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    中樞神經(jīng)損傷疾病與烯醇化酶活性的相關(guān)性探討

    2011-07-17 06:26:44符曉蘇張志宇
    關(guān)鍵詞:化酶烯醇系統(tǒng)疾病

    符曉蘇 張志宇 孫 奕

    目前已知烯醇化酶有 5 種形式組成 αα,ββ,γγ,αβ,αγ五種同功酶[1]。γγ型烯醇化酶特異地存在神經(jīng)元細(xì)胞或神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞,稱之為神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)。對(duì)于NSE的生物學(xué)特性及其臨床應(yīng)用,尤其對(duì)神經(jīng)元的腫瘤和肺小細(xì)胞癌的臨床診斷價(jià)值,已積累了大量的文獻(xiàn)資料[2]。本實(shí)驗(yàn)用全自動(dòng)生化儀酶偶聯(lián)速率法測(cè)定血清中的烯醇化酶活性。探討中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病與ENO活性的相關(guān)性。

    1.材料與方法

    1.1 材料 73例經(jīng)臨床確診的腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病住院病例中,腦出血15例,腦梗死25例,顱內(nèi)腫瘤5例,中樞神經(jīng)感染12例,癲癇16例。男性47例,女性26例,年齡(52~72)歲,平均年齡62±5.60歲。健康組:370名體檢正常的健康者,其中男性197名,女性173名,年齡(56~75)歲,平均年齡65±8.90歲。標(biāo)本來源于體檢中心。

    1.2 方法 用日本OLYMPUS5400全自動(dòng)生化分析儀酶偶聯(lián)速率法測(cè)定烯醇化酶活性。

    1.2.1 緩沖液 40mmoL/L三乙醇胺,PH7.6。取三乙醇胺(含量≥78%,密度1.123~1.133,分子量149.19)6.8ml溶解于1000ml蒸餾水,pH校正至7.6。

    1.2.2 底物緩沖液(R1) 稱取氯化鉀、硫酸鎂、乙二胺四乙酸二鈉、二磷酸腺苷、還原型輔酶溶于40mmol/L三乙醇胺緩沖液中,溶解后校正pH7.6,加丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶,置4℃冰箱保存。(R2)2-磷酸甘油酸溶液:2-磷酸甘油酸稱量后蒸餾水溶解后,置4℃冰箱保存。(試劑R1和試劑R2成分組合配方專利申請(qǐng)?zhí)?010102426284)。

    1.2.3 用真空管抽取空腹靜脈血3ml,待血液凝固后離心分離血清待測(cè),當(dāng)天完成檢測(cè)。

    1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)以(±s)表示,比較結(jié)果用t檢驗(yàn)。

    2.結(jié)果

    2.1 臨床73例腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病ENO活性結(jié)果15.52±5.27U/L,健康對(duì)照組ENO活性結(jié)果5.91±1.90U/L,見表1。

    表1 腦挫傷及神經(jīng)系統(tǒng)疾病與健康對(duì)照組ENO活性結(jié)果(±s)

    表1 腦挫傷及神經(jīng)系統(tǒng)疾病與健康對(duì)照組ENO活性結(jié)果(±s)

    注:與健康對(duì)照組比*P <0.05,**P <0.01。

    組 別 例數(shù) ENO(U/L)健康對(duì)照 370 5.91±1.90腦出血 15 14.951 ±5.94**腦梗死 25 15.63 ±5.88**顱內(nèi)腫瘤 5 16.13±5.60*中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染 12 11.98±2.75**癲癇 16 16.54±4.03**

    2.2 如果以大于健康組2S(9.7U/L)為陽性,結(jié)果見表2。

    表2 73例腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病陽性結(jié)果(±s)

    表2 73例腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病陽性結(jié)果(±s)

    組別 例數(shù) 陽性例數(shù)腦出血 15 11腦梗死 25 21顱內(nèi)腫瘤 5 3中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染 12 8癲癇16 14

    3.討論

    1965年科學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)了一種大量存在腦組織中酸性可溶性蛋白質(zhì)稱為14-3-2蛋白[3]。后來人們發(fā)現(xiàn)該蛋白特異性地位于神經(jīng)元中,并有烯醇化酶(enolase,ENO)活性。烯醇化酶廣泛分布于人體各種組織細(xì)胞中是糖酵解過程中的關(guān)鍵酶,在正常情況下腦脊液和血清中只含有微量烯醇化酶,但在腦血管意外、腦創(chuàng)傷、腦腫瘤等疾病時(shí)NSE會(huì)增加,在此情況下血清ENO也會(huì)明顯升高。當(dāng)缺氧、缺血或中毒情況下細(xì)胞內(nèi)的酶釋放出來,并迅速進(jìn)入細(xì)胞間隙,進(jìn)而進(jìn)入外周循環(huán),血腦屏障受損程度越高釋放入血的烯醇化酶越多,血清含量越高,這就為檢測(cè)血中的烯醇化酶提供了依據(jù)[2,4,5]。烯醇化酶在糖代謝過程中催化2-磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變成2-磷酸烯醇式丙酮酸,在丙酮酸激酶的作用下生成丙酮酸,與還原型輔酶、乳酸脫氫酶作用生成乳酸。根據(jù)反應(yīng)原理用酶偶聯(lián)速率法檢測(cè)烯醇化酶活性。目前國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)方法的研究報(bào)道很多,有用放免、電泳、酶標(biāo)記及發(fā)光技術(shù)測(cè)定ENO的同工酶NSE[6~8],本實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)是測(cè)定血清中 ENO 活性,方法簡(jiǎn)便快速,特別在對(duì)腦神經(jīng)是否有損傷具有過篩作用。

    本研究結(jié)果顯示73例腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者血清中烯醇化酶活性與健康組比較顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。ENO活性明顯升高其原因可能是在腦出血、腦梗死的情況下腦組織軟化、壞死、周圍組織水腫、神經(jīng)元細(xì)胞膜完整性破壞,大量的烯醇化酶由神經(jīng)細(xì)胞、血細(xì)胞內(nèi)漏出,導(dǎo)致血清中ENO明顯升高,其中16例患者癥狀輕ENO活性升高不明顯。這與腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞、腦血管受損程度有關(guān),結(jié)果顯示疾病與烯醇化酶活性呈正相關(guān)。據(jù)報(bào)道[9,10]NSE與腦梗死、腦出血臨床關(guān)系密切。我們實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的是烯醇化酶活性,NSE是烯醇化酶的同功酶,實(shí)驗(yàn)病例結(jié)果說明烯醇化酶活性與NSE的關(guān)系呈正相關(guān)。為神經(jīng)系統(tǒng)疾病診療提供參考同樣有一定意義。ENO活性與疾病的進(jìn)展及愈后的關(guān)系我們將作進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)探討。

    1 Fouge rousse F,Edom-vovand F,Me rkulova T,et al.The muaclespecific is an early marker of humam myogencsis[J].muscle Res Cell,2001,22(6):534-544.

    2 Meric E,Ganduz A.Theprognostie in head trauma valueofneuronspecficenolase patients[J].Fmergmed,2008,34:20.

    3 王中原,陳光輝.神經(jīng)元特異性烯醇化酶與腦損傷[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2000,13(4):250-253.

    4 Tracy MR,Hedges SB.Evolutionary history of the enolase genefamily[J].Gene,2000,259(1-2):129-38.

    5 屈洪艷,彭翔,蔡潤(rùn).顱腦損傷患者血清NSE的含量變化及臨床意義[J].國(guó)臨床神經(jīng)外科雜志,2007,12(12):734-735.

    6 季鳳華,周輝,袁伯穩(wěn),等.神經(jīng)元特異性烯醇化酶在小兒癲癇發(fā)作中的診斷價(jià)值[J].江蘇醫(yī)學(xué),2008,349(12):1249-1250.

    7 于雪凡,林世和,孫瑞紅.神經(jīng)元特異性烯醇化酶對(duì)Creutzfeldt-Jakob病的早期診斷價(jià)值[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2008,18(14):2016-2018.

    8 崔俐,林世和,趙節(jié)緒,等.神經(jīng)元特異性烯醇化酶及C-100蛋白對(duì)Creutzfeldt-Jakob病診斷價(jià)值的研究[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,2003,16(4):193-195.

    9 王義剛,邢永前,鄭華,等.神經(jīng)元特異性烯醇化酶與急性腦梗死[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,2001,4(2):74-75.

    10 陳小江,邢永前,鄭華,等.腦出血急性期血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶與神經(jīng)功能缺損的研究[J].現(xiàn)代康復(fù)雜志,2000,4(11):1666-1337.

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