野生及雜交盤(pán)羊的電刺激采精技術(shù)研究

高俊杰，潘永斌，陳海軍，王東軍，劉永祥，張 冰，王 瀟，張居農(nóng)

（1.內(nèi)蒙古通遼市畜牧獸醫(yī)科學(xué)技術(shù)研究所，通遼 028000；2.新疆兵團(tuán)農(nóng)九師170團(tuán)；3.內(nèi)蒙古博恩藥業(yè)；4.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院；5.解放軍第474醫(yī)院；6.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆 832003）

精液采集是人工授精的重要環(huán)節(jié)，常用方法主要有假陰道法和按摩法，已在牛、馬、羊、豬和雞等畜禽上成功應(yīng)用［1］。而在野生動(dòng)物或人工馴養(yǎng)的野生動(dòng)物上，由于其野性強(qiáng)、性情暴烈，常采用電刺激法采集精液，如海貍鼠［2］、大熊貓［3-4］、鹿［5］、猴［6-7］、林麝［8］、黑熊［9］、烏蘇里貂等［10-11］，而國(guó)內(nèi)對(duì)于盤(pán)羊的相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道［12］。

盤(pán)羊（Ovis ammon），別名大頭羊、大角彎羊，屬于哺乳綱、偶蹄目、?？啤⒀騺喛频木d羊?qū)?，是?guó)家瀕危滅絕的II級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物，已經(jīng)列入《聯(lián)合國(guó)瀕危動(dòng)物植物名錄》，主要分布在我國(guó)的內(nèi)蒙古、甘肅、青海、新疆和西藏以及亞洲的蒙古、印度北部、錫金等地［12］。為開(kāi)發(fā)利用特種品種資源，本實(shí)驗(yàn)于2008年7月—2009年12月，分別在新疆和內(nèi)蒙古對(duì)野生盤(pán)羊及雜交后代進(jìn)行了電刺激采精技術(shù)的研究與探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 公羊的飼養(yǎng)及管理 選用舍飼條件下15只體質(zhì)較好的1～5歲成年公羊。平均體重70 kg，舍飼時(shí)間超過(guò)1年，對(duì)飼養(yǎng)人員具有一定的親和性。供試羊的日糧組成主要為青貯、干草、玉米等，1日喂2次，清潔飲水。采精前對(duì)公羊禁食24 h，不禁水。

1.2 儀器及藥品 DZCJ-4型電子采精儀（吉林大學(xué)生產(chǎn)，輸出電壓 0～20V）；OLYMPUS 生物顯微鏡；5～20mL一次性注射器；載玻片和蓋玻片；靜松靈注射液（蘭州正豐制藥有限責(zé)任公司，5mL∶100 mg），蘇醒靈。

1.3 公羊的生殖保健 采用張春禮、張居農(nóng)等的公羊生殖保健的技術(shù)程序［13］，對(duì)參加本實(shí)驗(yàn)的野生及雜交盤(pán)羊?qū)嵤┥潮＝　?/p>

1.4 麻醉與保定 采精前對(duì)公羊進(jìn)行麻醉，麻醉方法采用肌肉注射靜松靈（2 mg/kg）。數(shù)分鐘后，迅速將其推倒，側(cè)臥保定，頸部下墊草袋，1人保定頭部。剪盡包皮和尿道口周?chē)谋幻?，用生理鹽水洗凈擦干，溫水灌腸，排出肛門(mén)中的積糞。

1.5 電刺激采精 將涂有凡士林的電子采精器探棒緩慢插入直腸內(nèi)8～12cm，使探棒線圈貼緊腰椎腹側(cè)面。打開(kāi)電刺激采精儀電源開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)輸出電壓，由低至高，先后順序?yàn)?～20V，每檔刺激持續(xù)時(shí)間3～5 s（秒），每次間歇3～1 s，逐步篩選出能適宜采精的輸出電壓和刺激時(shí)間。用集精杯分段接精液，并迅速送檢。采精結(jié)束時(shí)，將采精儀各調(diào)節(jié)旋鈕逐檔回零，切斷電源，然后拔出電極棒。

取出探棒，洗凈、消毒。直腸內(nèi)涂抹普魯卡因油劑青霉素，注射0.3～0.5mL蘇醒靈，解除保定。

1.6 精液品質(zhì)檢查 按常規(guī)的精液檢查方法（目測(cè)評(píng)定法）檢查精液的顏色、精液量、精子活力和密度。

2 結(jié)果與分析

2.1 生殖保健對(duì)盤(pán)羊電刺激采精成功率的影響 本實(shí)驗(yàn)分別在3—5月非繁殖季節(jié)和8—12月繁殖季節(jié)對(duì)未經(jīng)生殖保健的4只野生公盤(pán)羊電刺激采精，結(jié)果如表1。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)生殖保健的盤(pán)羊?qū)Ω鞣N電刺激的輸出電壓均有不同程度的反應(yīng)。其中，對(duì)低電壓的電刺激反應(yīng)不十分敏感，陰莖勃起緩慢，很少出現(xiàn)射精動(dòng)作；采用高電壓和長(zhǎng)時(shí)間的電刺激，公羊有比較強(qiáng)烈的肢體反應(yīng)（強(qiáng)直反應(yīng)）和間斷的陰莖勃起反應(yīng)，有時(shí)出現(xiàn)射精動(dòng)作。

表1 未經(jīng)生殖保健的盤(pán)羊電刺激采精情況

本實(shí)驗(yàn)在3—4月份對(duì)未經(jīng)生殖保健的公羊均未能采出精液，這種現(xiàn)象與張居農(nóng)等［14-16］在綿羊上觀察的情況相同。而在8—9月份，對(duì)可以電刺激采精的1、9、10號(hào)公盤(pán)羊的精液鏡檢發(fā)現(xiàn)，只有極個(gè)別的精子在輕微擺動(dòng)，精子活力極差。造成這種現(xiàn)象的原因可能與野生盤(pán)羊不適應(yīng)舍飼環(huán)境，公羊未進(jìn)行生殖保健等有關(guān)。

針對(duì)以上問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)對(duì)4只野生公盤(pán)羊采用張春禮等的“低劑量睪酮+促卵泡素”公羊生殖保健的技術(shù)程序［13，17］進(jìn)行處理，電刺激采精結(jié)果如表2。從表2可見(jiàn)，經(jīng)過(guò)短期生殖保健處理，隨著采精次數(shù)的增加，公羊?qū)﹄姶碳げ删兊迷絹?lái)越敏感，并逐漸形成了在6～8V電壓的刺激下，就能迅速發(fā)生陰莖勃起和射精等現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，公羊生殖保健不僅恢復(fù)了生殖機(jī)能，而且也為成功電刺激采精奠定了基礎(chǔ)。

表2 經(jīng)生殖保健的盤(pán)羊電刺激采精情況

2.2 靜松靈麻醉保定對(duì)公羊電刺激采精的影響 采用張春禮等［13］的公羊生殖保健方法處理后，公盤(pán)羊的電刺激采精情況如表3。從表3可以看出，采用靜松靈麻醉保定后，4只公盤(pán)羊除10號(hào)外，電刺激采精均能采出正常精液，其精液品質(zhì)達(dá)到正常人工授精標(biāo)準(zhǔn)。

表3 靜松靈麻醉保定后公盤(pán)羊電刺激采精情況

3 討論

本實(shí)驗(yàn)注意到，在采精過(guò)程中如果輸出電壓過(guò)高，電刺激持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，間歇時(shí)間過(guò)短，都會(huì)造成公羊的肢體強(qiáng)直而影響采精效果。所以在電刺激采精過(guò)程中，對(duì)公羊要遵循電刺激電壓由低到高、刺激時(shí)間由短到長(zhǎng)、間歇時(shí)間由長(zhǎng)到短、反復(fù)刺激、循序漸進(jìn)的原則，使公羊逐漸適應(yīng)并建立起對(duì)電刺激和射精的條件反射，王玉珠等［18］和張居農(nóng)等［19］在犬和狼的麻醉與電刺激采精應(yīng)用研究中亦有此經(jīng)驗(yàn)與體會(huì)。

4 結(jié)論

采用公羊生殖保健的技術(shù)程序處理后，以DZCJ-4型電子采精儀對(duì)野生及雜交盤(pán)羊進(jìn)行電刺激采精，實(shí)施合適劑量的靜松靈麻醉保定，采集的精液品質(zhì)可以達(dá)到正常人工授精的標(biāo)準(zhǔn)并用于生產(chǎn)實(shí)踐。

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