藏荊芥揮發(fā)油抗炎與鎮(zhèn)痛作用研究*

黃山，江春艷，龍飛

(1.青島科技大學(xué)化工學(xué)院藥學(xué)系，青島 266042;2.西藏天知藥業(yè)有限責(zé)任公司，日喀則 857000;3.成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室，611137)

藏荊芥(藏藥名薩都那保)為唇形科植物藏荊芥Nepeta angustifolia C.Y.Wu的全草，味苦，性涼，開竅醒神，主治神昏驚厥、卒中、癲、出血性腦梗死、創(chuàng)傷及疼痛等癥［1］。藏荊芥與荊芥為同科同屬的植物，但是為西藏獨(dú)有的藥材，主要產(chǎn)于西藏拉薩、江孜等地。作為藏醫(yī)常用藥之一，藏荊芥在臨床上有著良好的療效。但是，目前對(duì)該藥的研究仍較少，這也妨礙對(duì)該藥的進(jìn)一步開發(fā)，限制了其應(yīng)用。筆者以藏荊芥揮發(fā)油為研究對(duì)象，對(duì)其抗炎、鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥 藏荊芥(Nepeta angustifolia C.Y.Wu)，西藏日喀則地區(qū)天知藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室龍飛博士鑒定符合藥用。藏荊芥揮發(fā)油按《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部甲法提取，得淡黃色、透明油狀液體，無(wú)水硫酸鈉充分脫水后，密閉貯存于棕色瓶中，4℃ 保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)時(shí)用0.5%聚山梨酯80溶液配制使用。二甲苯、冰醋酸均為市售化學(xué)純?cè)噭?。潑尼?天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號(hào):080825)、阿司匹林(山東新華制藥股份有限公司，批號(hào):20090610)。角叉菜膠(Sigma公司，批號(hào):122K1444)。

1.1.2 動(dòng)物 昆明種小鼠(清潔級(jí))，體質(zhì)量18～22 g，雌雄兼用，隨機(jī)分組，每組10只，動(dòng)物合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字第0214-07號(hào)。SD大鼠(清潔級(jí))，雄性，體質(zhì)量150～170 g，隨機(jī)分組，每組10只，動(dòng)物合格證:醫(yī)動(dòng)字第0158-07號(hào)。以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，在自由攝食、飲水環(huán)境中適應(yīng)1～2 d后，用于實(shí)驗(yàn)。

1.1.3 儀器 JA1203型電子天平(上海天平儀器廠)，YLS-6A型智能熱板儀(山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)，YLS-7A型足跖容積測(cè)量?jī)x(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組(給予純化水)、潑尼松組(給予潑尼松溶液5 mg)，藏荊芥低、中、高劑量組(給予藏荊芥揮發(fā)油0.125，0.250，0.500mL·kg-1)，分別灌胃給藥，連續(xù)5 d，第5天給藥1 h后，將二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面，每鼠0.1mL，左耳作對(duì)照。1 h后處死動(dòng)物，用直徑8mm打孔器分別在兩耳同一部位打下圓耳片，用電子天平稱定質(zhì)量。計(jì)算耳廓腫脹率和腫脹抑制率。腫脹率(%)=(右耳質(zhì)量－左耳質(zhì)量)/左耳質(zhì)量×100%［2］;腫脹抑制率(%)=(對(duì)照組耳腫脹率－給藥組耳腫脹率)/對(duì)照組耳腫脹率×100%［2-3］。

1.2.2 對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響 大鼠50只，分組及給藥同“1.2.1”項(xiàng)。分別灌胃給藥連續(xù)5 d，第5天給藥1 h后，將1%的角叉菜膠0.1mL注入大鼠右后足跖皮下，然后用足跖容積測(cè)量?jī)x分別測(cè)量致炎前、致炎后1，2，3，4，6 h大鼠足跖至踝關(guān)節(jié)部的容積，計(jì)算足跖腫脹率和腫脹抑制率。腫脹率(%)=(致炎后足跖容積－致炎前足跖容積)/致炎后足跖容積×100%［4-5］。

1.2.3 對(duì)小鼠棉球肉芽腫的影響 小鼠50只，分組及給藥同“1.2.1”項(xiàng)。乙醚麻醉后，在每只小鼠左側(cè)腹股溝處埋入高壓滅菌棉球3 mg，手術(shù)過(guò)程嚴(yán)格無(wú)菌操作，并在局部注入16萬(wàn)U·mL-1青霉素0.1mL。術(shù)后灌胃給藥，連續(xù)7 d。第8天處死小鼠，取出棉球，剔除脂肪組織，稱定質(zhì)量，60℃烘干24 h，稱定質(zhì)量，并計(jì)算抑制率。抑制率(%)=(對(duì)照組肉芽腫干質(zhì)量－給藥組肉芽腫干質(zhì)量)/對(duì)照組肉芽腫干質(zhì)量×100%［6］。

1.2.4 小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組(給予純化水)、阿司匹林組(給予阿司匹林8 mg)，藏荊芥低、中、高劑量組(給予藏荊芥揮發(fā)油溶液 0.125，0.250，0.500mL·kg-1)。各組均灌胃給藥1 h后腹腔注射0.7%的醋酸溶液，每只0.2mL，記錄10 min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)［7］。

1.2.5 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 將篩選合格的雌性小鼠50只隨機(jī)分為5組，分組及給藥同“1.2.4”項(xiàng)，分別測(cè)定給藥前痛閾值。各組分別于灌胃給藥后30，60，90，120 min測(cè)定痛閾值。若小鼠超過(guò)60 s仍無(wú)反應(yīng)，按 60 s計(jì)算［8］。

2 結(jié)果

2.1 藏荊芥揮發(fā)油對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

結(jié)果見表1。藏荊芥揮發(fā)油對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用。

2.2 藏荊芥揮發(fā)油對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響 結(jié)果見表2。藏荊芥揮發(fā)油能抑制角叉菜膠致大鼠足跖腫脹，減輕腫脹程度，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而且，隨著致炎時(shí)間的延長(zhǎng)，空白對(duì)照組足跖腫脹程度不斷顯著增加，而藏荊芥揮發(fā)油各劑量組足跖腫脹程度均未明顯增加。

2.3 藏荊芥揮發(fā)油對(duì)小鼠棉球肉芽腫的影響 結(jié)果見表3。給藥組均具有抑制小鼠肉芽腫生長(zhǎng)的作用，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.4 小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 結(jié)果見表4。藏荊芥低、中、高劑量組醋酸所致小鼠扭體次數(shù)均明顯減少，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.5 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 結(jié)果見表5。藏荊芥高、中、低劑量組均能在給藥后30，60，90，120 min延長(zhǎng)小鼠的痛閾值，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

3 討論

藏荊芥揮發(fā)油高、中、低劑量對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹及角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的炎癥反應(yīng)均有明顯的抑制作用，對(duì)小鼠棉球肉芽腫慢性炎癥模型也有明顯的抑制作用。說(shuō)明藏荊芥揮發(fā)油對(duì)炎癥早期毛細(xì)血管通透性增加、炎癥物質(zhì)滲出、組織水腫，以及炎癥后期肉芽組織增生均有較強(qiáng)的拮抗作用，提示該藥對(duì)炎癥有較強(qiáng)的防治作用。

表1 5組小鼠二甲苯致耳廓腫脹情況Tab.1 Results of xylene－induced ear edema in 5 groups of mice ±s

表1 5組小鼠二甲苯致耳廓腫脹情況Tab.1 Results of xylene－induced ear edema in 5 groups of mice ±s

與空白對(duì)照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)小鼠/只左耳質(zhì)量 右耳質(zhì)量 差值mg腫脹率 抑制率%藏荊芥揮發(fā)油低劑量組 0.125 10 16.05±1.72 31.80±2.12 15.75±1.85 99.54±17.93 15.83中劑量組 0.250 10 16.13±1.41 30.98±3.14 14.85±2.95 92.89±21.08*1 21.45高劑量組 0.500 10 16.04±1.22 30.23±2.53 14.19±2.32*1 89.02±16.07*1 24.73潑尼松組 5 mg 10 15.81±1.50 29.15±4.29 13.34±4.21*1 85.59±31.62*1 27.63空白對(duì)照組 … 10 15.47±1.21 33.65±3.24 18.18±3.02 118.26±22.18…

表2 5組大鼠角叉菜膠致足跖腫脹率測(cè)定結(jié)果Tab.2 Results of carrageena-induced paw edema in 5 groups of rats %，±s

表2 5組大鼠角叉菜膠致足跖腫脹率測(cè)定結(jié)果Tab.2 Results of carrageena-induced paw edema in 5 groups of rats %，±s

與空白對(duì)照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)大鼠/只1 h 2 h 3 h 4 h 6 h藏荊芥揮發(fā)油低劑量組 0.125 10 32.10±11.10 40.08±12.36 51.64±13.86 62.32±13.62*1 67.49±12.95*1中劑量組 0.250 10 27.75±6.35 39.24±9.92 48.82±9.95*1 57.27±14.49*1 63.46±17.40*1高劑量組 0.500 10 22.70±6.35*1 34.06±19.14*1 43.01±13.15*152.97±17.95*1 58.27±12.57*1潑尼松組 5.00 mg 10 19.76±6.39*1 30.26±6.95*1 41.21±7.84*1 51.89±8.49*1 58.72±9.57*1空白對(duì)照組 … 10 35.45±10.94 53.91±18.76 65.63±17.56 80.72±14.96 92.78±15.32

表3 5組小鼠棉球肉芽腫測(cè)定值Tab.3 Results of tampon－induced granuloma in 5 groups of mice ±s

表3 5組小鼠棉球肉芽腫測(cè)定值Tab.3 Results of tampon－induced granuloma in 5 groups of mice ±s

與空白對(duì)照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)小鼠/只肉芽腫濕重 肉芽腫干重mg抑制率/%藏荊芥揮發(fā)油低劑量組 0.125 10 76.87±9.53*118.80±3.66*125.37中劑量組 0.250 10 62.15±14.66*116.45±2.86*134.70高劑量組 0.500 10 52.73±12.70*114.43±2.80*142.72潑尼松組 5.00 mg 10 40.35±7.91*111.10±3.26*155.93空白對(duì)照組 … 10 97.57±18.98 25.19±3.63…

表4 5組小鼠醋酸所致扭體次數(shù)測(cè)定值Tab.4 Results of writhing times of mouse induced by acetic acid in 5 groups of mice ±s

表4 5組小鼠醋酸所致扭體次數(shù)測(cè)定值Tab.4 Results of writhing times of mouse induced by acetic acid in 5 groups of mice ±s

與空白對(duì)照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)小鼠/只扭體次數(shù)/次藏荊芥揮發(fā)油低劑量組 0.125 10 17.75±4.35中劑量組 0.250 10 14.83±6.03*1高劑量組 0.500 10 13.08±4.64*1阿司匹林組 8.00 mg 10 5.17±2.52*1空白對(duì)照組 …10 21.92±4.14

表5 5組小鼠對(duì)熱板所致疼痛潛伏期的測(cè)定值Tab.5 Results of the pain latency of mouse induced by hot plate in 5 groups of mice ±s

表5 5組小鼠對(duì)熱板所致疼痛潛伏期的測(cè)定值Tab.5 Results of the pain latency of mouse induced by hot plate in 5 groups of mice ±s

與空白對(duì)照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)小鼠/只 給藥前 給藥后30 min 60 min 90 min 120 min藏荊芥低劑量組 0.125 10 15.26±3.83 17.57±2.92 17.82±2.73 22.12±2.82*1 26.10±3.62*1中劑量組 0.250 10 15.31±2.66 18.56±2.94 22.83±3.86*1 25.75±5.35*1 28.91±4.04*1高劑量組 0.500 10 15.27±3.18 21.17±2.78*1 25.27±3.51*1 28.53±2.74*1 30.77±8.94*1阿司匹林組 8 mg 10 15.30±4.30 18.06±2.73 23.19±3.35*1 28.41±5.49*1 34.78±5.32*1空白對(duì)照組 … 10 15.14±3.03 15.25±3.33 15.09±2.36 15.86±3.49 15.56±3.33

藏荊芥揮發(fā)油對(duì)小鼠醋酸扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用，并能明顯延長(zhǎng)熱刺激小鼠痛閾值。說(shuō)明藏荊芥揮發(fā)油對(duì)化學(xué)和物理刺激引起的疼痛均有良好的鎮(zhèn)痛效果，可緩解臨床炎癥反應(yīng)引起的疼痛。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藏荊芥揮發(fā)油有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為其臨床應(yīng)用提供了藥效學(xué)基礎(chǔ)，而藏荊芥的其他藥理作用也有待于進(jìn)一步研究。

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