3株細(xì)菌降解木質(zhì)素的條件調(diào)控研究

張歡，柴立元，朱詠華，陳躍輝，靳冉

(1. 中南大學(xué) 冶金科學(xué)與工程學(xué)院，湖南 長沙，410083；2. 湖南大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)研究院，湖南 長沙，410082)

木質(zhì)素是自然界中含量極為豐富的一種天然有機(jī)高分子聚合物，它廣泛存在于植物細(xì)胞壁中，與纖維素和半纖維素一起構(gòu)成植物的支撐骨架。受生物合成的影響，木質(zhì)素分子不像纖維素那樣具有單一結(jié)合形式，而是以苯丙烷類似物為結(jié)構(gòu)單元，通過碳碳鍵、二芳基鍵、烷醚鍵等連接而成的無定形三維空間網(wǎng)狀芳香族高分子聚合物。由于這種聯(lián)建復(fù)雜，木質(zhì)素不像其他自然高聚物(纖維素、淀粉等)一樣易被降解，是目前公認(rèn)的微生物難降解的芳香族化合物之一[1]。木質(zhì)素的微生物降解不僅取決于微生物自身的降解能力，而且在很大程度上依賴于周圍的環(huán)境條件。目前國內(nèi)外有關(guān)微生物木質(zhì)素降解營養(yǎng)調(diào)控機(jī)制的研究表明，木質(zhì)素降解酶活性受碳源、氮源、碳氮比、pH、溶解氧濃度和金屬離子等因素影響。Kirk等[2]通過研究木質(zhì)素降解模式菌黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)認(rèn)為，氮源濃度對其木質(zhì)素降解的影響較為顯著，低氮有利于木質(zhì)素的降解；振蕩培養(yǎng)導(dǎo)致真菌菌絲球的形成嚴(yán)重抑制木質(zhì)素的降解；木質(zhì)素降解的最佳 pH為 4.0～4.5。李翠珍等[3]對其篩選出的 1株白腐真菌F2的木質(zhì)素降解酶生產(chǎn)特性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：限碳和富氮條件下有利于LiP酶的產(chǎn)生；而碳源濃度對其產(chǎn)MnP的影響不大，限氮和富氮條件下都有利于MnP的產(chǎn)生。白腐真菌是木質(zhì)素降解中最主要的微生物，對其木質(zhì)素降解、產(chǎn)酶條件優(yōu)化、實(shí)際應(yīng)用等方面的研究是目前生物技術(shù)應(yīng)用方面的熱點(diǎn)課題[4-5]，然而，細(xì)菌具有生長迅速、來源廣泛、便于基因工程改造及易工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢，因此，對細(xì)菌木質(zhì)素降解的研究也具有很大的應(yīng)用價(jià)值。為此，本課題組前期從三國吳簡蝕斑微生物中分離、篩選得到3株具有木質(zhì)素降解能力的細(xì)菌Acinetobacter sp. B-2，Pandoraea sp. B-6和 Novosphingobium sp. B-7[6]。目前已發(fā)現(xiàn)不動桿菌屬Acinetobacter的一些菌株具有降解木質(zhì)素及其相關(guān)化合物的能力。Delneri等[7]研究了Acinetobacter calcoaceticus DSM 586菌株對木質(zhì)素單體化合物的降解代謝，發(fā)現(xiàn)該菌株能有效地降解反式阿魏酸和對羥苯丙烯酸,并對降解反應(yīng)機(jī)制進(jìn)行了分析。Vasudevan等[8]從森林土壤中分離篩選得到了1株Acinetobacter sp.，測定菌株降解14C標(biāo)記的脫氫高分子聚合物(DPH，被廣泛地用作木質(zhì)素的模型化合物)和柚木木質(zhì)素CO2累積產(chǎn)生量，6 d分別可達(dá)38.9%和 27.2%。雖然對 Pandoraea屬和 Novosphingobium屬的細(xì)菌降解木質(zhì)素及其木質(zhì)素相關(guān)化合物的報(bào)道較少，但有證據(jù)表明它們能降解芳烴類、苯酚類有機(jī)物。Pandoraea sp. 能降解有機(jī)氯殺蟲劑硫丹[9]，而Novosphingobium sp. 能降解聯(lián)苯、萘、氯酚等多種異生物質(zhì)[10]。目前，人們對這3種細(xì)菌的木質(zhì)素降解條件調(diào)控的研究很少。為此，本文作者采用易溶于水的木質(zhì)素磺酸鈉作為天然木質(zhì)素的替代物，探討氮源、氮源濃度、溫度、pH、搖床轉(zhuǎn)速等因素對菌株木質(zhì)素降解性能的影響，從而確定各菌株適宜的木質(zhì)素降解條件，以期為其進(jìn)一步應(yīng)用研究提供一定的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌種

試驗(yàn)用的 3株細(xì)菌為本課題組前期從三國吳簡(長沙簡牘博物館保存)蝕斑微生物中分離篩選得到的菌，分別為不動桿菌屬菌株 B-2(Acinetobacter sp.B-2)、伯克氏菌屬菌株B-6(Pandoraea sp. B-6)和新鞘氨醇桿菌屬菌株B-7(Novosphingobium sp. B-7)。

1.1.2 培養(yǎng)基

(1) 菌種保藏培養(yǎng)基：木質(zhì)素磺酸鈉(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所生產(chǎn))3 g/L，K2HPO41 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，CaCl20.1 g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.05 g/L，MnSO4·H2O 0.02 g/L，KH2PO41 g/L，(NH4)2SO41.98 g/L，瓊脂15 g/L，pH為7.0左右。

(2) 菌種活化培養(yǎng)基：LB培養(yǎng)基(蛋白胨10 g/L，酵母浸膏5 g/L，NaCl 10 g/L，pH為7.0左右)。

(3) 液體降解培養(yǎng)基：木質(zhì)素磺酸鈉 3 g/L，K2HPO41 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，CaCl20.1 g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.05 g/L，MnSO4·H2O 0.02 g/L，KH2PO41 g/L，(NH4)2SO41.98 g/L，pHo 7.0左右。

(4) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BM培養(yǎng)基)：酵母膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，瓊脂15 g/L，pH為7.0左右。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 木質(zhì)素降解酶的定性檢測

采用苯胺蘭(Azure-B)和 RB亮藍(lán)(Remazol Brilliant Blue)染料平板檢測，在BM培養(yǎng)基中分別加入0.1 g/L的染料苯胺蘭和RB亮藍(lán)，鋪平板后接種各菌株，于30 ℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，每天觀察，以平板培養(yǎng)基中菌落周圍脫色圈的有無來定性檢測木質(zhì)素降解酶是否產(chǎn)生。有脫色圈產(chǎn)生記為(+)，無脫色圈產(chǎn)生記為(-)。

1.2.2 菌株的木質(zhì)素降解性能

以LB培養(yǎng)基活化培養(yǎng)細(xì)菌至對數(shù)期，以體積分?jǐn)?shù)1%接種于液體降解培養(yǎng)基中，于30 ℃搖床振蕩培養(yǎng)，每天取樣測定培養(yǎng)液中木質(zhì)素磺酸鈉的濃度，直至木質(zhì)素磺酸鈉濃度不再變化為止。

1.2.3 木質(zhì)素降解的調(diào)控研究

以LB培養(yǎng)基活化培養(yǎng)細(xì)菌至對數(shù)期，以體積分?jǐn)?shù)為 1%接種于降解培養(yǎng)液中培養(yǎng)并進(jìn)行各項(xiàng)檢測分析。選取氮源、氮源濃度、pH、溫度、搖床轉(zhuǎn)速5個(gè)因素進(jìn)行細(xì)菌木質(zhì)素降解實(shí)驗(yàn)。各因素所選取水平見表1。

表1 培養(yǎng)調(diào)控因素及所選水平Table 1 Incubating control factors and parameter levels

1.3 測定方法

1.3.1 木質(zhì)素磺酸鈉-總碳標(biāo)準(zhǔn)曲線測定

準(zhǔn)確稱取木質(zhì)素磺酸鈉1.000 0 g，用蒸餾水定容至 1 L，進(jìn)行適當(dāng)稀釋，得到木質(zhì)素磺酸鈉質(zhì)量濃度為0.1～0.8 g/L的等梯度溶液，分別測定各溶液的總碳(Total carbon，TC)質(zhì)量濃度。以木質(zhì)素磺酸鈉質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，總碳質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)，繪制木質(zhì)素磺酸鈉-總碳質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 木質(zhì)素降解率測定

取培養(yǎng)液4 mL，經(jīng)轉(zhuǎn)速12 000 r/min離心6 min，上清液用直徑為0.22 μm的微孔濾頭(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)過濾，測定濾液TC質(zhì)量濃度。根據(jù)木質(zhì)素磺酸鈉-總碳質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算成木質(zhì)素磺酸鈉的質(zhì)量濃度。根據(jù)降解前后木質(zhì)素磺酸鈉質(zhì)量濃度的比較，即可得到木質(zhì)素降解率。對于所要考察的每種情況同時(shí)進(jìn)行3組平行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。

1.3.3 溶液總碳測定

溶液總碳質(zhì)量濃度采用TOC—VCPH型總有機(jī)碳分析儀(日本島津公司制造)測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 木質(zhì)素降解酶的定性檢測結(jié)果

木質(zhì)素的降解主要是依賴一系列酶的共同作用，這些酶主要包括木質(zhì)素過氧化物酶(Lignin peroxidases,LiP)、錳過氧化物酶(Manganese peroxidases, MnP)和漆酶(Laccase, Lac)。通過定性檢測菌株產(chǎn)木質(zhì)素降解酶的情況，可以初步判斷菌株的木質(zhì)素降解能力。苯胺藍(lán)的脫色與LiP及MnP的產(chǎn)生有關(guān)，但不反映漆酶的產(chǎn)生，漆酶能使RB亮藍(lán)脫色[11-13]，結(jié)果如表2所示。菌株Acinetobacter sp. B-2和Pandoraea sp. B-6對苯胺藍(lán)有較強(qiáng)的脫色能力，對RB亮藍(lán)無脫色作用。Novosphingobium sp. B-7對苯胺藍(lán)和RB亮藍(lán)都有一定的脫色能力。根據(jù)平板的脫色結(jié)果，表明在無木質(zhì)素誘導(dǎo)物存在的情況下3株菌均具有產(chǎn)木質(zhì)素降解酶的能力，但據(jù)苯胺藍(lán)平板脫色反應(yīng)和RB亮藍(lán)脫色反應(yīng)只能簡單判斷菌株的產(chǎn)酶情況，要具體確定菌株的木質(zhì)素降解能力，需進(jìn)行木質(zhì)素降解的定量測定實(shí)驗(yàn)。

表2 菌株平板培養(yǎng)染料的脫色效果Table 2 Effects of bacteria strains on decolorization of dye under plate culture

2.2 木質(zhì)素磺酸鈉-總碳質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

木質(zhì)素磺酸鈉與總碳質(zhì)量濃度測定結(jié)果見圖 1。從圖1可見：木質(zhì)素磺酸鈉溶液質(zhì)量濃度與TC質(zhì)量濃度有很好的正相關(guān)性，可用于樣品木質(zhì)素磺酸鈉質(zhì)量濃度的確定。

圖1 木質(zhì)素磺酸鈉-總碳質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of mass concentration of sodium lignin sulfonate-total carbon

2.3 菌株木質(zhì)素的降解性能

3株細(xì)菌接種到液體降解培養(yǎng)基后，每天取樣測定其木質(zhì)素質(zhì)量濃度，3株菌的木質(zhì)素降解情況如圖2所示。從圖2可見：培養(yǎng)的前3天為3株菌的木質(zhì)素快速降解期，第4天后菌株的木質(zhì)素降解曲線趨于緩和，表明木質(zhì)素的質(zhì)量濃度基本不再變化，菌株對木質(zhì)素的降解基本穩(wěn)定。可見這3株細(xì)菌對木質(zhì)素的降解主要發(fā)生在初級代謝階段，這與Ramachandra等[14]認(rèn)為細(xì)菌的木質(zhì)素降解發(fā)生在初級代謝階段的研究結(jié)論相一致。第4天以后由于細(xì)菌生長進(jìn)入衰亡期，大量細(xì)胞開始死亡并發(fā)生自溶，會導(dǎo)致溶液的TC質(zhì)量濃度升高，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的測定，無法真實(shí)表征菌株的木質(zhì)素降解率，因此，選定培養(yǎng)3 d后測定各條件下菌株的木質(zhì)素降解率。目前，國內(nèi)外有關(guān)木質(zhì)素微生物降解的研究大多集中于真菌，但真菌培養(yǎng)周期長，降解緩慢，需要培養(yǎng)3周甚至更久才能檢測到木質(zhì)素的部分降解[15-16]。習(xí)興梅等[17]從農(nóng)林廢物中分離得到1株黑曲霉，在固態(tài)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)30 d，木質(zhì)素降解率達(dá)16.87%，通常認(rèn)為是非絲狀細(xì)菌降解木質(zhì)素的低相對分子質(zhì)量組分和木質(zhì)素的降解中間產(chǎn)物[18]。孫先鋒等[19]從造紙黑液中篩選分離得到6株細(xì)菌液體，培養(yǎng)12 d后木質(zhì)素的降解率為10%～20%。本研究采用的從三國吳簡蝕斑微生物中分離篩選得到的3株非絲狀細(xì)菌第5天對木質(zhì)素的降解基本趨于穩(wěn)定與多數(shù)菌種相比具有降解速率快、降解時(shí)間短的特點(diǎn)。目前，國內(nèi)外對于非絲狀細(xì)菌的木質(zhì)素降解研究較少，對于這一類微生物的木質(zhì)素降解能力、降解機(jī)制以及其在木質(zhì)素的自然降解中所起的作用還缺乏了解，因此，對于具有高效木質(zhì)素降解能力的非絲狀細(xì)菌的研究具有重要的意義。

2.4 氮源對3株菌木質(zhì)素降解的影響

圖2 菌株木質(zhì)素降解曲線Fig.2 Lignin-degrading curves of bacteria strains

本實(shí)驗(yàn)中的3株細(xì)菌均可以利用木質(zhì)素磺酸鈉為唯一碳源，故選擇最常見的無機(jī)氮源進(jìn)行氮源選擇實(shí)驗(yàn)。分別以硝酸鈉、磷酸氫二銨、硫酸銨、硝酸銨(各為0.03 mol/L)作為唯一氮源，測定3株菌的木質(zhì)素降解率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 3，可見：硝酸銨為菌株Acinetobacter sp. B-2和Novosphingobium sp. B-7的最佳氮源；磷酸氫二銨為菌株P(guān)andoraea sp. B-6最佳氮源。但以氮源為硝酸銨時(shí)，3株菌的木質(zhì)素降解率都相對較高。羅宇煊等[20]對1株嗜堿木質(zhì)素降解菌產(chǎn)酶及麥草木質(zhì)素降解的研究也表明硝酸銨為該菌的最佳產(chǎn)酶氮源。菌株 Acinetobacter sp. B-2和 Pandoraea sp.B-6雖然在4種不同氮源條件下木質(zhì)素降解率有明顯差別，但整體降解率都較高，表明這2株菌氮源具有非專一性。

表3 氮源對菌株木質(zhì)素降解率的影響Table 3 Effect of nitrogen source on lignin degradation by bacteria strains %

2.5 氮源濃度對3株菌木質(zhì)素降解的影響

在木質(zhì)素磺酸鈉濃度不變的條件下，通過改變所選出的 3株細(xì)菌各自的最佳氮源(Acinetobacter sp.B-2，Novosphingobium sp. B-7(碳源為硝酸銨)，Pandoraea sp. B-6(碳源為磷酸氫二銨)的濃度來調(diào)節(jié)降解培養(yǎng)基中的碳氮比。選取從較低濃度到高濃度 5個(gè)梯度，分別測定3株菌的木質(zhì)素降解情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。從圖3可見：不同的氮源濃度對其木質(zhì)素降解有一定的影響，但在所選氮源濃度范圍內(nèi)并未表現(xiàn)出木質(zhì)素降解率和氮源濃度的相關(guān)性?？偟膩碚f，低氮濃度似乎有利于菌株木質(zhì)素降解能力的提高。對Acinetobacter sp. B-2和Novosphingobium sp. B-7，氮源濃度選擇為0.01 mol/L；對Pandoraea sp. B-6，氮源濃度選擇為0.03 mol/L。很多文獻(xiàn)都涉及到氮源濃度對菌株產(chǎn)酶影響的研究，一般認(rèn)為真菌的木質(zhì)素降解發(fā)生在次級代謝階段，限碳或限氮有利于木質(zhì)素的降解或產(chǎn)酶。畢鑫等[21]研究了營養(yǎng)條件對白腐菌No.4510產(chǎn)LiP酶影響，結(jié)果表明限碳有利于LiP酶的產(chǎn)生。喻國策等[22]對黃孢原毛平革菌產(chǎn)木質(zhì)素降解酶的研究發(fā)現(xiàn)，不僅在氮限制條件下而且在較高氮濃度甚至氮充分條件下都檢測到少量LiP酶活性?？梢?，不同菌株其木質(zhì)素降解性能及木質(zhì)素降解酶的產(chǎn)生差別很大。

圖3 氮源濃度對3株菌木質(zhì)素降解的影響Fig.3 Effect of nitrogen source concentration on lignin degradation by bacteria strains

2.6 溫度對3株菌木質(zhì)素降解的影響

由于目前對這3株細(xì)菌木質(zhì)素降解的研究報(bào)道較少，其木質(zhì)素的降解特性尚不清楚，因此，根據(jù)篩選分離菌株時(shí)的環(huán)境條件，初步探討了20，30和40 ℃3種溫度下菌株的木質(zhì)素降解性能，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 4所示。從圖4可以看出：溫度對菌株木質(zhì)素降解性能的影響很大，而且對3株菌的影響趨勢基本相同，于30 ℃時(shí)降解效果明顯好于20 ℃和40 ℃的降解效果。并且這3株菌的耐受溫度范圍較寬；當(dāng)溫度為20 ℃或40 ℃時(shí)，3 d仍有20%左右的降解率。

圖4 溫度對3株菌木質(zhì)素降解的影響Fig.4 Effect of temperature on lignin degradation by bacteria strains

2.7 初始pH對3株菌木質(zhì)素降解的影響

從酸性到堿性調(diào)節(jié)液體降解培養(yǎng)基的初始pH(3.0，5.0，7.0，9.0和11.0)，其他條件保持不變，分別測定3株菌的木質(zhì)素降解率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。從表4可以看出：當(dāng)初始pH為3時(shí)，3株菌均未顯示木質(zhì)素的降解性能；菌株 Acinetobacter sp. B-2和Pandoraea sp. B-6在初始pH為7時(shí)，降解效果最好；而Novosphingobium sp.B-7菌株在初始pH為5時(shí)，降解率最高，菌株 Acinetobacter sp.B-2和Novosphingobium sp.B-7在初始pH為11時(shí)，仍可以檢測到有20%左右木質(zhì)素被降解，而菌株P(guān)andoraea sp. B-6則不能檢測到木質(zhì)素降解效果。造紙廢水一般呈堿性，菌株的這些降解特性對于工業(yè)應(yīng)用極其有利。另外，通過測定3株菌培養(yǎng)數(shù)天后培養(yǎng)基的pH(表5)發(fā)現(xiàn)：不管初始 pH呈偏酸性或偏堿性，其木質(zhì)素降解后培養(yǎng)液的終 pH都有轉(zhuǎn)為中性的趨勢。初步斷定各菌株在木質(zhì)素降解過程中有自動調(diào)節(jié) pH的功能，以保證其最有效地發(fā)揮木質(zhì)素降解能力。

表4 不同初始pH時(shí)的菌株木質(zhì)素降解率Table 4 Lignin degradation rate by bacteria strains at different initial pH values %

表5 菌株木質(zhì)素降解后的最終pHTable 5 Final pH after lignin degradation by bacteria strains

2.8 搖床轉(zhuǎn)速對3株菌木質(zhì)素降解的影響

改變搖床轉(zhuǎn)速，從氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的傳質(zhì)方面考察微生物的生長及其生理特性。分別在60，120，180和240 r/min 4種轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)菌株并檢測其木質(zhì)素降解性能。由圖5可見：3株菌搖床培養(yǎng)的木質(zhì)素降解效果明顯好于靜止培養(yǎng)時(shí)的降解效果；而在振蕩培養(yǎng)時(shí)，轉(zhuǎn)速為120 r/min時(shí)木質(zhì)素的降解已經(jīng)飽和。過快的振蕩可能影響了菌體的正常生長并使得其與木質(zhì)素緊密結(jié)合變得困難，從而阻礙了菌株對木質(zhì)素的降解。120 r/min的搖床轉(zhuǎn)速可以有效地促進(jìn)從培養(yǎng)基到菌體的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的傳遞，對3種菌的生長及木質(zhì)素降解是適當(dāng)?shù)摹?/p>

圖5 搖床轉(zhuǎn)速對降解木質(zhì)素的影響Fig.5 Effects of rotation speed on lignin degradation by bacteria strains

3 結(jié)論

(1) Acinetobacter sp. B-2，Pandoraea sp. B-6和Novosphingobium sp. B-7能使苯胺藍(lán)和RB亮藍(lán)平板脫色，在無木質(zhì)素誘導(dǎo)物的情況下具有產(chǎn)木質(zhì)素降解酶的能力。

(2) 第5天時(shí)，3株細(xì)菌對木質(zhì)素的降解基本趨于穩(wěn)定，具有較快的降解速度，降解效率比目前報(bào)道的多數(shù)菌種的降解效果好。

(3) 采用單因素實(shí)驗(yàn)對 3株細(xì)菌進(jìn)行了木質(zhì)素降解條件的調(diào)控研究，初步確定了3株菌適宜的降解條件。對Acinetobacter sp. B-2，氮源為硝酸銨，氮源濃度為0.01 mol/L，培養(yǎng)溫度為30 ℃，初始pH=7.0，搖床轉(zhuǎn)速為120 r/min；對Pandoraea sp. B-6，氮源為磷酸氫二銨，氮源濃度為0.03 mol/L，培養(yǎng)溫度為30℃，初始 pH=7.0，搖床轉(zhuǎn)速為 120 r/min；對Novosphingobium sp. B-7，氮源為硝酸銨，氮源濃度為0.01 mol/L，培養(yǎng)溫度為30 ℃，初始pH為5.0，搖床轉(zhuǎn)速為120 r/min。在適宜的降解條件下，3株菌第3天降解率均可達(dá)到30%～35%，具有較強(qiáng)的木質(zhì)素降解能力。

[1] Sjostrom E. Wood chemistry, fundamentals and application[M].New York/London: Academic Press, 1993: 107-121.

[2] Kirk T K, Schultz E, Connors W J, et al. Influence of culture parameters on lignin metabolism by Phanerochaete chrysosporium[J]. Archieve of Microbiology, 1978, 117:277-285.

[3] 李翠珍, 文湘華. 白腐真菌 F2的生長及產(chǎn)木質(zhì)素降解酶特性的研究[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2005, 25(2): 226-231.LI Cui-zhen, WEN Xiang-hua. Characterization of growth and ligninolytic enzymes production of a white rot fungus F2[J].Acta Scientiae Circumstantiae, 2005, 25(2): 226-231

[4] 李慧蓉. 白腐真菌生物學(xué)和生物技術(shù)[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 10-30.LI Hui-rong. Biology and biotechnology of white rot fungi[M].Beijing: Chemical Industry Press, 2005: 10-30.

[5] 黃丹蓮, 曾光明, 黃國和, 等. 白腐菌固態(tài)發(fā)酵條件最優(yōu)化及其降解植物生物質(zhì)的研究[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2005, 25(2):232-237.HUANG Dan-lian, ZENG Guang-ming, HUANG Guo-he, et al.Optimum conditions of solid-state fermentation for white-rot fungi and for It’s degrading straw[J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 2005, 25(2): 232-237.

[6] 陳躍輝. 三國吳簡腐蝕斑微生物的分離鑒定及其木質(zhì)素降解性能研究[D]. 長沙：中南大學(xué)冶金科學(xué)與工程學(xué)院, 2009:13-15.CHEN Yue-hui. Identification of microorganisms isolated from erosive bamboo slips Kingdom Wu and characterization of lignin degradation[D]. Changsha: Central South University. School of Metallurgy Science and Technology, 2009: 13-15.

[7] Delneri D, Degrassi G, Rizzo R, et al. Degradation of trans-ferulic and p-coumaric acid by Acinetobacter calcoaceticus DSM 586[J]. Biochimica et Biophysica Acta, 1995, 1244:363-367.

[8] Vasudevan N, Mahadevan A. Degradation of lignin and lignin derivatives by Acinetobacter sp.[J]. Journal of Applied Bacteriology, 1991, 70: 169-176.

[9] Siddique T, Benedict C O, Arshad M. Biodegradation kinetics of endosulfan by fusarium ventricosum and a Pandoraea Species[J].Agric Food Chem, 2003, 51(27): 8015-8019.

[10] Stolz A. Molecular characteristics of xenobiotic-degrading sphingomonads[J]. Appl Microbiol Biotechnol, 2009(81):793-811.

[11] 蔡磊, 尹峻峰, 楊麗萍, 等. 幾種簡便的木質(zhì)素降解真菌定性篩選方法[J]. 微生物學(xué)通報(bào), 2002, 29(1): 67-69.CAI Lei, YIN Jun-feng, YANG Li-ping, et al. Several qualitative methods for the screening of fungi to decompose lignin[J].Microbiology China, 2002, 29(1): 67-69.

[12] Archibald F S. A new assay for lignin-type peroxidases employing the dye Azure B[J]. Appl Environ Microbiol, 1992,58(9): 3110-3116.

[13] 康從寶, 李清心, 劉瑞田, 等. 一株白腐菌產(chǎn)生的漆酶對 RB亮藍(lán)的脫色作用[J]. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào), 2002, 8(3):298-301.KANG Cong-bao, LI Qing-xin, LIU Rui-tian, et al.Decolorization of remazol brilliant blue R by laccase produced from a white rot fugus[J]. Chin J Appl Environ Biol, 2002, 8(3):298-301.

[14] Ramachandra M, Crawford D L. Hertel G. Characterization of an extracellular lignin peroxidase of the lignocellulolytic actinomycete Streptomyces viridosporus[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1998(54): 3057-3063.

[15] Ferraz A, Duran N. Lignin degradation during softwood decaying by the ascomycete Chrysonilia Sitophila[J].Biodegradation, 1995, 6(4): 265-274.

[16] Dey S, Malti T K, Bhattacharyya B C. Production of some extracellular enzymes by a lignin peroxidase-producing brown-rot fungus and its comparative abilities for lignin degradation and dye decolorization[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1994, 60(11): 4216-4218.

[17] 習(xí)興梅, 曾光明, 郁紅艷, 等. 黑曲霉Aspergillus niger木質(zhì)纖維素降解能力及產(chǎn)酶研究[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 26(4):1506-1511.XI Xing-mei, ZENG Guang-ming, YU Hong-yan, et al.Lignocelluloses degrading ability of Aspergillus niger and the enzyme production[J]. Journal of Agro-Environment Science,2007, 26(4): 1506-1511.

[18] Toumela M, Vikman M, Hatakka A, et al. Biodegradation of lignin in a compost environment: A review[J]. Bioresource Technology, 2000, 72: 169-183.

[19] 孫先鋒, 張志杰, 崔紅軍. 造紙黑液木質(zhì)素降解微生物的分離和降解特性研究[J]. 環(huán)境工程, 2002, 20(3): 78-80.SUN Xian-feng, ZHANG Zhi-jie, CUI Hong-jun. Study on isolation of lignin-degradation microorganisms of pulping liquor and degradation characteristics[J]. Environmental Engineering,2002, 20(3): 78-80.

[20] 羅宇煊, 張甲耀, 管筱武, 等. 嗜堿細(xì)菌降解木質(zhì)素的復(fù)合碳源共代謝研究Ⅰ: 復(fù)合碳源組合方式及氮源的選擇[J]. 城市環(huán)境與城市生態(tài), 2000, 13(2): 8-10.LUO Yu-xuan, ZHANG Jia-yao, GUAN Xiao-wu, et al.Research of compounded carbons cometabolism of alkaliphilic ligninolytic bacteria Ⅰ: Selections of compounded carbons and nitrogen sources[J]. Urban Environment and Urban Ecology,2000, 13(2): 8-10.

[21] 畢鑫, 路福平, 杜連祥. 白腐菌木素過氧化物酶發(fā)酵條件及其酶液對稻草降解的研究[J]. 纖維素科學(xué)與技術(shù), 2002, 10(4):41-48.BI Xin, LU Fu-ping, Du Lian-xiang. Optimum conditions for production of lignin peroxidase and degrading rice straw with crude enzyme of LiP[J]. Journal of Cellulose Science and Technology, 2002, 10(4): 41-48.

[22] 喻國策, 文湘華, 李東鋒, 等. 黃孢原毛平革菌在多種氨氮濃度下木質(zhì)素降解酶的產(chǎn)生[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 23(6):802-806.YU Guo-ce, WEN Xiang-hua, LI Dong-feng, et al. Formation of the ligninolytic enzymes by Phanerochaete chrysosporium under various ammonium nitrogen concentrations[J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 2003, 23(6): 802-806.