清熱解毒方劑腹腔注射對急性腹膜炎大鼠血清 TNF-α、IL-6、IL-8 水平的影響

馮麗麗，張愛平，李華偉，龐明珍

(1鶴壁職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南鶴壁458030;2河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院)

研究發(fā)現(xiàn)［1］，腹腔感染過程中大量炎性細(xì)胞被激活，釋放大量炎性細(xì)胞因子，導(dǎo)致組織和臟器的功能障礙。中藥清熱解毒方劑具有抗炎作用，臨床上常用于感染性疾病的治療。2010年1月～2011年2月，我們對急性腹膜炎大鼠模型，在造模前腹腔內(nèi)預(yù)防性注射清熱解毒方劑，觀察其血清中腫瘤壞死因子 α(TNF-α)、IL-6、IL-8 水平變化，探討清熱解毒方劑對這些細(xì)胞因子的影響以及對臟器的保護作用。

1 材料與方法

1．1 實驗動物分組及建模 成年健康 Wistar大鼠90只(河南中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供)，雌雄不限，體質(zhì)量200～220 g。標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料喂養(yǎng)1周后開始實驗。隨機分為正常組、模型組和實驗組，各30只。模型組和實驗組均按照文獻［2］的方法大鼠腹腔注射表皮葡萄球菌液制作腹膜炎大鼠模型。

1．2 清熱解毒方劑制備及給藥方法 清熱解毒方劑由河南中醫(yī)學(xué)院藥研室制備，為含生藥量1 g/ml的濃縮煎劑。實驗組于造模前1 h一次性給予清熱解毒方劑18 g/kg腹腔注射。

1．3 檢測指標(biāo)及方法 模型組和實驗組分別于造模后6、12、24 h用10%水合氯醛麻醉，每次10只，取腹主動脈血5 ml采用ELISA法檢測血清中TNF-α、IL-6、IL-8。按ELISA試劑盒(北京晶美生物工程公司)說明書操作。

1．4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS12．0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，采用配對t檢驗。P≤0．05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

三組血清TNF-α、IL-6、IL-8水平比較見表1。

表 1 三組血清 TNF-α、IL-6、IL-8 水平比較(pg/ml，ˉx ±s)

3 討論

研究顯示，腹膜炎引發(fā)的感染目前仍是外科重癥患者的主要死因之一［3］。機體對重癥感染引起的膿毒癥是細(xì)菌、內(nèi)毒素等抗原激活宿主單核巨噬細(xì)胞釋放多種細(xì)胞因子所致［4］。腹腔感染過程中大量被激活的炎性細(xì)胞釋放多種炎癥介質(zhì)，包括促炎、抗炎細(xì)胞因子，TNF-α、IL-6、IL-8即是誘發(fā)膿毒血癥以及多器官功能衰竭的重要的促炎細(xì)胞因子［5］。

TNF-α是免疫炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)，由活化的單核巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生具有激活中性粒細(xì)胞和刺激IL-8釋放等作用。TNF-α參與了機體的免疫損傷［6］。IL-8是一種中性粒細(xì)胞趨化因子，在其他細(xì)胞因子的作用下，單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等均產(chǎn)生大量IL-8，并與上述細(xì)胞表面的IL-8受體結(jié)合，趨化炎癥細(xì)胞到達炎癥部位引起炎癥反應(yīng)［7］。IL-6是一種主要由活化的單核巨噬細(xì)胞及B、T淋巴細(xì)胞和成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等分泌的具有多種生物功能的炎癥細(xì)胞因子，在機體炎癥反應(yīng)中起著重要作用［8］。

本實驗發(fā)現(xiàn)，腹膜炎模型大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-8水平較正常組明顯升高(P＜0．05)。因此可以推斷，在腹膜炎時單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等處于一種過激活狀態(tài)，釋放大量炎癥因子。

清熱解毒方劑由大黃、黃芩、白頭翁、敗醬草等中藥組成，清熱解毒復(fù)方制劑是中醫(yī)臨床常用藥物，目前多用于治療各種感染性疾病及因非感染疾病而出現(xiàn)的熱毒壅盛者，對某些腫瘤患者也有一定的療效。對單味清熱解毒中藥的研究已證明其具有抗菌、抗病毒、抗毒素、解熱、抗炎、調(diào)節(jié)免疫功能等作用。近年來清熱解毒復(fù)方制劑的實驗研究也受到關(guān)注。臨床上常用于治療急腹癥［9］。根據(jù)本實驗結(jié)果，腹膜炎模型大鼠預(yù)防性腹腔注射清熱解毒方劑(僅1次)后，其血清 TNF-α、IL-6、IL-8水平明顯低于沒有注射該方劑的模型組 (P均＜0．05)。提示清熱解毒方劑能夠顯著抑制因炎癥刺激造成的細(xì)胞因子的過度分泌。通過炎癥細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的免疫調(diào)節(jié)作用，阻斷了細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的惡性循環(huán)，減輕組織及臟器損傷。說明，清熱解毒方劑對急性腹膜炎大鼠起保護作用。

［1］陳紅風(fēng)．中醫(yī)外科學(xué)［M］．北京:中國中醫(yī)藥出版社，2005:595．

［2］張秀麗，馬健飛，吳詠今，等．姜黃素預(yù)處理后大鼠急性腹膜炎腹膜腫瘤壞死因子α的檢測［J］．中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，38(10):749-750．

［3］吳少禎．常見疾病的診斷與療效判定標(biāo)準(zhǔn)［M］．北京:中國中醫(yī)藥出版社，1999:732．

［4］Gosain A，Gamelli RL．A primerin cytokines［J］．Burn Care Rehabil，2005，26(2):7212．

［5］Bhatia M，Mocchhala S．Role of inflammatory mediatorsin the pathophysiology of acute respiratory distress syndrome［J］．Pathol，2004，20(2):145-156．

［6］謝藝，崔華雷，王曉曄，等．腹膜炎大鼠肺泡巨噬細(xì)胞分泌IL-1、TNF的變化及大黃牡丹皮湯的調(diào)節(jié)作用［J］．臨床小兒外科雜志，2007，6(2):44-45．

［7］Halbertsma FJ，Vaneker M，Scheffer GJ，et al．Cytokinesand biotrauma in ventilator-induced lung injury:a critical review of the literature［J］．Neth J Med，2005，63(10):382-392．

［8］Nadiri A，Kuchler Bopp S，Haikel Y，et al．Immunolocalization of-BMP-2/-4，F(xiàn)GF-4，and WNT10b in the developing mouse first lower-molar［J］．J Histochem Cytochem，2004，52(1):103-112．

［9］薛小平，李東華，張浩．清熱解毒方對急性細(xì)菌性腹膜炎大鼠血清內(nèi)毒素及細(xì)胞因子的影響［J］．中國實驗方劑學(xué)雜志，2010，16(6):44-45．