清胃理腸膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠潰瘍性結(jié)腸炎作用機(jī)制的研究*

劉先知 王長(zhǎng)海 劉華劍 田 心

第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院（陜西西安710032）

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種慢性直腸和結(jié)腸炎性疾病，病因尚未明確，具有反復(fù)發(fā)作難以治愈的特點(diǎn)，且存在癌變可能性［1］。目前西醫(yī)治療主要采用氨基水楊酸制劑和腎上腺皮質(zhì)激素等藥物，但不良反應(yīng)多，停藥易復(fù)發(fā)。大量臨床資料表明中醫(yī)藥在UC治療中具有全面調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，不良反應(yīng)少及有效預(yù)防復(fù)發(fā)等優(yōu)勢(shì)。清胃理腸膠囊是第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院王長(zhǎng)海教授自制中成藥，臨床治療UC 8年，療效確切。本實(shí)驗(yàn)從病理變化和免疫因素方面探討了清胃理腸膠囊的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物普通級(jí)SD大鼠62只，體質(zhì)量180～220 g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為正常組12只和造模組50只。

1.2 試藥和儀器清胃理腸膠囊（由枳實(shí)、山梔、白及、陳皮、半夏、檳榔、萊菔子、延胡索、大黃、生甘草組成）由第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科提供，0.3g/粒。棄膠囊殼，用蒸餾水將藥粉配置成100mg/mL的混懸液。柳氮磺吡啶片（SASP），批號(hào)：091110，由上海信誼嘉華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，0.25g/片，粉碎，用蒸餾水配置成50 mg/mL的混懸液。2，4-二硝基氯苯由上海日初生物公司提供；抗體及溶血素由eBioscience公司生產(chǎn)。流式細(xì)胞儀為美國(guó)BD公司生產(chǎn)，型號(hào)FACS Aria。

1.3 模型制備及分組造模組大鼠頸背部剃毛，每日以20g/L的 2，4-二硝基氯苯丙酮液滴背1次，每次每鼠0.3mL，連續(xù)14d，第15日用直徑2mm硅膠管經(jīng)肛門插入結(jié)腸8cm處，注入0.04mmol/L的2，4-二硝基氯苯乙醇液0.25mL，第16日同部位注入體積分?jǐn)?shù)8%的醋酸溶液2mL，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)15s后用0.85%氯化鈉溶液5mL沖洗［2］。造模結(jié)束次日，觀察大鼠一般狀況及糞便形態(tài)。并隨機(jī)抽取正常組及造模組各2只大鼠處死，分離肛門上7～9cm處的結(jié)腸黏膜，肉眼觀察比較其形態(tài)區(qū)別，并取部分結(jié)腸10%甲醛固定，做病理切片檢查，判斷造模是否成功。余造模組48只大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、清胃理腸膠囊組、柳氮磺吡啶（SASP）組，每組 16 只。

1.4 給藥方式造模結(jié)束次日灌胃給藥。根據(jù)人和動(dòng)物用藥劑量換算公式［3］（大鼠用藥劑量=6.25×人的用藥劑量）確定給藥劑量。大鼠稱體質(zhì)量，取約值，清胃理腸膠囊組按3mL/只給藥，SASP組按2mL/只給藥。正常組和模型對(duì)照組給予生理鹽水。每日1次灌胃給藥，共持續(xù)20d。

1.5 指標(biāo)觀察觀察造模過(guò)程中及給藥前后各組大鼠的一般情況。T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：給藥結(jié)束次日，2%戊巴比妥鈉（3mL/kg）麻醉大鼠，心臟取血100μL置入肝素鈉真空抗凝采血管，加 CD4、CD8單克隆抗體各 20μL；混勻避光孵育 30min，加溶血素0.5mL混勻，10min后1500r/min離心5min，去上清，加PBS 500μL上機(jī)檢測(cè)。病理檢查：取血后，剖腹取肛門以上6～9cm處腸段，沿腸系膜縱軸剪開(kāi)，冰生理鹽水洗凈；黏膜向上平鋪，觀察病理改變。然后剪取部分結(jié)腸，10%甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察病理變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)用±s）表示，組間比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般情況造模后3d內(nèi)大鼠精神萎靡，迅速消瘦，皮毛稀疏，出現(xiàn)膿血便。個(gè)別出現(xiàn)腹部鼓脹，該類動(dòng)物都在2～3d內(nèi)死亡。模型對(duì)照組死亡3只，清胃理腸膠囊組死亡1只，SASP組死亡2只。

2.2 病理改變大體病理改變：肉眼可見(jiàn)，正常大鼠結(jié)腸黏膜完整，薄而光滑，有一定透明度；模型大鼠結(jié)腸黏膜普遍水腫、糜爛、潰瘍、附著偽膜，并覆蓋有連結(jié)成片的膿苔。組織病理改變：光鏡下可見(jiàn)，正常組黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整，固有層腺體排列整齊密集；模型組黏膜上皮細(xì)胞廣泛脫落，血管壁增厚，組織水腫，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，潰瘍?nèi)诤铣善?，隱窩消失；經(jīng)治療，清胃理腸膠囊組大鼠結(jié)腸接近正常，上皮結(jié)構(gòu)完整，充血消失，有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；SASP組仍有輕度水腫（圖1）。T淋巴細(xì)胞亞群的變化：模型組與正常組比較下降明顯，升高，差異具有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）；清胃理腸膠囊組和SASP組經(jīng)治療后，與模型組比較，均顯示水平升高，降低，差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）；清胃理腸膠囊組指標(biāo)接近正常對(duì)照組，兩組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05），其作用優(yōu)于 SASP 組（P＜0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 各組大鼠病理組織圖（×400）

3 討 論

UC急性期的基本病理改變?yōu)楣逃心?nèi)彌漫性淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞等細(xì)胞浸潤(rùn)，在反復(fù)發(fā)作的慢性過(guò)程中，因黏膜不斷被破壞和修復(fù)，鏡下可見(jiàn)隱窩結(jié)構(gòu)紊亂表現(xiàn)為腺體變形、排列紊亂、數(shù)目減少等萎縮改變，伴杯狀細(xì)胞減少和帕內(nèi)特細(xì)胞化生。其病理改變的機(jī)制目前認(rèn)為是由于腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡、增殖異常導(dǎo)致腸黏膜上皮缺失，細(xì)胞間緊密連接的動(dòng)態(tài)完整性破壞，削弱和破壞腸黏膜屏障，使原本受到隔離或可被清除的致病因子獲得機(jī)會(huì)直接接觸腸黏膜［4］。

表1 各組大鼠檢測(cè)結(jié)果比較 （±s）

表1 各組大鼠檢測(cè)結(jié)果比較 （±s）

與模型組比較，*P＜0.05；與 SASP組比較，△P＜0.05。

組 別 n CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+正常組 10 44.8±3.6* 24.9±1.4* 1.80±0.20*模型組 13 36.9±1.1 17.9±2.9 2.49±0.29清胃理腸膠囊組 15 43.8±3.4*△ 24.3±1.2*△ 1.81±0.22*△SASP 組 14 41.8±1.7* 21.3±2.1* 1.97±0.13*

UC發(fā)病機(jī)制現(xiàn)尚不明確，但大量研究表明與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)：多數(shù)UC患者存在細(xì)胞免疫失衡，各亞群間的功能不能互相協(xié)調(diào)而對(duì)腸黏膜造成損害。免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)維持免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起關(guān)鍵作用，現(xiàn)已明確亞群對(duì)免疫反應(yīng)的發(fā)生和抗體的產(chǎn)生有抑制作用，亞群誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的產(chǎn)生和輔助抗體生成，二者之間的動(dòng)態(tài)平衡決定了免疫反應(yīng)是否發(fā)生，如二者比例失衡可影響抗體的生成，使UC的致病抗原不能得到徹底清除，從而與潰瘍性結(jié)腸炎的反復(fù)發(fā)作有密切關(guān)系［5］。

該病主要臨床癥狀有腹瀉、腹痛、膿血便、里急后重等，在中醫(yī)學(xué)屬于“腸癖”、“腸風(fēng)”、“痢疾”等范疇，致病因素以濕熱之邪為主，濕熱蘊(yùn)結(jié)，擾亂下焦氣化，故腹瀉；邪據(jù)于下焦致氣血不通，故腹痛，里急后重；濕熱之邪傷及血絡(luò)，故下痢赤白而成膿血便，又因濕性黏滯而纏綿難愈。清胃理腸膠囊組方為枳實(shí)、山梔、白及、陳皮、半夏、檳榔、萊菔子、延胡索、大黃、生甘草，以去濕熱之邪治本為基本原則，兼秉“行血?jiǎng)t便膿自愈，調(diào)氣則后重自除”的治痢大法。山梔、半夏、檳榔、大黃等藥行氣燥濕除熱；枳實(shí)、陳皮、萊菔子調(diào)氣；白及、延胡索止血并行血；甘草為使調(diào)和眾藥。諸藥合用，行氣活血而治標(biāo)，燥濕除熱而治本，可達(dá)標(biāo)本同治之功，因此取得良好臨床療效。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，清胃理腸膠囊能改善病變結(jié)腸的病理?yè)p傷，并提升外周血、百分率，降低CD4+/CD8+水平，具有免疫調(diào)節(jié)作用。因此推斷清胃理腸膠囊主要通過(guò)改善結(jié)腸病理?yè)p傷以及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能實(shí)現(xiàn)其對(duì)UC的治療作用。

［1］郝微微.潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)理的研究進(jìn)展［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2002，31（12）：1100-1102.

［2］江學(xué)良，崔慧斐.潰瘍性結(jié)腸炎［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2004：106.

［3］Capomolla S，F(xiàn)ebo O，Gnemmi M，et al.β-Blockadetherapy in chronic heart failure：diastolic function and mitral regurgitation improvement by carvedilol［J］.AmHeart J，2000，139（4）：596-608.

［4］Yan SZ.Circulating lymghocyte Subpopulations in Crohn’s Disease［J］.Gastroenterol，1983，85（6）：1313.

［5］鄧志波.潰瘍性結(jié)腸炎外周血 T淋巴細(xì)胞亞群的研究［J］.河北醫(yī)學(xué)，2004，10（8）：675-676.