氫溴酸高烏甲素分散片的溶出度考察

胡雪蓮，余濤，邢茂，雷健，陳琳，張恩娟

(第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院藥劑科，重慶 400037)

氫溴酸高烏甲素是從高烏頭中提取總堿，經(jīng)化學(xué)分離獲得的二萜類單體—刺烏頭堿的氫溴酸鹽［1］，為國內(nèi)首創(chuàng)的非依賴性鎮(zhèn)痛藥，是衛(wèi)生部《癌癥患者三階梯鎮(zhèn)痛療法指導(dǎo)原則》中規(guī)定的中度鎮(zhèn)痛藥。臨床廣泛用于癌癥鎮(zhèn)痛、術(shù)后鎮(zhèn)痛等［2-8］。目前已批準(zhǔn)使用的劑型僅有注射劑、片劑和貼片，注射劑起效快，但攜帶及使用不方便，普通片劑和貼片起效慢，不能達(dá)到迅速鎮(zhèn)痛的要求。因此，筆者研制攜帶、使用方便，又能迅速起效的氫溴酸高烏甲素分散片，采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)其溶出行為進(jìn)行研究。因本品規(guī)格較小(5 mg)，故采用小杯法進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

Waters 600高效液相色譜儀(美國Waters公司)、Waters 2487紫外檢測(cè)器;ZRS-8智能藥物溶出儀(天津大學(xué)無線電廠制造);氫溴酸高烏甲素對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):100289-200902)，氫溴酸高烏甲素分散片(自制，規(guī)格:每片 5 mg，批號(hào):090601，090602，090603)，氫溴酸高烏甲素片(福州海王福藥制藥有限公司，規(guī)格:每片 5 mg，批號(hào):0812280)，甲醇(色譜純，Scharlau Chemie S.A.)，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5 μm);流動(dòng)相:0.05 mol·L-1磷酸二氫鈉-甲醇(28∶72);柱溫:25℃;檢測(cè)波長:252 nm;流速:1.0mL·min-1;進(jìn)樣體積:20 μL。

2.2 檢測(cè)波長的選擇 精密稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品適量，用流動(dòng)相制成每毫升約含20 μg的溶液，以流動(dòng)相為空白于200～400 nm波長掃描。結(jié)果對(duì)照品在221，252，309 nm處有吸收峰。考慮到221 nm靠近末端吸收，309 nm波長處峰值較低，因此選擇波長252 nm為檢測(cè)波長。

2.3 色譜條件的選擇及系統(tǒng)適用性 參考?xì)滗逅岣邽跫姿睾亢陀嘘P(guān)物質(zhì)研究［9-10］的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選 用18柱 (250mm ×4.6mm，5 μm)，以0.05 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(28∶72)為流動(dòng)相，結(jié)果主峰峰形對(duì)稱，理論板數(shù)＞1 500，主峰與鄰近峰的分離度＞1.5。故選擇此色譜條件。

2.4 溶出轉(zhuǎn)速的選擇 采用小杯法，以100mL水為溶劑，考察轉(zhuǎn)速分別為100，50 r·min-1時(shí)的溶出情況，結(jié)果50 r·min-1，10 min時(shí)溶出即＞80%，說明氫溴酸高烏甲素分散片溶出較快，故選擇50 r·min-1較合適。

2.5 溶出介質(zhì)的選擇 照溶出度測(cè)定法(《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄X C第三法)，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，分別選擇水、0.1 mol·L-1鹽酸、磷酸鹽緩沖液(pH6.8)3種溶出介質(zhì)進(jìn)行考察，結(jié)果在3種溶出介質(zhì)中的溶出行為相似，無明顯差別。因此選擇水為氫溴酸高烏甲素分散片的溶出介質(zhì)。

2.6 濾膜吸附的考察 分別采用濾膜(孔徑0.45 μm)過濾和離心(3 000 r·min-1)兩種方式處理溶出液，結(jié)果兩種方式處理的峰面積十分相近，說明采用濾膜(孔徑0.45 μm)過濾不會(huì)對(duì)主藥產(chǎn)生吸附，而濾膜過濾較離心法簡(jiǎn)單易行，因此采用濾膜過濾法處理樣品。

2.7 溶出度方法驗(yàn)證

2.7.1 系統(tǒng)適用性考察 稱取氫溴酸高烏甲素分散片細(xì)粉適量，用水配制成每毫升約含氫溴酸高烏甲素50 μg的溶液，取 20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果主峰峰形對(duì)稱，理論板數(shù)＞1 500;與鄰近峰分離度＞1.5，已完全分離。

另取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20 μL，記錄色譜圖，計(jì)算各峰面積的RSD，考察本色譜系統(tǒng)的重復(fù)性。結(jié)果連續(xù)進(jìn)樣5次的峰面積RSD 為0.65%(＜1.0%)，說明本色譜系統(tǒng)重復(fù)性很好。

2.7.2 專屬性考察 分別稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品、氫溴酸高烏甲素分散片細(xì)粉、空白輔料適量，用水配制成每毫升約含氫溴酸高烏甲素50 μg的溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。結(jié)果空白輔料約在3.1 min出現(xiàn)較小的輔料峰，但與主峰相距甚遠(yuǎn)，對(duì)溶出度測(cè)定無干擾。說明所選擇的溶出度測(cè)定方法專屬性較好。

圖1 氫溴酸高烏甲素HPLC圖A.空白對(duì)照;B.氫溴酸高烏甲素對(duì)照品;C.氫溴酸高烏甲素分散片;1.氫溴酸高烏甲素Fig.1 HPLC chromatogram of lappaconitine hydrobromideA.blank control;B.the reference of lappaconitine hydrobromide;C.lappaconitine hydrobromide dispersible tablets;1.lappaconitine hydrobromide

2.7.3 溶出液穩(wěn)定性考察 取專屬性項(xiàng)下的樣品溶液，分別于室溫下放置 0，2，4，6，12，24 h 后，取 20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果各時(shí)間點(diǎn)的峰面積RSD 為1.35%(＜2.0%)，說明本品溶出液的穩(wěn)定性較好，至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7.4 線性關(guān)系考察 精密稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品12.2 mg，置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備溶液。分別精密量取貯備溶液0.2，0.5，0.8，1.0，1.2，1.5mL 置 10mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，配制成濃度分別為9.76，24.40，39.04，48.80，58.56，73.20 μg·mL-1的溶液。分別取上述溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，主峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=19 583X－14 259(r=0.999 7)。氫溴酸高烏甲素在9.76 ～73.20 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.7.5 溶出度回收實(shí)驗(yàn) 按氫溴酸高烏甲素分散片溶出度測(cè)定濃度的50%，80%，100%進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)。分別精密稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品約6.25，10.00，12.50 mg各3份，置250mL量瓶中，再分別加入空白輔料約0.14 g，加水溶解并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另精密稱取氫溴酸高烏甲素對(duì)照品約10 mg，置25mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。再精密量取該溶液1mL，置10mL量瓶中，用水稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。按“2.3”項(xiàng)下的色譜條件，分別取供試品溶液及對(duì)照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果3個(gè)濃度的回收率均在97% ～103%之間(表1)，平均回收率為100.30%，RSD為1.34%，說明該方法的準(zhǔn)確度較高。

表1 氫溴酸高烏甲素溶出度回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Recovery of the dissolution of lappaconitine hydrobromide n=9

2.8 溶出均一性考察及與市售片比較 測(cè)定3批氫溴酸高烏甲素分散片中試樣品溶出曲線，考察溶出均一性。采用小杯法，以 100mL水為溶劑，轉(zhuǎn)速50 r·min-1。取樣時(shí)間點(diǎn)設(shè)為10，20，30，45，60 min，分別計(jì)算累積溶出度。同法測(cè)定市售氫溴酸高烏甲素普通片的溶出曲線，與分散片進(jìn)行比較。累積溶出曲線見圖2。

3 討論

氫溴酸高烏甲素片劑因規(guī)格較小(5 mg)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［11］(衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)二部第5冊(cè))采用的溶出度測(cè)定方法為:“取本品數(shù)片(相當(dāng)于氫溴酸高烏甲素50 mg)，照溶出度測(cè)定法(《中華人民共和國藥典》1995年版二部附錄ⅩC第2法)，加水800mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，經(jīng) 45 min 時(shí)，吸取溶液 20mL，濾過，精密量取濾液10mL置于25mL量瓶中，照含量測(cè)定項(xiàng)下自……測(cè)定每片的溶出量。限度為標(biāo)示量的80%”。按照此方法，一個(gè)溶出杯要放10片樣品，實(shí)際上測(cè)得的是10片樣品的平均值，不能真實(shí)反映出每片的溶出情況。分析原因，可能因?yàn)榇藰?biāo)準(zhǔn)制訂較早，當(dāng)時(shí)尚未普遍使用小杯法，故對(duì)規(guī)格較小的氫溴酸高烏甲素片劑采取了以上方法。

因此，采用小杯法進(jìn)行氫溴酸高烏甲素分散片溶出方法研究，結(jié)果3批氫溴酸高烏甲素分散片溶出度均一性好，10 min內(nèi)累積溶出度＞80%，而普通片40 min時(shí)溶出度才達(dá)到80%，說明分散片的釋藥速度較普通片快，提示氫溴酸高烏甲素分散片的吸收可能比普通片快，因此有望達(dá)到迅速鎮(zhèn)痛的目的。

［1］唐希燦，朱梅英，馮潔，等.刺烏頭堿氫溴酸鹽的藥理作用研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1983，18(8):579－584.

［2］安一明，戴建平，陳力，等.高烏甲素貼片治療癌癥疼痛的臨床研究［J］.中國腫瘤臨床與康復(fù)，1997，4(2):86－87.

［3］闕鐵生，鐘進(jìn)才，周曉敏.高烏甲素透皮貼劑治療中重度癌痛［J］.中國臨床康復(fù)，2005，9(2):211.

［4］楊濤，王利利，王均爐.氯諾昔康和高烏甲素用于老年人中上腹部手術(shù)后自控鎮(zhèn)痛的效果比較［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，24(9):782－783.

［5］孫爍.高烏甲素復(fù)合舒芬太尼用于術(shù)后鎮(zhèn)痛的臨床觀察［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，19(32):4185－4186.

［6］胡兆春，葉香芳.高烏甲素伍用嗎啡用于硬膜外持續(xù)鎮(zhèn)痛的臨床觀察［J］.海峽藥學(xué)，2010，22(6):195－196.

［7］王井泉.高烏甲素治療56例膽道術(shù)后患者疼痛的臨床療效分析［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2010，15(5):551－554.

［8］戴秀琴，方韜.高烏甲素合用芬太尼在術(shù)后靜脈鎮(zhèn)痛中的應(yīng)用［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29(5):402－404.

［9］胡雪蓮，余濤，邢茂，等.HPLC法測(cè)定氫溴酸高烏甲素的含量和有關(guān)物質(zhì)［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30(2):249－251.

［10］王鴻，高建青，李新平.超聲波對(duì)氫溴酸高烏甲素透皮吸收的影響［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28(3):295－296.

［11］中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(二部)第5冊(cè)［S］.1996:53.