HPLC法測(cè)定癸氧喹酯固體分散體有關(guān)物質(zhì)及其含量

肖 芳，周 霽，嚴(yán)少康，黎璐平，劉永瓊

(武漢工程大學(xué)化工與制藥學(xué)院，綠色化工過程省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北省新型反應(yīng)器與綠色化學(xué)工藝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430074)

0 引 言

癸氧喹酯(decoquinate)為喹啉類抗球蟲病藥，能阻斷蟲體線粒體電子傳遞鏈中輔酶Q10與細(xì)胞色素b之間的電子轉(zhuǎn)運(yùn)，抑制柔嫩艾美耳球蟲的呼吸作用，使球蟲不能正常發(fā)育，從而起到抗球蟲的作用.癸氧喹酯常用于防治雞的柔嫩、毒害、堆型、巨型、變位和布氏艾美耳球蟲等引起的球蟲病，另外，癸氧喹酯對(duì)隱孢子蟲引起的動(dòng)物腹瀉也可以起到緩解和治療作用[1-2].由于癸氧喹酯不溶于水和大多數(shù)有機(jī)溶劑，目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上銷售的制劑品種只有癸氧喹酯的預(yù)混劑.本文通過藥物制劑新技術(shù)將難溶性的癸氧喹酯制成固體分散體可改善其在水中的溶解度，從而提高其生物利用度.為了制定其科學(xué)合理的質(zhì)量控制方法，參照相關(guān)文獻(xiàn)[3-6]，建立了高效液相色譜法對(duì)癸氧喹酯固體分散體中的有關(guān)物質(zhì)及含量進(jìn)行分離、測(cè)定.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

高效液相色譜儀(DIONEX，P680 HPLC PUMP)；色譜柱(C185μm，4.6×250mm，Dionex)；UV-VIS8500型紫外可見分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司)；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)； SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；臺(tái)式干燥箱(中外合資重慶四達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(重慶銀河試驗(yàn)儀器有限公司).

1.2 材料與試劑

癸氧喹酯原料藥(浙江新三和動(dòng)物保健品有限公司提供，批號(hào)：20080501，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.00%)；癸氧喹酯對(duì)照品(本實(shí)驗(yàn)室精制，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.20%)；癸氧喹酯固體分散體(自制，批號(hào)：20080517，20080519，20080521)；藥用鋁箔袋(昆山市天地包裝材料有限公司)；甲醇(色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；二氯甲烷(分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠)；氯化鈣(分析純，天津博迪化工有限公司)；娃哈哈純凈水.

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 溶劑的制備 二氯甲烷-無水甲醇(1∶6)溶液(每1 000 mL溶劑加入10 g氯化鈣).

2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取樣品適量(約相當(dāng)于癸氧喹酯40 mg)置于100 mL容量瓶，加少量溶劑超聲使之完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，精密量取10 mL于100 mL容量瓶，用溶劑定容即得(質(zhì)量濃度40 μg/mL).

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取約40 mg癸氧喹酯對(duì)照品置于100 mL容量瓶，加少量溶劑超聲使完全溶解，用溶劑稀釋至刻度，精密量取10 mL于100 mL容量瓶，用溶劑定容，即制成質(zhì)量濃度為40 μg/mL的對(duì)照品溶液.

2.2 色譜條件

用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以無水甲醇為流動(dòng)相；流速為1.0 mL/min；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為267 nm；理論塔板數(shù)不低于1 500.

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 空白溶劑及空白輔料的干擾實(shí)驗(yàn) 在色譜條件2.2下，分別測(cè)定空白溶劑、對(duì)照品溶液、空白輔料溶液、供試品溶液的高效液相色譜圖(圖1～4).由圖1可知空白溶劑的保留時(shí)間為2.8 min，不干擾樣品測(cè)定.由圖2可知：癸氧喹酯的保留時(shí)間為4.8 min，用面積歸一化法測(cè)定癸氧喹酯對(duì)照品含量為99.23%，理論塔板數(shù)>1 500.由圖3、4可知溶液中輔料及其他雜質(zhì)與癸氧喹酯可完全分離，不干擾樣品測(cè)定.

圖1 空白溶劑HPLC色譜圖

圖2 對(duì)照品溶液HPLC色譜圖

圖3 空白輔料HPLC色譜圖

圖4 供試品溶液HPLC色譜圖

2.3.2 檢測(cè)線 取癸氧喹酯對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋，分別取樣20 μL注入液相色譜儀，直至主峰峰高為基線噪音的3倍，結(jié)果表明，最低檢測(cè)限為0.05 μg/mL.

2.3.3 專屬性實(shí)驗(yàn)a.酸破壞實(shí)驗(yàn).酸溶液的配制：取5 mL HCl和5 mL的無水乙醇混勻配制成體積分?jǐn)?shù)50%濃鹽酸乙醇溶液作為酸溶液.

精密稱取樣品(批號(hào)：20080517)適量(約相當(dāng)于癸氧喹酯50 mg)置于100 mL容量瓶，加少量溶劑超聲溶解后溶劑定容，然后用移液管移取2 mL于25 mL容量瓶中，加2 mL酸溶液，靜置，避光放置24 h，溶劑定容，取20 μL進(jìn)樣，照2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，結(jié)果見圖5.

圖5 酸破環(huán)實(shí)驗(yàn)

b.堿破壞實(shí)驗(yàn).堿溶液的配制：取適量NaOH溶于無水乙醇中，配置成過飽和NaOH溶液作為堿溶液.

精密稱取樣品(批號(hào)：20080517)適量(約相當(dāng)于癸氧喹酯50 mg)置于100 mL的容量瓶，加少量溶劑超聲溶解后溶劑定容，然后用移液管移取2 mL于25 mL容量瓶中，加2 mL堿溶液，靜置，避光放置24 h，溶劑定容，取20 μL進(jìn)樣，照2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，結(jié)果見圖6.

圖6 堿破壞實(shí)驗(yàn)

c.高溫破壞實(shí)驗(yàn).精密稱取樣品(批號(hào)：20080517)適量(約相當(dāng)于癸氧喹酯50 mg)置于100 mL的容量瓶中，加少量溶劑超聲溶解后溶劑定容，然后用移液管移取1 mL于25 mL容量瓶中，置于(105±1) ℃下4 h，再用溶劑定容，取20 μL進(jìn)樣，照2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，結(jié)果見圖7.

圖2～7表明：癸氧喹酯對(duì)酸、堿、熱較穩(wěn)定，降解產(chǎn)物與癸氧喹酯分離良好，說明該色譜條件能較好的對(duì)本品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查.

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密量取適量的癸氧喹酯對(duì)照品，以二氯甲烷和甲醇的混合溶液(比例為1∶6，每1 000 mL加入10 g氯化鈣)為溶劑，配成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50 μg/mL)，分別進(jìn)樣20 μL，照2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，以樣品濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，其方程為：A=1.647 9C-0.354(R2=0.999 8，n=11).表明癸氧喹酯的含量在1.0～50 mg/mL之間具有良好的線性關(guān)系.

圖7 高溫實(shí)驗(yàn)

2.3.5 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

a.回收率實(shí)驗(yàn).按照癸氧喹酯固體分散體的處方比例，配制對(duì)照品和輔料溶液，混勻，用溶劑配成含癸氧喹酯質(zhì)量濃度為10、20、30 μg/mL的溶液，每次進(jìn)樣20 μL，每種質(zhì)量濃度的溶液進(jìn)樣三次，測(cè)定結(jié)果見表1.由表1結(jié)果計(jì)算其回收率分別為101.8%、101.2%、100.9%，在98%～102%之間，表明此法準(zhǔn)確度高，符合定量分析的要求.

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

b.精密度實(shí)驗(yàn).精密量取適量的癸氧喹酯對(duì)照品，以二氯甲烷和甲醇的混合溶液(比例為1∶6，每1 000 mL加入10 g氯化鈣)為溶劑，配制質(zhì)量濃度為20 mg/mL的溶液，進(jìn)樣量為20 mL，注入液相色譜儀中，進(jìn)樣6次，照2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，由表2結(jié)果計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差S= 0.177 607(n=6)和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.84%(n=6)，由RSD=0.84%<2%[7]，知精密度良好.

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 樣品含量測(cè)定

取三批放大樣品(批號(hào)：20080517；20080519；20080521)適量，加二氯甲烷和甲醇(1∶6)的混合溶液(1 000 mL加入10 g氯化鈣)適量使之溶解，稀釋成約40 μg/mL的溶液，取樣20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍，以外標(biāo)法計(jì)算癸氧喹酯固體分散體的含量.測(cè)定結(jié)果見表3.

表3 含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，本品三批樣品的含量均在標(biāo)示量的95%～105%范圍之內(nèi).

3 結(jié) 語

a.方法學(xué)考察結(jié)果說明在建立的色譜條件下，系統(tǒng)適用性良好，線性、溶液穩(wěn)定性、精密度、回收率均好.

b.建立的高效液相色譜法對(duì)癸氧喹酯固體分散體中的有關(guān)物質(zhì)及含量進(jìn)行分離、測(cè)定，能準(zhǔn)確檢測(cè)樣品中的有關(guān)物質(zhì)，輔料無干擾，且操作簡(jiǎn)便、方法可行、準(zhǔn)確度高.不同批號(hào)的癸氧喹酯固體分散體樣品測(cè)定結(jié)果表明，癸氧喹酯含量穩(wěn)定，可用于質(zhì)量控制.

c.由專屬性結(jié)果顯示，降解產(chǎn)物與癸氧喹酯分離良好，說明該色譜條件能較好的對(duì)本品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查.

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