復(fù)方甘草酸苷對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中 IL-4、IL-10和 IL-17表達(dá)水平的影響

孫曉鵬,高聰輝

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江佳木斯 154003)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥為主的自身免疫性疾病,以慢性、對(duì)稱性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)。RA具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚,隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子在 RA的發(fā)病過(guò)程中起著免疫調(diào)節(jié)作用。本研究通過(guò)檢測(cè)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清 IL-4、IL-10和 IL-17水平,來(lái)探討復(fù)方甘草酸苷注射液對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:Wistar大鼠45只,雌性,8～ 10周齡,180～ 220g,清潔級(jí)。 [大連醫(yī)科大學(xué),許可證號(hào):SCXK(遼)2800— 0002]。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑、藥物和儀器:復(fù)方甘草酸苷注射液 (衛(wèi)材藥業(yè)有限公司),完全弗氏佐劑 (CFA,50mg/支)、(Sigma公司 ),IL-4、IL-10、IL-17酶聯(lián)免疫試劑盒。(天津索羅門生物科技有限公司 ),電熱恒溫水槽、ST-21低溫高速離心機(jī)(由佳木斯大學(xué)提供)。

1.2 方法

1.2.1 AA大鼠模型的建立及分組:將 BCG與 CFA臨用前充分搖勻,取適量 BCG與 CFA經(jīng)雙注射器反復(fù)推吸乳化,配置成20mgBCG/mL的乳劑。將45只大鼠隨機(jī)分成正常組(Ⅰ 組)、模型組(Ⅱ 組)和治療組 (Ⅲ 組),每組15只。Ⅱ 組和Ⅲ組每只老鼠75%酒精消毒后,于足跖部注射上述乳劑0.2mL(含 BCG4mg),Ⅰ組予相應(yīng)部位注射 0.2mL生理鹽水。造模后第 6天 ,第12天分別再次注射 10mg BCG/mL的乳劑0.1mL,加強(qiáng)免疫炎癥反應(yīng)。

1.2.2 AA大鼠的干預(yù):從免疫后14天開始,Ⅰ組和Ⅱ組以生理鹽水(1mL/100g體重)腹腔注射14d,Ⅲ組腹腔注射復(fù)方甘草酸苷注射液14d,用藥量相當(dāng)于人 150mg/d。

1.2.3 標(biāo)本的采集及檢測(cè):斷頭取血5mL,低溫離心,取上清液,-80℃保存。用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中 IL-4、IL-10和 IL-17的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

見表1。

表1 大鼠血清 IL-4、IL-10和 IL-17水平的比較 ±s,n=15)

表1 大鼠血清 IL-4、IL-10和 IL-17水平的比較 ±s,n=15)

注:*與正常組相比較 P＜0.05;& 與模型組比較P＜0.05;#與治療組比較 P＞ 0.05。

3 討論

RA的具體病因和發(fā)病機(jī)理目前尚不清楚,研究表明細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的增多是引起關(guān)節(jié)滑膜炎、骨質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能破壞,最終導(dǎo)致畸變的基本原因。近年來(lái) ,關(guān)于 IL-4、IL-10和 IL-17在 RA發(fā)病中的作用的研究越來(lái)越多。復(fù)方甘草酸苷注射液為復(fù)方制劑,由0.2%甘草酸苷、2%甘氨酸和0.1%鹽酸半胱氨酸等組成,主要有效成分為甘草酸苷,其化學(xué)結(jié)構(gòu)類似于皮質(zhì)激素,具有抗炎、抗過(guò)敏、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性作用;半胱氨酸、甘氨酸則加強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用,三種成分共同發(fā)揮協(xié)調(diào)作用,加強(qiáng)了抗變態(tài)反應(yīng)的療效[2]。黃能慧等[3]報(bào)道,給小鼠甘草酸單銨鹽腹腔注射給藥 ,可明顯抑制其化學(xué)性耳廓紅腫及腹腔毛細(xì)血管通透性的增高,明顯減輕急性炎性反應(yīng)時(shí)的紅、腫、熱癥狀。IL-4是由活化的Th2細(xì)胞產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子[4],具有多種生物效應(yīng),主要包括誘導(dǎo)人 B細(xì)胞分化 Ig E分泌細(xì)胞;促進(jìn) IgE產(chǎn)生及細(xì)胞表面 IgE Fc受體 (CD23抗原)的表達(dá);同時(shí)還促進(jìn)肥大細(xì)胞脫顆粒產(chǎn)生炎性介質(zhì)和嗜酸性粒細(xì)胞的局部浸潤(rùn),在變應(yīng)性炎癥的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用[5]。IL-10是一種由 CD4+Th2輔助性 T細(xì)胞亞群產(chǎn)生的、具有生物活性的小分子多肽[6],在免疫過(guò)程中具有廣泛的生物學(xué)活性,表現(xiàn)為既有激活作用又有抑制作用,后者是其主要的生物學(xué)活性,IL- 10的雙重生物學(xué)活性最終導(dǎo)致免疫抑制[7]。

本實(shí)驗(yàn)中大鼠在造模后血清中 IL-4、IL-10水平較正常組明顯下降,與以往的研究結(jié)果相符合。用復(fù)方甘草酸苷注射液治療后大鼠血清中 IL-4、IL-10的表達(dá)水平較模型組明顯升高,說(shuō)明復(fù)方甘草酸苷注射液能促進(jìn)抑炎因子 IL-4、IL-10的分泌與釋放。其可能的機(jī)制是通過(guò)調(diào)解細(xì)胞因子功能 ,糾正 TH1/TH 2比例的失衡,穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜,產(chǎn)生抗體封閉作用,調(diào)節(jié)過(guò)強(qiáng)的細(xì)胞免疫和體液免疫,達(dá)到抗過(guò)敏作用。IL-17是近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)的又一新的細(xì)胞因子,主要由活化 CIM+CD45RO+記憶 T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生,能夠與多種細(xì)胞因子產(chǎn)生協(xié)同作用,以放大炎癥反應(yīng),可誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞分泌 IL-6、IL-8和 G-CSF,促進(jìn)人巨噬細(xì)胞釋放 IL-1β、 TN F- α、 IL-10、 IL-12。本實(shí)驗(yàn)中大鼠在造模后 血清中IL-17水平較正常明顯升高,與以往的研究結(jié)果一致。用復(fù)方甘草酸苷注射液治療后大鼠血清中 IL-17的表達(dá)水平較模型組明顯降低,提示說(shuō)明復(fù)方甘草酸苷注射液能抑制致炎因子 IL-17的分泌與釋放?？赡艿臋C(jī)制是復(fù)方甘草酸苷顯著抑制抗原提呈細(xì)胞對(duì) T細(xì)胞的過(guò)度激活,抑制由 TN F介導(dǎo)的細(xì)胞免疫作用,從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),改善免疫功能,降低不良反應(yīng)。復(fù)方甘草酸苷注射液通過(guò)促進(jìn)抑炎因子 IL-4、IL-10在大鼠血清中的表達(dá),抑制致炎因子 IL-17的分泌與釋放,從而調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)細(xì)胞因子的失衡,有效減輕佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的病情,從而推斷其對(duì) RA具有一定的治療作用。

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