骨肉瘤中低氧誘導(dǎo)因子-2α(HIF-2α)、骨橋蛋白(OPN)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)及其臨床意義

謝 虎,李永忠*,郭風(fēng)勁,張繼平,林 華,習(xí) 巍

(1.宜昌市第二人民醫(yī)院骨科,湖北宜昌443000;2.華中科技大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院骨科)

骨肉瘤是一種常見(jiàn)的骨的原發(fā)性惡性腫瘤,好發(fā)于青少年患者,亦稱(chēng)成骨肉瘤,其侵襲力強(qiáng)、轉(zhuǎn)移早且轉(zhuǎn)移率高等特點(diǎn)往往使得臨床治療失敗[1]。雖然近幾年輔助化療、保肢手術(shù)的運(yùn)用使骨肉瘤患者5年生存率和保肢成功率顯著提高,但長(zhǎng)期療效及患者的遠(yuǎn)期存活率并無(wú)明顯改善。這就使越來(lái)越多的學(xué)者將目光轉(zhuǎn)向了對(duì)于骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移機(jī)制以及影響這些過(guò)程的相關(guān)因素的研究[2,3]。本研究采用免疫組化法,從蛋白水平上檢測(cè)了93例骨肉瘤組織中低氧誘導(dǎo)因子-2α,骨橋蛋白,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子,以期探討三者在腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)中的作用及相互關(guān)系,進(jìn)而反映其能否作為檢測(cè)骨肉瘤預(yù)后的相關(guān)指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1一般資料選用我院病理科1991年元月-2005年六月期間收治的93例骨肉瘤標(biāo)本和25例瘤周正常骨組織。腫瘤直徑5-26 cm,平均12 cm。組織學(xué)分型參照Dahlin分型標(biāo)準(zhǔn)[4]及WHO新分型法。全部標(biāo)本經(jīng)臨床、病理、X線(xiàn)相結(jié)合確診?；颊叻譃槌醢l(fā)組75例,復(fù)發(fā)組18例,伴肺轉(zhuǎn)移組 20例,不伴肺轉(zhuǎn)移組73例。

1.2免疫組化方法所有一抗及二抗系濃縮型,儲(chǔ)存于-20℃冰箱備用,用前以緩沖液(0.01M的磷酸鈉、0.25 M 的 NaCl、pH7.6)及穩(wěn)定劑(15 mg/ml的牛血清白蛋白)按照1∶100稀釋。

檢測(cè)用SP法(SP試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。選用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3評(píng)價(jià)指標(biāo)①細(xì)胞核內(nèi)有呈淺黃、棕或棕褐色顆粒為HIF-2α陽(yáng)性,觀察5個(gè)高倍鏡視野(10×20倍)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例。無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜1%為(-),1%-10%為(+),11%-50%為(++),＞50%為(+++)。②OPN表達(dá)的計(jì)數(shù)同樣采用上述圖文分析系統(tǒng),按陽(yáng)性細(xì)胞所占比例分為(-):瘤細(xì)胞染色陰性或＜5%的瘤細(xì)胞有少量著色;(+):5%-20%的瘤細(xì)胞呈弱陽(yáng)性;(++):21%～50%的瘤細(xì)胞陽(yáng)性;(+++):＞50%的瘤細(xì)胞陽(yáng)性且著色較強(qiáng)。③腫瘤組織VEGF表達(dá)的計(jì)數(shù)方法也同樣采用上述圖文分析系統(tǒng),以腫瘤組織VEGF陽(yáng)性率及陽(yáng)性細(xì)胞質(zhì)中顆粒數(shù)及大小分為如下級(jí)別:陰性(-):瘤細(xì)胞完全不染色;弱陽(yáng)性(+):瘤細(xì)胞染色＜25%呈淺黃色;陽(yáng)性(++):26%-50%的瘤細(xì)胞染色呈棕黃色;強(qiáng)陽(yáng)性(+++):＞50%的瘤細(xì)胞染色呈棕褐色。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析,資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1HIF-2α,OPN,VEGF在不同組織中的表達(dá)情況比較與正常骨組織相比,瘤組織中HIF-2α,OPN,VEGF的表達(dá)明顯提高,差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);另外,與不伴肺轉(zhuǎn)移組相比,復(fù)發(fā)組和肺轉(zhuǎn)移HIF-2α,OPN,VEGF的表達(dá)明顯提高,差別亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 HIF-2α,OPN,VEGF在不同組織中的表達(dá)情況比較 例(%)

2.2骨肉瘤組織中HIF-2α、OPN表達(dá)與VEGF的關(guān)系VEGF陽(yáng)性組中HIF-2α的陽(yáng)性表達(dá)率與VEGF陰性組中HIF-2α的表達(dá)率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。另外 VEGF陽(yáng)性組中OPN的陽(yáng)性表達(dá)與VEGF陰性組表達(dá)率在具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。由此可見(jiàn),HIF-2α和OPN的表達(dá)與VEGF有顯著相關(guān)性。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 骨肉瘤組織中HIF-2α、OPN表達(dá)與的 VEGF關(guān)系例(%)

3 討論

惡性腫瘤的生長(zhǎng)侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多環(huán)節(jié),多步驟的復(fù)雜過(guò)程,有多種因子參與。低氧誘導(dǎo)因子(HIF)是近年來(lái)研究較多的與腫瘤行為的許多重要方面均有關(guān)的因子。HIF是廣泛存在于人和哺乳動(dòng)物體內(nèi)的一種結(jié)合因子,主要HIF-1、HIF-2和HIF-3。HIF-2和HIF-1的基因序列有48%同源,有相同的DNA結(jié)合位點(diǎn)。HIF-2是缺氧誘導(dǎo)的一種異源二聚體轉(zhuǎn)錄因子,主要由HIF-2α和HIF-1b兩個(gè)亞單位組成,其活性由HIF-2α決定[5]。OPN是一種具有多種生物學(xué)功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白,在細(xì)胞的黏附、遷移、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及組織修復(fù)中具有重要作用。隨著腫瘤研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)OPN在肝癌、肺癌、乳腺癌及頭頸部腫瘤等原發(fā)腫瘤及其轉(zhuǎn)移瘤組織中高表達(dá),提示OPN可能與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[6,7]。實(shí)體腫瘤的血管新生與瘤細(xì)胞分泌的多種血管生長(zhǎng)因子有關(guān)。在已發(fā)現(xiàn)的20多種多肽類(lèi)血管生長(zhǎng)因子中,VEGF是針對(duì)內(nèi)皮特異性最高,促血管生長(zhǎng)作用最強(qiáng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[8],它以旁分泌方式通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞整合素及蛋白酶激活因子的表達(dá)激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路,增加微血管通透性等途徑而誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖,遷移。因此是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異的致分裂原,并參與腫瘤性基質(zhì)形成及新生血管形成。

本研究結(jié)果表明,93例骨肉瘤的HIF-2α表達(dá)陽(yáng)性率為33.3%,25例癌旁正常骨組織中HIF-2α表達(dá)陰性。但與其他腫瘤比,HIF-2α在骨肉瘤組織中表達(dá)率較低。另外,VEGF陽(yáng)性組中HIF-2α和OPN的陽(yáng)性表達(dá)率與VEGF陰性組中HIF-2α的表達(dá)率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。因而為尋找新的腫瘤治療靶點(diǎn)提供了更多的途徑。

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