賓天海 黃健軍
1.廣西古方藥業(yè)有限公司,廣西 南寧 530221;2.廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,廣西 南寧 530001
穿龍骨刺膠囊由穿山龍、淫羊藿、狗脊、川牛膝、熟地黃、枸杞子等6味藥組成的復(fù)方制劑,功能主要用于補腎,健骨,活血,止痛。用于骨質(zhì)增生,骨刺疼痛等。本方中淫羊藿含淫羊藿苷成分,淫羊藿苷為本方中有效成分之一。因此測定本品中淫羊藿苷的含量,可作為本品質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。為了更好的控制該制劑的質(zhì)量,保證藥品使用安全、有效,本文采用HPLC法測定了淫羊藿苷的含量。
LC-10AP型高效液相色譜儀 (日本島津公司);SPD-10Avp紫外-可見檢測器;LC-10ATVP7725(i)型手動進樣器;威瑪龍色譜數(shù)據(jù)工作站;Aglient 8456紫外可見分光光度計;kh-250db型超聲處理器 (昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。
淫羊藿苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供,批號為:0737-200111(含量測定用 );穿龍骨刺膠囊 (購自A廠,共3批);甲醇、乙腈為色譜純;其余試劑為分析純,水為超純水。
2.1 色譜條件 色譜條件為:色譜柱為Dikma OP-ODS柱 (4.6×250mm,5μm);流動相為乙腈 -水 (30∶70),流速為1.0ml/min,檢測波長為210nm,進樣量為10μl;柱溫為室溫;理論塔板數(shù)按淫羊藿苷計算應(yīng)不低于5000。在上述色譜條件下,供試品中淫羊藿苷能完全分離,對照品與陰性對照品溶液中沒有峰重疊,色譜圖見圖1。
2.2 對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品適量,加甲醇溶解制成每1ml含淫羊藿苷0.05mg的溶液,作為對照品溶液。
2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的內(nèi)容物適量,研細,取約0.2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇溶液20ml,具塞,稱定重量,超聲 (功率250W,頻率50kHz)40min。取出,放至室溫,稱重,用70%乙醇溶液補足損失的重量,用微孔濾膜 (0.45μm)濾過,續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10μl,注入液相色譜儀,以上述色譜條件測定,根據(jù)淫羊藿苷峰面積,以外標(biāo)法計算供試品中淫羊藿苷含量。
2.5 線性關(guān)系考察 取濃度為0.512mg/ml淫羊藿苷對照品溶液,分別精密量取適量,分別加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為0.01024、0.0256、0.0512、0.0768、0.1024mg/ml的淫羊藿苷對照品溶液,分別進樣10μl,按擬定的色譜條件測定,以峰面積積分值為縱坐標(biāo)、淫羊藿苷進樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算得回歸方程:r=9472.1X-6038.4,r=0.9998。結(jié)果表明:淫羊藿苷濃度在0.01~0.1mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.6 精密度試驗 取同一供試品溶液,精密量取10μl,連續(xù)進樣6次,測定淫羊藿苷峰面積,其RSD為1.13%,表明儀器精密度良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液 (批號:20091001)10μl,分別于0、4、8、12、16、24小時進行測定,其峰面積RSD為1.11%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8 陰性對照試驗 按處方比例取處方中缺淫羊藿的各味藥材,照制法制取缺淫羊藿陰性樣品。取陰性樣品按供試品溶液提取方法制成陰性對照溶液,測定,在上述色譜條件下,缺淫羊藿陰性對照溶液,在淫羊藿苷色譜峰處無干擾峰出現(xiàn),表明對被測成分無干擾。
2.9 重復(fù)性試驗 取供試品10粒,取其內(nèi)容物,研細,精密稱取五份,每份約0.2g,按前述方法制成供試品溶液,按擬定的色譜條件測定峰面積,RSD%=1.31,表明重復(fù)性良好。
2.10 加樣回收率試驗 采用加樣回收法,取已知含量的穿龍骨刺膠囊 (20091001)內(nèi)容物,研細,精密稱取6份,每份0.1g,分別添加已配制好的濃度為0.408mg/ml淫羊藿苷對照品溶液1ml,蒸干,按“供試品溶液制備”項下的方法制成供試品溶液。按擬定的色譜條件測定,計算回收率。結(jié)果見表1。
2.11 樣品中淫羊藿苷的含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液3批,按上述色譜條件測定,以外標(biāo)法計算,結(jié)果見表2。
表1 淫羊藿苷回收率試驗結(jié)果
表2 樣品含量測定結(jié)果
3.1 流動相的選擇 參考文獻 [1]乙腈-水 (27∶73)溶液,乙腈-水 (30∶70)通過比較兩者不同配比下的分離效果,最終確定為乙腈-水 (30∶70),此條件下,從色譜圖形分析看,淫羊藿苷拖尾因子較小,樣品分離效果好,陰性對照無干擾。
3.2 提取溶劑的選擇 以文獻[2]甲醇、70%乙醇和80%乙醇為提取溶劑時,都能充分提取樣品中的淫羊藿苷,考慮到甲醇的毒性,最終選用70%乙醇溶液為提取溶劑。
[1]劉燦輝,譚浩軍.高效液相色譜法測定老年咳喘片中淫羊藿苷含量[J].中國藥業(yè),2009,18(18):36.
[2]喻貴英,劉偉霞,郭平牯,等.穿龍刺骨片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中國醫(yī)藥雜志,2004,1(6):231-234.