CD133在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系

郭曉東,王海濱,曲 芬,劉立明,張鞠玲,李小溪,張楊麗,趙景民*

(解放軍第302醫(yī)院 1.病理診斷與研究中心;2.臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心;3.臨床輸血中心,北京100039)

近年來腫瘤干細(xì)胞理論的提出使人們對腫瘤的生物學(xué)行為有了新的認(rèn)識,已經(jīng)在多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)有腫瘤干細(xì)胞的存在,包括白血病、乳腺癌、腦腫瘤、結(jié)直腸癌及胰腺癌等許多系統(tǒng)的惡性腫瘤。肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我國常見惡性腫瘤之一,盡管近年來在診斷和治療方面均取得了巨大的進(jìn)步,但其總體療效仍不理想,且對于肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程及相關(guān)分子機(jī)制尚不清楚。目前越來越多的研究提示肝癌可能是一種干細(xì)胞性疾病,因此腫瘤干細(xì)胞學(xué)說的提出,為肝癌的研究帶來了新的希望。本研究以臨床肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本為研究對象,并與癌旁肝組織和正常肝組織進(jìn)行對比分析,了解干細(xì)胞標(biāo)志CD133在原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá),并探討其與肝細(xì)胞癌臨床病理因素的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2007年1月-2009年8月我院收治的84例HCC患者手術(shù)切除的癌組織標(biāo)本,均經(jīng)病理確診為原發(fā)性肝細(xì)胞癌。所選病例在手術(shù)前均未行全身或局部化療。其中男44例,女4例,年齡46.9±12.8歲(25-78歲)。另取同期正常肝組織40例,均為肝血管瘤患者,其中男24例,女16例;年齡45.8±13.4歲(24-79歲)作為對照。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測

所有標(biāo)本均用10%福爾馬林固定,常規(guī)行石蠟包埋連續(xù)切片,厚4 μ m;脫蠟,脫水,抗原修復(fù),磷酸鹽緩沖液(PBS)洗片3 min 3次。30 mL/L過氧化氫溶液室溫封閉10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性,PBS洗片3 min 3次。滴加第一抗體CD133兔抗人多克隆抗體(1∶100),37℃孵育2 h,PBS洗片3 min 3次。滴加第二抗體辣根酶標(biāo)記羊抗兔IgG多聚體,37℃孵育20 min,PBS洗片3 min 3次。DAB顯色3-5 min,以自來水充分沖洗終止顯色。蘇木素復(fù)染,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。陰性對照以PBS替代一抗,用已知陽性標(biāo)本作陽性對照。Envision二步法免疫組化試劑盒購自Doka公司,兔抗人CD133多克隆抗體購自Abcam公司。

1.3 結(jié)果判斷

CD133抗原定位于細(xì)胞漿或細(xì)胞膜,選擇5個高倍(400×)光鏡視野下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),至少計(jì)數(shù)1 000個細(xì)胞,計(jì)算陽性細(xì)胞率。陽性組織判斷標(biāo)準(zhǔn):陽性細(xì)胞率＞10%為陽性,≤10%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS10.0 for Windows軟件包建立數(shù)據(jù)庫并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。CD133在HCC組織和正常組織中表達(dá)的差異以及與臨床病理因素中的差異采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 CD133在HCC組織、正常肝臟組織中的表達(dá)情況

在HCC組織中CD133陽性表達(dá)細(xì)胞多見于HCC梁索狀結(jié)構(gòu)近血竇處或癌巢邊緣,本組84例HCC組織中,CD133表達(dá)陽性有 36例,陽性率為42.86%;在正常肝組織內(nèi)未見CD133陽性表達(dá)的肝細(xì)胞。HCC組織中CD133陽性表達(dá)率明顯高于正常肝組織(P＜0.01)。

2.2 CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理因素的關(guān)系

CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌血清AFP水平(χ2=4.02)、TNM 分期(χ2=4.69)、病理分級(χ2=5.48)、門靜脈癌栓(χ2=5.27)及肝硬化(χ2=6.04)顯著相關(guān)性(P＜0.01),血清AFP水平高、合并肝硬化、有門靜脈癌栓及TNM分期、病理分級高的患者更多見CD133表達(dá)。而CD133表達(dá)同患者的年齡、性別、腫瘤直徑及有無腫瘤包膜無相關(guān)性(P＞0.05)。

表1 CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理因素的相關(guān)性n(%)

3 討論

CD133是一種分子量為120KD具有5個跨膜區(qū)的糖蛋白,最初發(fā)現(xiàn)于從骨髓、胎肝分離出來的CD34+細(xì)胞亞群,目前被認(rèn)為是用于各種腫瘤干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)標(biāo)志物之一。研究發(fā)現(xiàn)CD133+腫瘤細(xì)胞參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,已經(jīng)被證實(shí)在人類白血病、腦腫瘤、肺癌和前列腺癌及黑色素瘤干細(xì)胞中有表達(dá)和起作用。對HCC的研究也表明,CD133+肝癌細(xì)胞與HCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可能是肝癌干細(xì)胞[1-3]。但CD133抗原表達(dá)與HCC的臨床病理特征之間的關(guān)系,現(xiàn)有的研究結(jié)果較少有涉及。

本研究結(jié)果顯示,在HCC組織中CD133表達(dá)陽性率為42.86%,而在正常肝組織內(nèi)未見CD133陽性表達(dá)的肝細(xì)胞。HCC組織中CD133陽性表達(dá)率明顯高于正常肝組織(P＜0.01)。提示CD133分子可能參與了正常肝臟發(fā)育和成熟的過程,并隨著細(xì)胞分化成熟而表達(dá)降低,支持腫瘤干細(xì)胞學(xué)說。進(jìn)一步分析CD133表達(dá)與HCC臨床病理因素的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD133表達(dá)與肝細(xì)胞癌血清AFP水平、TNM分期、病理分級、門靜脈癌栓及肝硬化顯著相關(guān)性(P＜0.01),血清AFP水平高、合并肝硬化、有門靜脈癌栓及TNM分期、病理分級高的患者更多見CD133表達(dá)。而CD133表達(dá)同患者的年齡、性別、腫瘤直徑及有無腫瘤包膜無相關(guān)性。說明CD133蛋白似乎傾向于表達(dá)于惡性程度高、侵襲性強(qiáng)的腫瘤組織和細(xì)胞,提示CD133蛋白不僅與肝細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān),而且與肝細(xì)胞癌的病情進(jìn)展存在緊密關(guān)聯(lián)。

AFP不僅是目前公認(rèn)的診斷HCC腫瘤標(biāo)志物,而且有研究顯示AFP可提示HCC的預(yù)后。本研究顯示CD133表達(dá)同血清AFP濃度之間有顯著相關(guān)性,CD133抗原更多地表達(dá)于血清AFP濃度高的患者,推測CD133的表達(dá)可以作為一種輔助的判斷HCC惡性程度和預(yù)后的指標(biāo),但此推斷仍需要更多的數(shù)據(jù)來進(jìn)行進(jìn)一步加以驗(yàn)證。

腫瘤的轉(zhuǎn)移過程比較復(fù)雜,涉及多因素、多步驟的過程。肝臟是血供豐富的器官,有研究者提出40%直徑＜2cm的HCC,鏡下已經(jīng)可見靜脈侵犯[4]。本研究發(fā)現(xiàn),有門靜脈癌栓的患者更多見CD133表達(dá),且CD133+細(xì)胞多出現(xiàn)于癌巢近腫瘤間質(zhì)的邊緣或者梁索狀結(jié)構(gòu)近血竇處。提示CD133表達(dá)可能在腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移中起重要作用;CD133+細(xì)胞多出現(xiàn)于癌巢近腫瘤間質(zhì)的邊緣或者梁索狀結(jié)構(gòu)近血竇處,可能表明局部腫瘤微環(huán)境發(fā)生了變化,CD133+細(xì)胞更容易直接侵犯局部及通過血道遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

但國外也有研究未能發(fā)現(xiàn)CD133的表達(dá)和肝癌的臨床、病理特征之間的相關(guān)性[5]。推測出現(xiàn)不同研究結(jié)果可能與不同克隆的抗體、免疫組化方法的選擇及不同的評分系統(tǒng)以及肝癌異質(zhì)性本質(zhì)的反應(yīng)等有關(guān)。

[1]Suetsugu A,Nagaki M,Aoki H,et al.Characterization of CD133+hepatocellular carcinoma cells as cancer stem/progenitor cells[J].Biochem Biophys Res Commun,2006,351(4):820.

[2]Ma S,Chan KW,Hu L,et al.Identification and characterization of tumorigenic liver cancer stem/progenitor cells[J].Gastroenterology,2007,132(7):2542.

[3]Yin S,Li J,Hu C,Chen X,et al.CD133 positive hepatocellular carcinoma cells possess high capacity for tumorigenicity[J].Int J Cancer,2007,120(7):1444.

[4]Tsai TJ,Chau GY,Lui WY,et al.Clinical significance of microscopic tumorvenous invasion in patients with resectable hepatocellular carcinoma[J].Surgery,2000,127(6):603.

[5]Yin S,Li J,Hu C,et al.CD133 positive hepatocellular carcinoma cells possess high capacity for tumorigenicity[J].Int J Cancer,2007,120:1444.