重度子癇前期患者胎盤組織趨化因子及其受體的表達(dá)和意義

金 峰 喬 寵 尚 濤 (中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科,沈陽 110004)

妊娠免疫耐受是正常妊娠時(shí)母體形成的一種特殊類型的外周免疫耐受,保護(hù)作為半同種移植物的胎兒不被母體免疫系統(tǒng)排斥而成功妊娠,這有賴于免疫活性細(xì)胞的分化及功能調(diào)整。趨化因子(Chemokine,CK)及其受體不但直接參與了淋巴細(xì)胞的增殖和活化,還促進(jìn)母胎界面T淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞的游走和活化,可影響一系列的細(xì)胞活動,包括粘附、血管生成和擴(kuò)散[1]。因此CK受體與配體結(jié)合后,不僅可趨化各種白細(xì)胞游走至局部發(fā)揮免疫作用,也可參與滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤及分化,影響胎盤的形成和發(fā)育,而滋養(yǎng)細(xì)胞侵潤等功能障礙則可導(dǎo)致相關(guān)病理妊娠的發(fā)生[2]。本研究采用免疫組化及RTPCR方法檢測正常足月妊娠婦女及子癇前期患者胎盤組織中趨化因子CXCL16,CXCR6,CCL2,CCR2的表達(dá),旨在探討其在子癇前期發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2008年1月～2009年2月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院產(chǎn)科收治并行剖宮產(chǎn)的子癇前期患者共55例(其中輕度20例,重度35例),孕35～38周,平均年齡(28±3)歲,診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[3]。正常晚期妊娠組:選擇同期在我科行擇期剖宮產(chǎn)的正常晚期妊娠孕婦共40例為對照,孕38～40周,平均年齡(27±5)歲,本次妊娠經(jīng)過正常,胎兒發(fā)育正常,無任何并發(fā)癥和合并癥,既往無不良妊娠史,無原發(fā)高血壓、糖尿病、慢性腎炎等病史。

1.2 研究方法 全部標(biāo)本均在手術(shù)時(shí)采集,胎盤娩出后即刻取母面中間帶胎盤組織約2 cm×2 cm×2 cm,在生理鹽水中漂洗干凈后,置于10%中性甲醛溶液中固定8～24小時(shí),低溫石蠟包埋,制成蠟塊,置-20攝氏度冰箱干燥保存,待切片及免疫組化染色。

1.3 檢測方法 免疫組織化學(xué)分析和染色均按照購得的ABC免疫組化試劑盒說明書操作,按規(guī)定步驟進(jìn)行免疫組化染色,山羊抗人CCR2多克隆抗體,小鼠抗人CCL2單克隆抗體,小鼠抗人CXCR6單抗,山羊抗人CXCL16多抗購自北京金橋生物技術(shù)有限公司。結(jié)果判定:光鏡下觀察細(xì)胞質(zhì)中有棕黃色著色為陽性染色,采用Biosen圖像分析系統(tǒng)對各組切片進(jìn)行分析,用陽性反應(yīng)平均灰度值(總灰度/掃面面積)代表組織中表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SSPS13.0行t檢驗(yàn),單因素方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 三組胎盤組織中CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2 的免疫組化檢測結(jié)果 三組孕婦年齡、孕產(chǎn)次等一般資料比較無顯著性差異。三組孕婦胎盤組織中合體滋養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)均見CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2陽性染色,其平均灰度值比較見表1。

2.2 重度子癇前期組CXCL16、CXCR6的平均灰度值顯著低于正常晚期妊娠組(P＜0.05),子癇前期輕度組CXCL16、CXCR6雖低于正常晚期妊娠組,但

表1 各組孕婦胎盤組織表達(dá) CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2的平均灰度值Tab.1 Expression of CXCL16,CXCR6,CCL2 and CCR2 in placenta in each group

3 討論

子癇前期病理研究顯示:子癇前期胎盤存在生理性血管重鑄障礙、絨毛面積減少、密度低等改變,其中生理性血管重鑄障礙被稱為子癇前期的特征性病理改變。胎盤灌注不足導(dǎo)致胎盤缺血和代謝障礙,引起胎盤源性毒性因子的產(chǎn)生,并進(jìn)而造成血管內(nèi)皮損傷、血管活性物質(zhì)平衡失調(diào)[4]。生理性血管重鑄依靠于滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、分化、融合及侵蝕能力,且需要局部微環(huán)境的精密調(diào)節(jié),而子癇前期滋養(yǎng)細(xì)胞的功能顯著下降,因此滋養(yǎng)細(xì)胞的功能障礙是其發(fā)病的主要原因。近年來,免疫活性細(xì)胞對滋養(yǎng)細(xì)胞的調(diào)控日益受到人們的重視。

趨化性細(xì)胞因子家族是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最大的細(xì)胞因子亞群,是一組相對分子量為8 000～10 000的分泌型單鏈蛋白質(zhì)組合,是細(xì)胞因子家族中唯一作用于G蛋白偶聯(lián)受體超家族的成員,包括四個(gè)亞家族:CXC型、CC型、C型、CX3C型[5]。趨化因子受體屬七次跨膜受體家族,與異源三聚體G蛋白連接,決定配體結(jié)合的特異性,膜內(nèi)側(cè)受體與GTP蛋白偶聯(lián),啟動信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。根據(jù)與不同趨化因子結(jié)合,趨化因子受體分為 CXCR、CCR、CR、CX3CR四型。趨化因子受體可表達(dá)于多種免疫活性細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞以及其他炎癥細(xì)胞表面[6]。趨化因子配受體的結(jié)合可引發(fā)胞內(nèi)復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng),調(diào)節(jié)靶細(xì)胞的生物活性,包括特異性趨化作用,行使調(diào)控免疫細(xì)胞定向遷移和相互作用的生物學(xué)功能,在免疫系統(tǒng)分化成熟、免疫監(jiān)視、免疫自穩(wěn)、造血及機(jī)體發(fā)育過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用,還可表達(dá)于上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞,參與血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移等病理生理過程。

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)孕晚期胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞均表達(dá) CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2,子癇前期重度患者胎盤組織CXCL16、CXCR6顯著下降,正常妊娠婦女和子癇前期患者胎盤組織CCL2、CCR2的表達(dá)無明顯變化。胎盤絨毛組織主要由滋養(yǎng)細(xì)胞組成,是唯一與母體蛻膜密切接觸的胎兒部分,構(gòu)成了獨(dú)特的母胎界面免疫微環(huán)境,不僅承擔(dān)著內(nèi)分泌功能還對胎盤的形成至關(guān)重要。CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2在滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)說明胎盤絨毛組織可能通過共表達(dá)趨化因子及其相應(yīng)受體調(diào)節(jié)自身功能,又可通過旁分泌趨化因子調(diào)控臨近組織,從而建立組織間及自身的聯(lián)系。CXCL16與其受體CXCR6結(jié)合后,可經(jīng)異三聚體G蛋白、磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B等途徑促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化,抑制細(xì)胞凋亡,提高細(xì)胞的侵襲能力[7]。人動脈粥樣硬化損傷部位的平滑肌細(xì)胞表達(dá)CXCL16和CXCR6,應(yīng)用外源性的CXCL16處理后,不僅能夠加強(qiáng)細(xì)胞間的牢固黏附,還能促進(jìn)細(xì)胞的增殖,延緩細(xì)胞凋亡[8]。滋養(yǎng)細(xì)胞也能通過自分泌或旁分泌CXCL16及自身表達(dá)的CXCR6調(diào)節(jié)和促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、分化和侵襲[9]。子癇前期重度患者胎盤組織CXCL16、CXCR6顯著下降,提示可能引起滋養(yǎng)細(xì)胞侵入缺陷而導(dǎo)致子宮螺旋動脈重鑄障礙。

綜上所述,趨化因子及其受體可能參與滋養(yǎng)細(xì)胞的調(diào)控,在胎盤形成和發(fā)育中其重要作用,其異常表達(dá)可能是子癇前期重度患者發(fā)病的主要原因之一。

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