乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌中Ezrin和Survivin表達(dá)及臨床病理意義

劉現(xiàn)軍,金東嶺,席 豐,時(shí)志民

(河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室,河北邯鄲056002)

乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)是一組異質(zhì)性腫瘤,特征是局限于乳腺導(dǎo)管的惡性上皮細(xì)胞克隆性增生,尚未突破基膜,易外科切除治愈。然而臨床上導(dǎo)管內(nèi)癌生物學(xué)潛能和復(fù)發(fā)較難預(yù)測,有10%-50%導(dǎo)管內(nèi)癌進(jìn)展為浸潤癌,是潛在的致病性疾病。近年研究表明Ezrin蛋白作為腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中的相關(guān)蛋白在很多腫瘤組織中都有異常表達(dá),Ezrin蛋白參與腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的多個(gè)環(huán)節(jié),如從原發(fā)部位脫落侵入周邊組織、穿入脈管系統(tǒng)、穿過基膜形成轉(zhuǎn)移瘤等[1,2];Survivin具有抑制細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞分裂的重要作用,是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性增生的重要機(jī)制之一[3,4],為研究Ezrin和Survivin在乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌發(fā)生和進(jìn)展過程中的作用,我們采用免疫組織化學(xué)方法檢測52例乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌和20例乳腺良性病變中Ezrin和Survivin表達(dá)情況,以探討其臨床病理意義。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本選擇收集河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室2004-2008年間存檔的乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌52例,均為女性,年齡28-75歲,平均年齡為50.3歲,所有病例術(shù)前均未行放、化療和免疫治療;收集乳腺良性病變20例(纖維腺瘤10例、腺病10例),所有病例臨床資料完整。

1.2方法和試劑對乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌和乳腺良性病變的手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)按常規(guī)病癥處理切片進(jìn)行H.E染色,用作組織形態(tài)對照。同時(shí)進(jìn)行S-P法免疫組化染色。Ezrin鼠抗人單克隆抗體購自福州邁新生物技術(shù)有限公司,鼠抗人Survivin單克隆抗體及S-P免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,按說明書進(jìn)行操作,染色前經(jīng)微波加熱抗原修復(fù)液修復(fù)抗原,以PBS代替一抗作陰性對照,用已知陽性片作陽性對照,DNB顯色蘇木精復(fù)染。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)Ezrin蛋白和Survivin染色在無背景著色情況下,以細(xì)胞出現(xiàn)黃色顆粒者為陽性,綜合考慮染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)量,采用半定量積分判斷染色結(jié)果,計(jì)算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)并給予分值:≤5%為0分、6-25%為1分、26-50%為2分、51-75%為3分、＞75%為 4分;著色強(qiáng)度給予分值:無著色為0分、淺黃著色為1分、黃色為2分、棕黃為3分。兩者相乘,0分為(-)、1-4分為(+)、5-8分為(++)、9-12分為(+++)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件包處理。各組資料的比較采用 χ2檢驗(yàn)和Fisher精確概率檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1Ezrin和Survivin在乳腺良性病變與導(dǎo)管內(nèi)癌中表達(dá)見表1,Ezrin在的乳腺良性病變中陽性表達(dá)為90.0%(18/20),++-+++占11.1%(2/18),主要定位于乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞膜,表現(xiàn)為細(xì)胞膜呈淺黃色(圖1);在導(dǎo)管內(nèi)癌中Ezrin主要彌散在胞質(zhì)內(nèi)(圖 2),表現(xiàn)為棕黃色或棕褐色,陽性表達(dá)為65.4%,++-+++占82.4%(28/34),兩組比較差異有顯著性(P＜0.01)。Survivin在良性乳腺病變中未見表達(dá),在乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌中Survivin定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)(圖3),其陽性表達(dá)率為67.31%,兩組比較差異有顯著性(P＜0.01)。

2.2Ezrin和Survivin與乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌臨床病理特征的關(guān)系見表2,χ2檢驗(yàn)顯示,乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌Ezrin和Survivin的表達(dá)與年齡、腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05),而在組織學(xué)DIN1、DIN2、DIN3中隨著導(dǎo)管內(nèi)癌級別增高,Ezrin和Survivin表達(dá)率逐漸增高,各組間陽性表達(dá)率均具有顯著性差異(P＜0.05)。

表1 Ezrin和Survivin在乳腺良性病變與導(dǎo)管內(nèi)癌中表達(dá)情況

圖1 Ezrin在乳腺良性病變導(dǎo)管上皮細(xì)胞膜表達(dá)

圖2 Ezrin在DCIS細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)

圖3 Survivi在DCIS細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)

3 討論

Ezrin蛋白基因定位于染色體6q25.2-q26,屬于ERM家庭成員,在細(xì)胞的多種活動中發(fā)揮作用,其表達(dá)產(chǎn)物Ezrin蛋白在N-末端有一個(gè)同源性很高的FERM功能域,在C-末端的氨基酸位置上有一個(gè)關(guān)鍵與激活有關(guān)的蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)[2,5],Ezrin蛋白以非活化狀態(tài)和活化狀態(tài)兩種形式存在,活化的Ezrin在細(xì)胞的運(yùn)動、遷移、有絲分裂等生理功能中發(fā)揮重要作用。Ezrin蛋白與多種腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān),如婦科腫瘤、消化道腫瘤、骨肉瘤和橫紋肌肉瘤等,Ezrin蛋白在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)異常提示其在腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移機(jī)制中發(fā)揮重要作用,Zhang等[6]發(fā)現(xiàn)Ezrin蛋白與肝癌細(xì)胞的增殖侵襲和遷移呈正相關(guān),Ezrin蛋白表達(dá)下調(diào)則抑制高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系的侵襲能力,本研究對乳腺良性病變和乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌中表達(dá)情況發(fā)現(xiàn),良性病變中Ezrin蛋白表達(dá)于導(dǎo)管上皮細(xì)胞膜,著色較淺,而在導(dǎo)管內(nèi)癌細(xì)胞中,Ezrin蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì),表達(dá)強(qiáng)度明顯高于良性病變,分值差異明顯(P＜0.01);研究發(fā)現(xiàn)隨著導(dǎo)管內(nèi)癌由低級別到高級別的增高,Ezrin表達(dá)率呈漸高趨勢,而與年齡和腫瘤大小無關(guān)。Ezrin蛋白的定位由乳腺良性上皮細(xì)胞膜表達(dá)轉(zhuǎn)化為DCIS細(xì)胞質(zhì)表達(dá),可能系Ezrin激活,E-cadherin在細(xì)胞內(nèi)聚集,而細(xì)胞表面E-cadherin減少。細(xì)胞間黏附性降低、細(xì)胞間隙增寬、偽足形成、運(yùn)動力侵襲力增強(qiáng)[7]。因而Ezrin蛋白在乳腺腫瘤細(xì)胞質(zhì)中的高表達(dá)與乳腺腫瘤的去分化和不良特征有關(guān)。

表2 Ezrin和Survivin表達(dá)與乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌臨床病理特征關(guān)系

細(xì)胞凋亡的異常抑制與惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展以及耐藥的產(chǎn)生密切相關(guān),Survivin是近幾年克隆出來的凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAP)家族的新成員,也是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子[8],研究表明Survivin不但具有抑制細(xì)胞凋亡的作用,而且可能參與細(xì)胞有絲分裂的調(diào)節(jié),干擾Survivin與有絲分裂紡錘體微管的特異結(jié)構(gòu),可致Survivin抗凋亡活性的喪失,Survivin在細(xì)胞增殖、凋亡和血管形成等多方面起重要作用,Survivin可直接作用于細(xì)胞凋亡核心機(jī)制的caspase-3、caspase-7的活性,阻斷細(xì)胞的凋亡過程,Survivin在組織中的表達(dá)具有選擇性,它在大多數(shù)正常組織中不表達(dá)或僅有少量表達(dá),但在肺癌、胃癌、食管癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、淋巴瘤等組織中特異性高表達(dá),田鋒等采用免疫組化法和組織芯片技術(shù)檢測56食管癌,發(fā)現(xiàn)Survivin在食管癌中高表達(dá),與食管癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[9]。Miyachi等研究認(rèn)為,Survivin表達(dá)可作為某些腫瘤的預(yù)后和復(fù)發(fā)的標(biāo)志,與癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系[10]。在本實(shí)驗(yàn)中乳腺良性病變Survivin不表達(dá),在乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌組織中,隨著導(dǎo)管內(nèi)癌級別的升高其表達(dá)率漸增高,相鄰兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示Survivin基因在乳腺導(dǎo)管癌早期已被激活,其過度表達(dá)通過抑制細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞異常增殖,最終導(dǎo)致浸潤癌的發(fā)生,Survivin基因的表達(dá)對于預(yù)測乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌的轉(zhuǎn)歸可能有重要意義。

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