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    非小細(xì)胞肺癌組織CXCR4表達(dá)及MVD的研究

    2011-06-13 07:07:46王彥榮
    關(guān)鍵詞:肺癌

    席 妍,王彥榮,宋 陽

    (吉林省腫瘤醫(yī)院 1.化療科;2.藥劑科,吉林 長春130012)

    本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌組織中趨化因子受體(CXCR4)的表達(dá)和微血管密度(MVD),以期更全面地了解它們在NSCLC中的生物學(xué)作用,及其表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性,比較CXCR4的表達(dá)與腫瘤微血管生成的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 研究對象

    選擇吉林省腫瘤醫(yī)院病理科2006年-2009年手術(shù)切除后經(jīng)病理證實(shí)的NSCLC存檔標(biāo)本62例,其中男性37例,女性25例;年齡 30-73歲,中位年齡56歲,按WHO《肺腫瘤組織學(xué)分型》(1999年)標(biāo)本包括肺鱗癌37例,肺腺癌25例;病理分級高中分化35例,低分化27例。根據(jù)2005年《AJCC癌癥分期手冊》的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ期 16例、Ⅱ期26例、Ⅲ期18例、Ⅳ期2例。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組32例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組30例。所有的患者術(shù)前均未接受放、化療。另取12例癌旁正常肺組織作為陰性對照,所取組織距病灶邊緣5 cm以上。

    1.2 方法

    全部試劑均購于武漢博士德生物工程有限公司。依常規(guī)免疫組化方法,按試劑盒說明書操作,取陽性對照片同步操作作陽性對照;用PBS代替一抗作陰性對照。

    1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

    CXCR4的陽性細(xì)胞為瘤細(xì)胞漿或膜染成棕黃色,高倍鏡下取4個(gè)不同視野,各計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,按陽性細(xì)胞所占的百分率分為+~+++。無陽性細(xì)胞為陰性-;陽性細(xì)胞<30%為 +;陽性細(xì)胞占30%-50%為++;陽性細(xì)胞>50%為+++。

    MVD計(jì)數(shù)參照Weidner方法,先在低倍鏡(×40)下掃視整個(gè)切片,確定5個(gè)高血管密度區(qū),即“熱點(diǎn)”,再在高倍鏡(×200)下計(jì)數(shù)被染成黃色的微血管數(shù),結(jié)果用5個(gè)高倍鏡視野下微血管數(shù)目的平均數(shù)來表示。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料采用s表示,均數(shù)比較采用 t檢驗(yàn)或方差分析;采用秩和檢驗(yàn)分析EGFR、CXCR4非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,EGFR、CXCR4、MVD 之間的相關(guān)性采用 Spearman等級相關(guān)分析,P<0.05為差異有顯著性。

    2 結(jié)果

    2.1 非小細(xì)胞肺癌組織和正常組織中CXCR4的表達(dá)以及MVD的比較 見表1。

    表1 EGFR、CXCR4在非小細(xì)胞肺癌及正常肺組織中的表達(dá)

    2.2 CXCR4表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系 見表2。

    表2 CXCR4表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

    2.3 MVD與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系見表3。

    表3 MVD表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

    2.4 NSCLC組織中CXCR4的表達(dá)與MVD的關(guān)系

    在62例非小細(xì)胞肺癌組織中,CXCR4陽性表達(dá)者,MVD值為49.35±8.75;CXCR4陰性表達(dá)者,MVD值為27.05±12.60,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1-3。62例非小細(xì)胞肺癌組織中MVD平均值為39.89,其中MVD>39.89共33例,CXCR4陽性表達(dá)數(shù)為27例,陰性表達(dá)數(shù)分別為4例;MVD<39.89共29例,CXCR4陽性表達(dá)數(shù)為9例,陰性表達(dá)數(shù)22例。經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析,NSCLC組織中CXCR4的表達(dá)與MVD呈正相關(guān)(見表4)。

    表4 NSCLC中CXCR4的表達(dá)與MVD的相關(guān)性

    圖1 原發(fā)灶內(nèi)肺鱗癌細(xì)胞CXCR4的表達(dá)(SP×400,-)

    圖2 原發(fā)灶內(nèi)肺腺癌細(xì)胞CXCR4的表達(dá)(SP×200,+)

    圖3 原發(fā)灶內(nèi)肺鱗癌細(xì)胞CXCR4的表達(dá)(SP×200,++)

    3 討論

    肺癌是典型的血管依賴性病變,當(dāng)腫瘤組織生長到直徑1-2 mm時(shí),其進(jìn)一步生長需要新的血管生成,而新的血管生成又增加了腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)會。MVD是衡量腫瘤血管生成的量化指標(biāo)[2,3],許多學(xué)者將其作為腫瘤血管形成標(biāo)志來研究與腫瘤的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)采用Weidner方法進(jìn)行血管計(jì)數(shù),發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌組織中的MVD明顯高于正常組織的MVD,兩者比較差異顯著(P<0.05),進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌MVD的高低與組織學(xué)類型無關(guān)(P>0.05),而與腫瘤的分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(guān)(P<0.05)。以上說明新生血管的形成促進(jìn)了腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移。

    近年來,研究發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細(xì)胞也不同程度的高表達(dá)CXCR4。Muller以及其它學(xué)者[4]相繼發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細(xì)胞系、乳腺癌患者腫瘤原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中的癌細(xì)胞均呈CXCR4高表達(dá)。隨后的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在前列腺癌、胃癌[5]、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、卵巢癌等多種腫瘤細(xì)胞中均呈現(xiàn)CXCR4的高表達(dá)。近年來也發(fā)現(xiàn)了CXCR4在NSCLC中普遍高表達(dá)。

    趨化性細(xì)胞因子受體CXCR4是趨化性細(xì)胞因子基質(zhì)衍生因子SDF-1的專屬受體。CXCR4/SDF-1的相互作用可以觸發(fā)與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的多個(gè)事件的發(fā)生,如腫瘤細(xì)胞的侵襲能力、腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動能力、與血管內(nèi)皮的黏附能力等[6]。近年研究發(fā)現(xiàn),SDF-1/CXCR4軸在腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用[7-8]?;谝陨涎芯?我們推斷一些不同的癌細(xì)胞亦可能通過SDF1/CXCR4途徑介導(dǎo)它們的侵襲和轉(zhuǎn)移,就此我們檢測分析了CXCR4在人肺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。在本研究中,我們通過對62例肺癌手術(shù)標(biāo)本和12例正常肺組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,發(fā)現(xiàn)與正常組織相比,肺癌組織CXCR4表達(dá)增強(qiáng)。提示趨化性細(xì)胞因子受體CXCR4可能在肺癌的形成和發(fā)展過程中起一定的作用。通過進(jìn)一步分析,我們發(fā)現(xiàn)CXCR4的表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況(N分期)密切相關(guān)。隨著N分期的增高,CXCR4表達(dá)的陽性率增高。結(jié)果提示CXCR4極有可能與肺癌淋巴結(jié)侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。CXCR4陽性表達(dá)率與患者年齡、性別、病理類型、腫瘤大小(T分期)和臨床分期無明顯相關(guān)性。

    為了進(jìn)一步研究CXCR4的表達(dá)與肺癌患者預(yù)后的關(guān)系,我們對患者進(jìn)行了隨訪。通過分析發(fā)現(xiàn)CXCR4陽性組患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率明顯高于CXCR4陰性組患者(P<0.05)。CXCR4表達(dá)陽性組患者的生存時(shí)間明顯短于CXCR4表達(dá)陰性組(P<0.05)。因此通過檢測肺癌患者CXCR4的表達(dá)情況,有可能幫助我們預(yù)測和識別復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的高危患者,以進(jìn)行強(qiáng)化治療。

    研究表明,一些趨化性細(xì)胞因子可能通過促進(jìn)血管生成而在腫瘤生長方面發(fā)揮間接作用。為了探討趨化性細(xì)胞因子受體CXCR4對肺癌血管生成是否具有調(diào)節(jié)作用,我們對62例肺癌標(biāo)本MVD進(jìn)行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CXCR4陽性組的MVD較CXCR4陰性組高。提示肺癌組織MVD與CXCR4的表達(dá)有關(guān),CXCR4可以促進(jìn)肺癌血管生成。CXCR4可能通過促進(jìn)血管生成從而促進(jìn)肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

    綜上所述,本研究結(jié)果提示了CXCR4在人肺癌組織中功能性地高表達(dá),并且與腫瘤的分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤的MVD密切相關(guān),可能在肺癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成中發(fā)揮著重要作用。同時(shí)檢測非小細(xì)胞肺癌組織的CXCR4的表達(dá)以及MVD對判斷腫瘤的惡性程度和估計(jì)預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義。

    [1]Spiro SG,Silvestri GA.One hundred years of lung cancer[J].Am Jrespir CriCareMed,2005,172(5):523.

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