液液萃取和大孔吸附樹脂純化銀杏外種皮黃酮類化合物的比較研究

宋國(guó)斌，席國(guó)萍

(山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山西 大同 037009)

銀杏是世界上珍貴的藥用植物資源[1，2]。銀杏外種皮是銀杏果仁的皮層，即種子硬殼的肉質(zhì)皮層，俗稱白果衣胞[3]。銀杏外種皮的化學(xué)成分主要有黃酮類、銀杏內(nèi)酯類等化合物。其中黃酮類化合物具有擴(kuò)張血管、降低血脂、抗氧自由基等重要作用，已成為當(dāng)前生物制藥的研究熱點(diǎn)，而銀杏藥物中黃酮類化合物含量的高低，直接關(guān)系到藥物的藥效[4]。

作者在此比較了液液萃取法和大孔吸附樹脂法對(duì)銀杏外種皮黃酮類化合物的純化效果，擬為銀杏外種皮黃酮類化合物的開發(fā)利用提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

銀杏外種皮采自貴州省貴陽(yáng)市烏當(dāng)區(qū)楊昌鎮(zhèn)。

蘆丁對(duì)照品，中國(guó)藥檢所；X-5、AB-8型大孔吸附樹脂，天津南開大學(xué)化工廠；DM-130型大孔吸附樹脂，山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，其它試劑均為分析純。

UNICO UV-2000型紫外可見分光光度計(jì)，上海麗度電子科技發(fā)展有限公司；RE-25型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；METTLER-AE240型電子天平，瑞士梅特勒公司；LABCONCO型冷凍真空干燥器，上海澤權(quán)儀器設(shè)備有限公司。

1.2 銀杏外種皮黃酮類化合物的純化

1.2.1 銀杏外種皮的前處理

將銀杏外種皮自然風(fēng)干，然后放入50 ℃烘箱中烘烤至脆，粉碎，冰箱保存。

1.2.2 銀杏外種皮黃酮提取物的制備

稱取適量處理好的銀杏外種皮，在70 ℃、用7 BV的60%(質(zhì)量濃度，下同)乙醇回流提取4次，每次1 h；合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50 ℃減壓濃縮，冷凍干燥，備用

1.2.3 液液萃取法純化

準(zhǔn)確量取70%乙醇配制5份濃度為2.43 mg·mL-1的銀杏外種皮黃酮提取液，每份100 mL，分別用正己烷、石油醚、環(huán)戊烷、甲苯、氯仿萃取至萃取溶劑無色，將乙醇提取液濃縮至干，冷凍干燥，得產(chǎn)品。

1.2.4 大孔吸附樹脂法純化

將處理好的X-5、AB-8、DM-130大孔吸附樹脂濕法裝柱(層析柱尺寸55 mm×800 mm)，裝柱高度600 mm。準(zhǔn)確量取70%乙醇配制3份濃度為2.45 mg·mL-1的銀杏外種皮黃酮提取液，每份100 mL，上樣。先用水洗至流出液無色，再用4～5 BV 90%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，冷凍干燥，得產(chǎn)品。

1.3 銀杏外種皮黃酮類化合物含量測(cè)定

用70%乙醇準(zhǔn)確配制0.13 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精確量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液置10 mL具塞試管中，以蒸餾水為空白，加30%乙醇至5 mL；先加5%NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；再加10%Al(NO3)3溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；最后加4%NaOH溶液4 mL；用蒸餾水稀釋至10 mL，室溫放置15～20 min。在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度，由最小二乘法得濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，并根據(jù)此方程計(jì)算黃酮類化合物含量[5]。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

以蘆丁濃度Y(mg·mL-1)對(duì)吸光度A作圖，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得線性方程：Y=0.09892A+0.00179，R=0.9994。

2.2 液液萃取法與大孔吸附樹脂法的純化效果比較

將液液萃取和大孔吸附樹脂純化所得產(chǎn)品稱重，稱取相同質(zhì)量的產(chǎn)品，用70%乙醇溶解并定容至25 mL。準(zhǔn)確量取該溶液5 mL，置于10 mL具塞試管中，按1.3方法由吸光度計(jì)算相應(yīng)的黃酮濃度，并計(jì)算產(chǎn)品中黃酮類化合物含量，結(jié)果見表1。

表1 液液萃取法與大孔吸附樹脂法的純化效果比較

由表1可以看出，液液萃取法在產(chǎn)品質(zhì)量和黃酮類化合物含量方面均低于大孔吸附樹脂法；用正己烷和石油醚萃取純化銀杏外種皮黃酮提取液所得產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)品中黃酮類化合物含量均高于其它3種萃取溶劑；DM-130大孔吸附樹脂對(duì)銀杏外種皮黃酮類化合物的純化效果最好，產(chǎn)品中黃酮類化合物含量達(dá)25.92%。

3 結(jié)論

比較液液萃取法和大孔吸附樹脂法對(duì)銀杏外種皮黃酮類化合物的純化效果可以看出：液液萃取法在產(chǎn)品質(zhì)量和黃酮類化合物含量方面均低于大孔吸附樹脂法，而且用于萃取的有機(jī)溶劑多數(shù)有較大的毒性且成本較高。因此，相對(duì)于液液萃取法，大孔吸附樹脂法在純化銀杏外種皮黃酮類化合物方面具有一定的優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用前景。

[1]李國(guó)麗，李春霞，王威強(qiáng).銀杏葉黃酮類化合物提取分離研究現(xiàn)狀和展望[J].山東輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，19(3)：18-22.

[2]朱奕慶.銀杏研究與應(yīng)用[M].貴陽(yáng)：貴州科技出版社，2000：1.

[3]唐于平，樓鳳昌，王歡，等.銀杏外種皮的化學(xué)成分和藥理作用[J].藥學(xué)進(jìn)展，2000，24(3)：152-155.

[4]李大枝，張長(zhǎng)花，黨艷秋，等.從銀杏葉中高效提取分離銀杏黃酮的研究[J].科技信息，2008，(1)：48.

[5]盧錦花，胡小玲，岳紅，等.大孔吸附樹脂對(duì)銀杏葉黃酮類化合物吸附及解吸的研究[J].化學(xué)研究與應(yīng)用，2002，14(2)：164-166.