中木蘭脂素的含量。結(jié)果批號分別為20090110，20090407，20090418的樣品中木蘭脂素平均含量為 0.684，0.698，0.738 mg/片。

3 討論

分別考察了乙腈－水(38∶62)、乙腈－四氫呋喃－水(35∶1∶64)、乙腈－甲醇－四氫呋喃－水(30∶15∶1∶64)4種流動相。經(jīng)試驗(yàn)，只有以乙腈－四氫呋喃－水(35∶1∶64)為流動相時，木蘭脂素色譜峰與相鄰色譜峰才能達(dá)到有效分離，色譜行為良好。

先分別用乙酸乙酯、乙醚和氯仿進(jìn)行振搖提取，結(jié)果以乙酸乙酯作溶劑為最佳;同時進(jìn)行了超聲時間的考察，結(jié)果表明超聲處理30 min后，木蘭脂素基本被提取完全。上中性氧化鋁柱是去除雜質(zhì)，否則在木蘭脂素峰附近處有一較大雜質(zhì)峰，難以分離。

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，精密度、回收率都較滿意，因此適用于辛夷藥材及其復(fù)方制劑中木蘭脂素含量的測定[4－6]。

[1]WS3－B－0741－91，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊)[S].

[2]苗明三，李振國.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:557.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:126.

[4]周 琦.辛俐華.HPLC法測定鼻淵丸中木蘭脂素的含量[J].中國藥師，2006，9(3):213.

[5]徐麗華，崔保國，于宗淵，等.RP－HPLC法測定辛夷中木蘭脂素與辛夷脂素的含量[J].藥物分析雜志，2003，23(6):426.