梔子根揮發(fā)油的成分分析

王 斌，楊 彬，穆 鑫，楊天鳴

(中南民族大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430074)

梔子根為茜草科梔子屬植物梔子(Gardeniajasminoides)的根，又名黃枝根、山枝根[1]。梔子始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，作為藥材已被廣泛應(yīng)用，并被我國藥典收載，具有清熱、瀉火、涼血之功效，能治療熱病黃疸、失眠、淋病、消渴、出血等病癥。梔子根在我國華南地區(qū)，尤其是廣西、廣東、福建民間應(yīng)用十分普遍，臨床報道梔子根可用于治療慢性傳染性乙型肝炎，效果顯著[2]。國內(nèi)外對梔子根化學(xué)成分的研究報道主要有環(huán)烯醚萜類、齊墩果酸醋酸酯、甘露醇、豆甾醇類等[3]，而對其揮發(fā)油成分還未進行全面系統(tǒng)的研究。

作者分別采用超臨界CO2萃取法和水蒸氣蒸餾法提取梔子根揮發(fā)油，并用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對其揮發(fā)性成分進行分析鑒定。為進一步開發(fā)利用梔子根的藥理作用提供參考。

1 實驗

1.1 原料、試劑與儀器

梔子根，采自浙江麗水，經(jīng)中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬定榮教授鑒定。切碎后經(jīng)藥品粉碎機粉碎成粉末狀，過60目篩，備用。

超純水，CO2(食品級)，95%乙醇(AR)，環(huán)己烷(AR)，無水硫酸鈉。

HA121-50-01型超臨界CO2萃取設(shè)備，江蘇華安科研儀器有限公司；6890N-5973N型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(帶有7683B型自動進樣器)、HP.5MS色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，Agilent公司；JHBE-50S型閃式提取器；水蒸氣蒸餾裝置；SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水真空泵，上海東璽制冷儀器設(shè)備有限公司；RE52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；FE130型藥物粉碎機。

1.2 揮發(fā)油的提取

1.2.1 超臨界CO2萃取法(SFE-CO2)

CO2鋼瓶→冷凍系統(tǒng)→高壓泵→萃取釜→分離釜Ⅰ→分離釜Ⅱ→冷凍系統(tǒng)(循環(huán))。

稱量129.6 g梔子根粉末投入萃取釜中，按設(shè)定的工藝參數(shù)進行萃取。

萃取條件：萃取釜壓力20 MPa，溫度35 ℃；分離釜I壓力6 MPa，溫度35 ℃；分離釜Ⅱ壓力6 MPa，溫度35 ℃；CO2流速25 L·h-1；萃取時間2 h。產(chǎn)物用環(huán)己烷溶解，然后用無水硫酸鈉干燥，稱重。

1.2.2 水蒸氣蒸餾法(SD)

取132.9 g梔子根，洗凈，低溫烘干。用50%的乙醇浸泡過夜。用閃式提取器反復(fù)提取5 min，將混合物旋蒸濃縮，再進行水蒸氣蒸餾。產(chǎn)物用環(huán)己烷萃取，低溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到揮發(fā)油，然后用無水硫酸鈉干燥，稱重。

1.3 GC-MS條件

GC條件：進樣口溫度260 ℃，載氣為99.999%高純氮氣，進樣量1 μL。超臨界CO2提取產(chǎn)物分流比為2∶1，程序升溫：初始溫度50 ℃，保持1 min；以4 ℃·min-1升溫至250 ℃，保持2 min。水蒸氣蒸餾產(chǎn)物分流比為5∶1，程序升溫：初始溫度60 ℃，保持1 min；以10 ℃·min-1升溫至240 ℃，保持2 min。柱前壓40 kPa，檢測口溫度200 ℃。

表1 SFE-CO2法提取的梔子根揮發(fā)油的化學(xué)成分分析結(jié)果

表2 SD法提取的梔子根揮發(fā)油的化學(xué)成分分析結(jié)果

MS條件：EI離子源，電子能量70 eV，離子源溫度280 ℃，接口溫度250 ℃，電子倍增電壓2400 V，采取全掃描模式，掃描范圍30～400 amu。

1.4 數(shù)據(jù)處理與質(zhì)譜檢索

樣品經(jīng)GC-MS分析，各分離組分采用美國國家標(biāo)準(zhǔn)局NIST2.0譜庫檢索定性，采用色譜峰面積歸一法進行相對定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 梔子根揮發(fā)油產(chǎn)率

超臨界CO2萃取的分離釜Ⅰ、Ⅱ均得到棕黃色粘稠物和黃色油狀物，其中分離釜I中產(chǎn)物量為1.6732 g，分離釜Ⅱ中產(chǎn)物量為0.3275 g，均有濃郁香味。揮發(fā)油的總產(chǎn)率為3.762%。

水蒸氣蒸餾法得到黃色油狀物1.1320 g，有濃郁香味。揮發(fā)油產(chǎn)率為0.852%。

2.2 梔子根中揮發(fā)油成分

用環(huán)己烷溶解超臨界CO2萃取產(chǎn)物，得樣品1；用環(huán)己烷溶解水蒸氣蒸餾產(chǎn)物，得樣品2，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對兩樣品揮發(fā)性成分進行分析。查詢有關(guān)資料，經(jīng)過質(zhì)譜解析確定組分結(jié)構(gòu)，因GC-MS數(shù)據(jù)庫有限，并排除掉可能的溶劑峰，最終鑒定出樣品1中組分65個、樣品2中組分59個，分別見表1和表2。

2.3 結(jié)果分析

(1)以峰面積歸一化法分析各個組分的相對含量，超臨界CO2萃取產(chǎn)物中：烷烴類18.733%，烯烴類0.104%，醛酮類0.563%，酯類17.852%，醇酚類9.851%，苯類11.107%，酸類27.762%，其它0.574%，以上產(chǎn)物占總揮發(fā)油的86.546%。水蒸氣蒸餾法產(chǎn)物中：烷烴類41.778%，烯烴類1.339%，醛酮類0.187%，酯類13.740%，酸類2.782%，醇酚類9.307%，苯類4.493%，以上產(chǎn)物占總揮發(fā)油的73.626%。

超臨界CO2萃取產(chǎn)物與水蒸氣蒸餾產(chǎn)物的主要物質(zhì)種類相同、主要出峰時間相似，但水蒸氣蒸餾產(chǎn)物的總離子流圖各個峰的峰高普遍小于超臨界CO2萃取產(chǎn)物；在其相對含量上也有較大不同，樣品1中苯類、醛類、酯類的相對含量要高于樣品2。因此，推測超臨界CO2萃取產(chǎn)物的生物活性更強。

(2)超臨界CO2萃取法提取揮發(fā)油的產(chǎn)率為3.762%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于常規(guī)水蒸氣蒸餾法的0.852%，且耗時更短。

(3)由于超臨界CO2萃取體系的溫度較低且不直接與空氣接觸，樣品1中低沸點組分的相對含量要高于樣品2中低沸點組分的相對含量；樣品1鑒定的物質(zhì)種類比樣品2多，且一些易氧化物質(zhì)的相對含量也要高于樣品2中該組分的相對含量。可以推斷超臨界CO2萃取法提取易氧化物質(zhì)和低沸點物質(zhì)更具優(yōu)越性。

3 結(jié)論

分別采用超臨界CO2萃取法和水蒸氣蒸餾法提取梔子根的揮發(fā)油。通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對其進行分析并以峰面積歸一化法對各組分進行定量計算。結(jié)果表明，超臨界CO2萃取法提取物和水蒸氣蒸餾法提取物中分別有65種物質(zhì)和59種物質(zhì)被鑒別，占總揮發(fā)油的86.546%和73.626%。

[1] 李江，林興，黃忠仕，等.梔子花根的生藥學(xué)研究[J].華夏醫(yī)學(xué)，2004，17(2)：149-151.

[2] 鄭宋明，鄭晶晶，雷后興.畬藥對慢性乙型肝炎生化指標(biāo)及HBeAg HBV-DNA的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25(8)：1660-1661.

[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中國藥典(一部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：231-232.