• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    光皮樹的組織培養(yǎng)研究初探

    2011-06-11 02:12:12彭曉英劉永濤周雙德趙黎明張良波
    湖南林業(yè)科技 2011年6期
    關(guān)鍵詞:光皮腋芽莖段

    劉 清,彭曉英*,劉永濤,周雙德,趙黎明,張良波

    (1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙 410128; 2.湖南省林業(yè)科學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙 410004)

    光皮樹 (Swida wilsoniana Wanaer)為山茱萸科(Cornaceae)梾木屬 (Swide opiz)落葉灌木或喬木,其干果含油率達(dá)26%~36%,且果實(shí)油中含油酸和亞油酸高達(dá)77.68%,可通過酯化工藝制取生物柴油[1-2]。其燃料特性和動(dòng)力性與0#柴油相似,是一種優(yōu)良的代用燃料[3-5]。對(duì)石油能源枯竭的擔(dān)憂,以及利用光皮樹油制取生物柴油研究的快速開展,使得光皮樹作為重要的生物柴油原料得到廣泛關(guān)注。

    目前,光皮樹的繁殖主要是通過播種育苗、扦插育苗和嫁接繁殖[6-8],播種育苗子代個(gè)體分化明顯,難以保持母本的優(yōu)良性狀;而扦插和嫁接育苗周期較長(zhǎng),易受病蟲害影響。如能運(yùn)用組織培養(yǎng)技術(shù)建立光皮樹無性系,則可以不受氣候影響,在較短時(shí)間內(nèi)繁育大量光皮樹良種苗木[7]。因此,本研究擬采用組織培養(yǎng)手段,通過愈傷組織的誘導(dǎo)和分化及腋芽增殖等途徑,旨在建立光皮樹離體繁殖體系。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    采自湖南省林業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)林苗圃的光皮樹成熟種子 (2007年11月成熟)和嫩枝條 (2008年3月采集)。

    1.2 方法

    1.2.1 光皮樹種子和嫩枝條處理

    (1)光皮樹種子處理:將光皮樹種子摩擦破皮,消毒后接種于基本培養(yǎng)基中。15 d左右種子開始萌動(dòng),長(zhǎng)出子葉和胚軸。分別以子葉和胚軸為外植體進(jìn)行培養(yǎng)。

    (2)光皮樹嫩枝條處理:將采集的嫩枝條放在裝有少許自來水的燒杯中,培育一周左右。待光皮樹腋芽伸長(zhǎng)后,分別以莖段、頂芽、葉片和帶腋芽的莖段為外植體進(jìn)行培養(yǎng)。

    1.2.2 培養(yǎng)條件 培養(yǎng)室溫度25±2℃,日光燈光照14 h/d,光照強(qiáng)度為2 000 lx。

    1.2.3 取材與接種 將光皮樹種子接種到基本培養(yǎng)基上,獲得無菌種子苗。①切割其胚軸和子葉分別以平放和豎插兩種方式轉(zhuǎn)入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。②切割莖段、頂芽、葉片和帶腋芽莖段為外植體,莖段和頂芽切段、葉片切塊,用70%酒精快速浸泡,無菌水沖洗后轉(zhuǎn)入0.1%的升汞中消毒,無菌水沖洗3次。70%酒精的浸泡時(shí)間取0、30、60 s,0.1%升汞溶液的消毒時(shí)間取4、6、9 min。然后接種于基本培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。10 d后統(tǒng)計(jì)污染率,20 d后統(tǒng)計(jì)褐化率。

    1.2.4 愈傷組織誘導(dǎo) 將切割的莖段、頂芽、葉片、胚軸、子葉和帶腋芽的莖段分別接種于附加不同濃度配比的2,4—D和KT的MS培養(yǎng)基中,在愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)過程中,2,4—D設(shè)3個(gè)濃度梯度,KT設(shè)3個(gè)濃度梯度。出愈率為培養(yǎng)30 d后誘導(dǎo)出愈傷的外植體數(shù)與接種外植體數(shù)之比。

    1.2.5 不定芽的誘導(dǎo) 將誘導(dǎo)出的愈傷組織切塊,接種于附加不同濃度配比的6—BA和NAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),觀察愈傷組織的生長(zhǎng)情況。愈傷組織的誘導(dǎo)分化試驗(yàn)設(shè)計(jì)中6—BA設(shè)5個(gè)濃度梯度,NAA設(shè)2個(gè)濃度梯度。分化率為培養(yǎng)30 d后分化的愈傷組織數(shù)與接種愈傷組織數(shù)之比。

    1.2.6 腋芽增殖 將經(jīng)過處理的腋芽接種于添加不同濃度配比的6—BA和KT的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),觀察腋芽增殖過程中所發(fā)生的變化。其中帶腋芽的莖段分為平放和豎插兩種方式。在試驗(yàn)過程中,6—BA設(shè)5個(gè)濃度梯度,KT設(shè)2個(gè)濃度梯度。增殖率為培養(yǎng)30d后總的腋芽數(shù)目與最初接種時(shí)的腋芽數(shù)目的比值。

    1.2.7 根的誘導(dǎo) 待叢芽長(zhǎng)至2~3 cm時(shí),切割分離,轉(zhuǎn)入不同濃度配比的IAA和NAA的MS培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)生根。NAA和IAA均設(shè)3個(gè)濃度梯度。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同消毒時(shí)間對(duì)不同外植體的影響

    用70%酒精和0.1%升汞溶液對(duì)光皮樹的莖段、頂芽、葉片分別進(jìn)行消毒處理,不同處理時(shí)間的效果見表1。

    表1 不同消毒試劑和消毒時(shí)間對(duì)外植體的影響Tab.1 Effects of different sterilization reagent and sterilization time on explants

    表1結(jié)果顯示:單獨(dú)使用升汞消毒時(shí),各外植體的污染率最高,如莖段污染率達(dá)到15%,而與酒精配合使用后,污染率有明顯下降,當(dāng)酒精中浸泡時(shí)間為30 s時(shí),莖段污染率下降至10%。這是因?yàn)楣馄淝o段、頂芽和葉片表面都有細(xì)柔毛,而70%的酒精穿透力較強(qiáng),能短時(shí)間滲透消毒,故與升汞搭配使用較為適宜。隨酒精和升汞溶液中消毒時(shí)間的延長(zhǎng),外植體的污染率呈下降趨勢(shì),而褐化漸趨明顯,褐化率上升。從表1中結(jié)果看出,莖段作為外植體時(shí),在酒精中浸泡30 s后清洗,再于升汞溶液中消毒4~6 min時(shí),材料的污染率較小,且褐化率相對(duì)較低,最佳的消毒時(shí)間為70%酒精30 s,0.1%升汞9 min;頂芽最佳的消毒時(shí)間為70%酒精30 s,0.1%升汞4 min;而葉片表面柔毛較多,故70%酒精60 s后0.1%升汞中處理4 min,能達(dá)到較理想的效果。

    2.2 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比對(duì)不同外植體愈傷組織誘導(dǎo)的影響

    光皮樹愈傷組織誘導(dǎo)頻率與外植體來源有直接關(guān)系。六種外植體在接種到不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比的培養(yǎng)基中,均能誘導(dǎo)出愈傷組織,但誘導(dǎo)條件和愈傷組織的生長(zhǎng)情況不盡相同。(見表2)葉片在第8天開始卷曲,切口邊緣開始長(zhǎng)出亮白色的愈傷組織 (圖1a);莖段在第4天開始啟動(dòng) (圖1b),10 d后長(zhǎng)出淡黃色致密愈傷組織,生長(zhǎng)迅速 (圖1c);頂芽啟動(dòng)稍晚些,但生長(zhǎng)較快,后期長(zhǎng)勢(shì)良好 (圖1g)。

    結(jié)果表明:2,4—D濃度在1~4 mg/L范圍內(nèi)隨著濃度的增加,愈傷組織的誘導(dǎo)率呈上升趨勢(shì),但2,4—D濃度過高 (4 mg/L)抑制愈傷組織的產(chǎn)生,導(dǎo)致愈傷組織出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。當(dāng)2,4—D和KT濃度分別為2 mg/L和0.5 mg/L時(shí),愈傷組織的誘導(dǎo)率較高。其中莖段在最適培養(yǎng)基上出愈率最高,達(dá)到90%,愈傷組織質(zhì)地致密顏色淡黃綠色,生長(zhǎng)速度較快 (圖1c);葉片的出愈率次之,后期達(dá)到89%,愈傷組織質(zhì)地疏松顏色發(fā)白 (圖1a);子葉的出愈率達(dá)到88%,形成了質(zhì)地疏松,淡黃色愈傷組織,后期呈現(xiàn)玫瑰紅色(圖1d);帶腋芽的莖段出愈率達(dá)到84%,形成了疏松,玻璃化的愈傷組織 (圖1e);胚軸的出愈率達(dá)到81%,形成了疏松玻璃化的愈傷組織 (圖1f);頂芽的出愈率也達(dá)到85%,形成了致密,淡黃色的愈傷組織(圖1g)。

    表2 不同濃度組合植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響Tab.2 Effects of different plant growth substances combination on callus induction

    圖1 光皮樹不同外植體的愈傷組織 (一)Fig.1 The callus of different explant of S.wilsoniana(a)

    2.3 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度組合對(duì)愈傷組織分化的影響

    將切塊的愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基 (MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L和MS+6BA 4.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L)中進(jìn)行培養(yǎng),20 d后發(fā)現(xiàn)由葉片、胚軸、子葉和帶腋芽的莖段長(zhǎng)出的愈傷組織均呈現(xiàn)玻璃化和黏液化現(xiàn)象。而由莖段長(zhǎng)出的愈傷組織質(zhì)地依然致密,顏色淡黃綠色。因此,將由莖段誘導(dǎo)出的愈傷組織轉(zhuǎn)入不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度配比的培養(yǎng)基上,35 d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織上的不定芽分化率并記錄愈傷組織的變化情況。結(jié)果見表3。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:由莖段誘導(dǎo)出的愈傷組織接種于上述供試培養(yǎng)基中均未分化。隨著6—BA濃度的升高,愈傷組織的質(zhì)地由疏松變化成稍致密,顏色由透明變?yōu)闇\黃色再到淺黃綠色,為分化提供了可能性。6—BA(4.0 mg/L)和NAA(0.5 mg/L)稍有利于致密淺黃綠色愈傷組織的繼代培養(yǎng)。

    表3 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度組合對(duì)不定芽分化的影響Tab.3 The concentration of different growth regulator combinations on the differentiation of adventitious buds

    2.4 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度組合對(duì)光皮樹腋芽增殖的影響

    將光皮樹帶腋芽的莖段接種于不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度配比的培養(yǎng)基中,接種方式分為平放和豎插。觀察腋芽增殖的情況,并記錄。結(jié)果見表4。

    表4 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度配比對(duì)腋芽增殖的影響Tab.4 Different growth regulators and their concentration ratio on the impact of axillary bud proliferation

    表4結(jié)果表明:帶腋芽的莖段在進(jìn)行平放和豎插時(shí),二者的增殖系數(shù)相差無幾。6—BA的濃度處于1.0 mg/L和8.0 mg/L時(shí),腋芽的增殖系數(shù)較低。從總體上來看,隨著6—BA濃度的增大,增殖系數(shù)先增后降。6—BA濃度為4.0 mg/L、KT為0.5 mg/L時(shí),兩種接種方式的增殖系數(shù)均最高,平放時(shí)可達(dá)3.4。帶腋芽的莖段平放時(shí),接種4 d后腋芽開始萌動(dòng),呈淺嫩綠色且莖段基部膨大,10 d后在腋芽基部周圍產(chǎn)生數(shù)量不等的叢芽數(shù) (2~6個(gè))(圖2a);豎插時(shí),接種6 d后腋芽開始萌動(dòng),15 d后產(chǎn)生數(shù)量不等的叢芽數(shù) (1~5個(gè))。其中平放時(shí)莖段腋芽增殖效果較好,生長(zhǎng)明顯,長(zhǎng)勢(shì)旺盛,莖段健壯 (圖2c)。

    圖2 光皮樹不同外植體的愈傷組織 (二)Fig.2 The callus of different explant of S.wilsoniana(b)

    2.5 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度組合對(duì)生根的影響

    將叢芽轉(zhuǎn)接入供試生根培養(yǎng)基中,叢芽基部逐漸褐化或未見根的分化。其原因可能是因?yàn)楣馄錇槎嗄晟颈局参铮嗄晟颈局参锲毡榇嬖谏^困難或生根時(shí)間較長(zhǎng)等現(xiàn)象[9]。另外供試生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的濃度組合可能不適宜光皮樹的生根培養(yǎng)。

    3 討論

    3.1 子葉和胚軸接種方式對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

    在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),子葉和胚軸誘導(dǎo)愈傷過程中,子葉和胚軸平放對(duì)誘導(dǎo)愈傷較好,這可能是因?yàn)樽尤~和胚軸平放,能充分接觸培養(yǎng)基,從中吸收養(yǎng)分,接受生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的誘導(dǎo),因此兩端切口處的出愈率高,愈傷組織長(zhǎng)勢(shì)較好;當(dāng)子葉和胚軸插入培養(yǎng)基,僅切面細(xì)胞接觸,吸收及接受生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)的面積小,向上運(yùn)輸養(yǎng)分和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑困難,導(dǎo)致子葉和胚軸出愈率下降。在子葉和胚軸誘導(dǎo)不定芽再生過程中,僅僅產(chǎn)生愈傷,均未誘導(dǎo)出芽點(diǎn),可能是細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比值影響了芽的分化,需要進(jìn)一步探索誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基。

    3.2 外植體類型與愈傷組織誘導(dǎo)的關(guān)系

    來源于光皮樹不同部位的愈傷組織在結(jié)構(gòu)和顏色及生長(zhǎng)特性等方面都有明顯的差異。本試驗(yàn)以葉片、莖段、頂芽、子葉、胚軸和帶腋芽的莖段為外植體進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo),該愈傷組織質(zhì)地疏松,在添加較高濃度的6—BA與適量NAA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,以莖段為外植體時(shí),能在切口處膨大產(chǎn)生質(zhì)地稍硬的致密愈傷組織,顏色變成淺黃綠色。在同樣的培養(yǎng)條件下,葉片、頂芽、子葉和胚軸等外植體卻只能誘導(dǎo)出愈傷組織,顏色一般為透明,質(zhì)地疏松。分析其原因,可能是不同部位外植體的組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞類型不同,它們產(chǎn)生愈傷組織所需要的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)種類和所需量也有很大的差別。故以莖段為外植體,愈傷組織的啟動(dòng)能力明顯比其他外植體強(qiáng),誘導(dǎo)時(shí)間短于其他外植體的誘導(dǎo)時(shí)間,且愈傷組織生長(zhǎng)速率快,細(xì)胞分裂時(shí)間短,這與有關(guān)報(bào)道所述光皮樹植株幼嫩莖段細(xì)胞分裂旺盛,易于再分化[10]相符。

    3.3 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)外植體愈傷組織誘導(dǎo)和分化的影響

    植物組織培養(yǎng)的愈傷組織分化過程是生長(zhǎng)素含量逐步降低、細(xì)胞分裂素含量逐步升高的過程。本實(shí)驗(yàn)中愈傷組織未能分化,一種可能是由于還不了解光皮樹自身激素的狀況,沒有找到適合誘導(dǎo)分化的細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比值;另外一種可能是由于高質(zhì)量濃度的2,4—D對(duì)外植體及愈傷組織的傷害。一些研究者認(rèn)為,盡管較高質(zhì)量濃度的2,4-D有利于胚性愈傷組織的誘導(dǎo),但高質(zhì)量濃度的2,4—D使整個(gè)培養(yǎng)系統(tǒng)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)比例始終處于高比例的生長(zhǎng)素類似物狀態(tài),從而不利于隨后進(jìn)行的愈傷組織分化再生芽的過程[11-12];第三種可能是由于所誘導(dǎo)的愈傷組織屬于非胚性愈傷組織,這與有關(guān)資料所述的“非胚性愈傷組織分化率低,甚至不分化”的觀點(diǎn)相符合[12-13]。

    4 結(jié)語(yǔ)

    本文分別從光皮樹愈傷組織的誘導(dǎo)、增殖、分化和腋芽增殖等途徑進(jìn)行研究,各外植體均能誘導(dǎo)愈傷組織,但不定芽分化困難,在愈傷組織誘導(dǎo)不定芽的途徑中,愈傷組織在分化培養(yǎng)基上相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)形態(tài)上幾乎沒有變化。有研究者認(rèn)為初代培育時(shí)培養(yǎng)基配方中的酸性物質(zhì)使外植體處于酸性環(huán)境中并導(dǎo)致植物正常細(xì)胞首先發(fā)生細(xì)胞壁酸性降解,隨后出現(xiàn)原生質(zhì)體脫離細(xì)胞壁,進(jìn)一步發(fā)生細(xì)胞器重組或細(xì)胞重建[14]。在愈傷組織形成后,如果轉(zhuǎn)移過早,還未形成成熟的脫分化組織;過晚,愈傷組織可能褐化或喪失進(jìn)一步分化的能力。所以探索出合適愈傷組織的轉(zhuǎn)移及其分化時(shí)刻也是間接誘導(dǎo)不定芽途徑中非常重要的工作環(huán)節(jié)。今后還應(yīng)在繼代培養(yǎng)、不同時(shí)期的愈傷組織細(xì)胞切片以及次生代謝物方面作深入的研究,從而在生理的基礎(chǔ)上,了解其生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)制。特別是如能從分子水平上檢測(cè)光皮樹不同發(fā)育階段對(duì)各種理化因子的需求,以及通過探索光皮樹不同生長(zhǎng)期對(duì)各種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)答機(jī)制,了解不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑之間和光皮樹的相互作用,從而建立一套完整的離體培養(yǎng)體系。這將對(duì)實(shí)現(xiàn)光皮樹工廠化育苗及進(jìn)一步利用基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)高油含量光皮樹遺傳轉(zhuǎn)化奠定技術(shù)基礎(chǔ),具有重要實(shí)踐意義。

    [1]萬(wàn)志洲,黃利斌,等.明孝陵光皮樹的生物學(xué)特性及繁育技術(shù)研究[J].林業(yè)實(shí)用技術(shù),2007(2):3-5.

    [2]梁仰貞.值得發(fā)展的油料植物——光皮樹 [J].植物雜志,1996(2):12.

    [3]梁仰貞.光皮樹栽培技術(shù) [J].特種經(jīng)濟(jì)植物,2007,10(3):38-39.

    [4]李昌珠,蔣麗娟,程樹棋.生物柴油研究現(xiàn)狀與商業(yè)化應(yīng)用前景[C] //中國(guó)生物質(zhì)能技術(shù)研討會(huì)論文.南京,2002.

    [5]李正茂,鄧新華,李黨訓(xùn).光皮樹經(jīng)濟(jì)性狀及生物質(zhì)液體燃料開發(fā)研究構(gòu)想[J].湖南林業(yè)科技,1996,23(2):11-13.

    [6]成訓(xùn)妍.光皮樹是珍貴的木本食用油料資源 [J].生物與特產(chǎn),1990(6):28.

    [7]本瑪麗,王曉明,李永欣,等.光皮樹優(yōu)良無性系組織培養(yǎng)的無菌體系建立[J].湖南林業(yè)科技,2010,37(2):5-8.

    [8]曾紅燕,李昌珠,蔣麗娟,等.不同方法提取光皮樹籽油的GC-MS分析 [J].中國(guó)生物工程,2004,11(24):83-86.

    [9]朱玉球,童再康,黃華宏,等.紅葉石楠硬枝水培生根試驗(yàn)[J].浙江林學(xué)院學(xué)報(bào),2004,21(1):28-32.

    [10]許智宏,劉春明.植物發(fā)育的分子機(jī)理 [M].北京:北京科技出版社,1999.

    [11]蔣澤平,梁珍海,吳綱,等.秤錘樹的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊,2005,41(2):191.

    [12]潘國(guó)才,婁漢平,吳麗敏,等.遼東楤木組織培養(yǎng)快繁技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè),2009(4):70-71.

    [13]張小紅,陳彥生,康冰,等.激素對(duì)香椿腋芽增殖生長(zhǎng)的效應(yīng) [J].西北植物學(xué)報(bào),2001,21(4):756-760.

    [14]祖元?jiǎng)?,于景華,唐中華,等.植物葉片愈傷組織形成的可能機(jī)制 [J].植物研究,2005,25(1):1-2.

    猜你喜歡
    光皮腋芽莖段
    外源獨(dú)腳金內(nèi)酯對(duì)煙草腋芽伸長(zhǎng)及獨(dú)腳金內(nèi)酯代謝途徑相關(guān)基因表達(dá)的影響
    火龍果愈傷組織誘導(dǎo)及再生體系研究
    生長(zhǎng)素調(diào)控植物腋芽發(fā)育的研究進(jìn)展
    不同激素對(duì)甘草帶芽莖段誘導(dǎo)叢生芽的影響
    茶樹帶腋芽莖段組織培養(yǎng)研究
    茶樹帶腋芽莖段組織培養(yǎng)研究
    Attitudes, knowledge levels and behaviors of lslamic religious officials about organ donation in Turkey:National survey study
    石灰水浸泡不同部位莖段對(duì)木薯苗生長(zhǎng)的影響
    種子(2019年4期)2019-05-28 02:04:10
    光皮木瓜與木瓜的鑒別研究
    仲丁靈對(duì)西瓜腋芽?jī)?nèi)源激素的影響
    两性夫妻黄色片 | 久久久久网色| 丰满乱子伦码专区| 91aial.com中文字幕在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | √禁漫天堂资源中文www| 天天操日日干夜夜撸| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 成年人午夜在线观看视频| 男男h啪啪无遮挡| 桃花免费在线播放| 久久ye,这里只有精品| 国产亚洲最大av| 午夜免费鲁丝| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲精品日本国产第一区| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产亚洲精品久久久com| 国产成人aa在线观看| a级毛色黄片| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲少妇的诱惑av| 午夜精品国产一区二区电影| av在线app专区| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美+日韩+精品| 国产精品.久久久| www.av在线官网国产| 美女中出高潮动态图| 老女人水多毛片| 亚洲av综合色区一区| 欧美成人午夜免费资源| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品久久久久久av不卡| 国产av国产精品国产| 国产1区2区3区精品| 美女福利国产在线| 国产亚洲精品久久久com| 美女国产高潮福利片在线看| 嫩草影院入口| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 黄片无遮挡物在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 欧美xxⅹ黑人| 欧美+日韩+精品| 成人综合一区亚洲| av线在线观看网站| 美女视频免费永久观看网站| 少妇 在线观看| videossex国产| 久久影院123| 久久人人爽人人片av| 热re99久久国产66热| 国产亚洲最大av| 国产成人精品婷婷| 99热国产这里只有精品6| 国产成人精品无人区| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产精品一区www在线观看| 免费大片18禁| 国产一区亚洲一区在线观看| 五月开心婷婷网| 国产成人精品一,二区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲精品国产av成人精品| 久久 成人 亚洲| 男女国产视频网站| av又黄又爽大尺度在线免费看| 香蕉国产在线看| 亚洲av中文av极速乱| 交换朋友夫妻互换小说| 国产av精品麻豆| 精品少妇黑人巨大在线播放| 丁香六月天网| 性色av一级| 一边摸一边做爽爽视频免费| 一区二区三区乱码不卡18| 性色avwww在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 丝袜脚勾引网站| 精品国产国语对白av| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久青草综合色| 热re99久久国产66热| 9191精品国产免费久久| 美女内射精品一级片tv| 中文字幕av电影在线播放| 国产av国产精品国产| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美另类一区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 极品人妻少妇av视频| 亚洲综合色惰| 亚洲av.av天堂| www.色视频.com| 日韩精品有码人妻一区| 日韩精品有码人妻一区| av免费观看日本| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲精品乱久久久久久| 少妇的丰满在线观看| 中国三级夫妇交换| 中国三级夫妇交换| 日日撸夜夜添| 精品午夜福利在线看| 精品久久久久久电影网| 爱豆传媒免费全集在线观看| 少妇的丰满在线观看| 久久这里只有精品19| 2022亚洲国产成人精品| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美精品一区二区大全| 国产极品天堂在线| 美女大奶头黄色视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲五月色婷婷综合| 日韩免费高清中文字幕av| 精品少妇久久久久久888优播| 久久午夜福利片| 免费日韩欧美在线观看| 性色av一级| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 99re6热这里在线精品视频| 欧美人与善性xxx| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲精品一二三| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲第一av免费看| 免费少妇av软件| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 尾随美女入室| 夫妻性生交免费视频一级片| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产精品国产三级专区第一集| 国产精品一国产av| 少妇人妻 视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 性色avwww在线观看| 免费黄色在线免费观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 男女国产视频网站| 午夜福利视频精品| 在现免费观看毛片| 在线免费观看不下载黄p国产| 成年av动漫网址| 蜜桃国产av成人99| 国产深夜福利视频在线观看| 国产成人精品一,二区| 日韩电影二区| 免费在线观看完整版高清| 在线天堂中文资源库| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲av中文av极速乱| 日本wwww免费看| 亚洲综合色惰| 国产激情久久老熟女| 黑人欧美特级aaaaaa片| 热99国产精品久久久久久7| 久久久久精品性色| 大香蕉97超碰在线| 国产在视频线精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久久久久人人人人人| 丝袜喷水一区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美激情国产日韩精品一区| 制服丝袜香蕉在线| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产精品偷伦视频观看了| 日本vs欧美在线观看视频| 男女边摸边吃奶| 国产极品天堂在线| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产永久视频网站| 亚洲精品自拍成人| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品久久蜜臀av无| 黑人高潮一二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 只有这里有精品99| 日本av免费视频播放| 日韩伦理黄色片| 欧美bdsm另类| 伦理电影免费视频| 婷婷色综合大香蕉| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 夜夜爽夜夜爽视频| 飞空精品影院首页| 亚洲国产精品成人久久小说| 免费观看无遮挡的男女| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲av日韩在线播放| 宅男免费午夜| 国产色爽女视频免费观看| 性色avwww在线观看| 两个人看的免费小视频| 国产精品女同一区二区软件| 一本久久精品| 国内精品宾馆在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 人妻 亚洲 视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产成人精品无人区| 日本与韩国留学比较| 久久精品国产自在天天线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 黄色怎么调成土黄色| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲国产精品成人久久小说| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 高清毛片免费看| 91成人精品电影| 国产淫语在线视频| 欧美激情国产日韩精品一区| av.在线天堂| 久久久久久久久久久久大奶| 婷婷色综合大香蕉| 日本vs欧美在线观看视频| 精品久久国产蜜桃| 午夜91福利影院| 日韩一区二区三区影片| a级毛色黄片| 久久人人97超碰香蕉20202| 极品少妇高潮喷水抽搐| a级片在线免费高清观看视频| 免费av不卡在线播放| 久久精品国产自在天天线| 久久人人爽av亚洲精品天堂| www日本在线高清视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 91国产中文字幕| 精品久久国产蜜桃| 大香蕉97超碰在线| 欧美 日韩 精品 国产| 国产午夜精品一二区理论片| 国产av精品麻豆| 午夜日本视频在线| 夫妻午夜视频| 春色校园在线视频观看| 三上悠亚av全集在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 尾随美女入室| 最黄视频免费看| av一本久久久久| 成人无遮挡网站| 黄色 视频免费看| 三上悠亚av全集在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 亚洲精品一区蜜桃| 两个人免费观看高清视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 十八禁网站网址无遮挡| 一级,二级,三级黄色视频| 制服人妻中文乱码| 大香蕉97超碰在线| 乱人伦中国视频| 午夜视频国产福利| 91精品三级在线观看| 免费看光身美女| 看免费成人av毛片| 国产淫语在线视频| 免费看不卡的av| 插逼视频在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 99re6热这里在线精品视频| 另类亚洲欧美激情| 青春草视频在线免费观看| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 成年av动漫网址| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲成人手机| 伦理电影免费视频| 国产成人精品婷婷| 欧美少妇被猛烈插入视频| 日韩av免费高清视频| 18在线观看网站| 这个男人来自地球电影免费观看 | 久久99一区二区三区| 制服诱惑二区| 午夜久久久在线观看| 丝袜美足系列| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 宅男免费午夜| 免费观看av网站的网址| 一区二区三区精品91| 午夜激情久久久久久久| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 一本大道久久a久久精品| 嫩草影院入口| 国产精品一二三区在线看| 亚洲国产成人一精品久久久| 日本欧美视频一区| 伦理电影大哥的女人| 男女啪啪激烈高潮av片| 美女主播在线视频| 少妇的丰满在线观看| 日本av手机在线免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 十八禁高潮呻吟视频| 青春草视频在线免费观看| 久久久欧美国产精品| 精品酒店卫生间| 满18在线观看网站| 满18在线观看网站| 成人国语在线视频| 亚洲情色 制服丝袜| 久久国内精品自在自线图片| 美女视频免费永久观看网站| 美女中出高潮动态图| 精品人妻熟女毛片av久久网站| av网站免费在线观看视频| 视频区图区小说| 黑人猛操日本美女一级片| 99久国产av精品国产电影| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av黄色大香蕉| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 999精品在线视频| 成年av动漫网址| 精品人妻在线不人妻| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 哪个播放器可以免费观看大片| 国产精品免费大片| 国产1区2区3区精品| 涩涩av久久男人的天堂| 91精品三级在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| av在线观看视频网站免费| 精品久久国产蜜桃| 精品少妇久久久久久888优播| 老司机亚洲免费影院| 日日啪夜夜爽| 十八禁网站网址无遮挡| 国产熟女欧美一区二区| 日本vs欧美在线观看视频| 中文字幕av电影在线播放| 热99国产精品久久久久久7| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美日韩综合久久久久久| 国产黄频视频在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 丰满少妇做爰视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 免费看光身美女| 亚洲久久久国产精品| 亚洲精品视频女| 视频区图区小说| 热re99久久国产66热| 久久99热6这里只有精品| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲在久久综合| 只有这里有精品99| 国产片内射在线| 国内精品宾馆在线| 精品一品国产午夜福利视频| 女人久久www免费人成看片| 丝袜人妻中文字幕| 777米奇影视久久| 下体分泌物呈黄色| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | videos熟女内射| 免费大片黄手机在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日韩欧美精品免费久久| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 日韩中字成人| 亚洲精品久久午夜乱码| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 免费看不卡的av| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产黄频视频在线观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 水蜜桃什么品种好| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 国产在线免费精品| 黄片无遮挡物在线观看| 久久ye,这里只有精品| 国产精品一区www在线观看| 久久这里有精品视频免费| 男女下面插进去视频免费观看 | 美女国产高潮福利片在线看| 91成人精品电影| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产综合精华液| 最近2019中文字幕mv第一页| 99热6这里只有精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 90打野战视频偷拍视频| 制服诱惑二区| av国产精品久久久久影院| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品一品国产午夜福利视频| 大话2 男鬼变身卡| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲精品av麻豆狂野| 黄色 视频免费看| 国产成人一区二区在线| 免费高清在线观看视频在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 韩国av在线不卡| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品国产乱码久久久久久小说| 校园人妻丝袜中文字幕| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产又色又爽无遮挡免| 两性夫妻黄色片 | 91aial.com中文字幕在线观看| 热re99久久国产66热| 熟女人妻精品中文字幕| 深夜精品福利| 中文欧美无线码| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产xxxxx性猛交| 91aial.com中文字幕在线观看| 9191精品国产免费久久| 日韩电影二区| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲国产最新在线播放| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 亚洲精品456在线播放app| 熟女电影av网| 大片电影免费在线观看免费| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| av天堂久久9| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 人妻人人澡人人爽人人| 一个人免费看片子| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲国产av影院在线观看| 一级毛片我不卡| 蜜桃在线观看..| 亚洲av福利一区| 人妻系列 视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲国产av新网站| 成人国产麻豆网| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 美女国产高潮福利片在线看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲中文av在线| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 欧美日韩视频精品一区| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲图色成人| 亚洲成人av在线免费| 少妇的丰满在线观看| 老司机影院成人| 精品人妻在线不人妻| 一区二区三区精品91| 日本爱情动作片www.在线观看| 性色av一级| 十八禁网站网址无遮挡| 爱豆传媒免费全集在线观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 老司机影院成人| 看免费成人av毛片| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 18禁动态无遮挡网站| 成人免费观看视频高清| 777米奇影视久久| 三级国产精品片| 亚洲经典国产精华液单| 十分钟在线观看高清视频www| 在线免费观看不下载黄p国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 一级黄片播放器| 成人综合一区亚洲| 伊人亚洲综合成人网| 日韩成人av中文字幕在线观看| 男人舔女人的私密视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费少妇av软件| 亚洲精品自拍成人| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 丝瓜视频免费看黄片| av网站免费在线观看视频| 国产成人av激情在线播放| 免费黄网站久久成人精品| 日本免费在线观看一区| 国产精品一区二区在线不卡| 十八禁高潮呻吟视频| 人成视频在线观看免费观看| 看免费av毛片| 亚洲欧美色中文字幕在线| 这个男人来自地球电影免费观看 | 大码成人一级视频| 99热全是精品| 亚洲国产日韩一区二区| 国产精品免费大片| 国产爽快片一区二区三区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲情色 制服丝袜| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 9色porny在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日日撸夜夜添| 啦啦啦啦在线视频资源| 满18在线观看网站| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产成人精品福利久久| 日本wwww免费看| 热99国产精品久久久久久7| 中国美白少妇内射xxxbb| 香蕉国产在线看| 韩国av在线不卡| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产高清国产精品国产三级| 三上悠亚av全集在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产av精品麻豆| 久久热在线av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日韩一本色道免费dvd| 免费观看无遮挡的男女| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲中文av在线| 日日撸夜夜添| 午夜91福利影院| 男人舔女人的私密视频| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲一区二区三区欧美精品| 一级毛片电影观看| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲成人av在线免费| 99热网站在线观看| av电影中文网址| 国产高清三级在线| 婷婷色麻豆天堂久久| 精品少妇久久久久久888优播| 久久精品国产a三级三级三级| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 一级毛片电影观看| 99热全是精品| 亚洲在久久综合| 免费观看a级毛片全部| 久久国内精品自在自线图片| 午夜福利乱码中文字幕| 飞空精品影院首页| 亚洲精品,欧美精品| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美性感艳星| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲成国产人片在线观看| 国产一级毛片在线| 大话2 男鬼变身卡| 男男h啪啪无遮挡| 熟女av电影| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲第一av免费看| 久久久久国产网址| 精品一区在线观看国产| 日本91视频免费播放| 黑人高潮一二区| 男人舔女人的私密视频| a级毛片在线看网站| av电影中文网址| 国产欧美亚洲国产| 两个人看的免费小视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 91国产中文字幕| 免费日韩欧美在线观看| 香蕉丝袜av| 成人影院久久| 夜夜爽夜夜爽视频| 最黄视频免费看| 婷婷色av中文字幕| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品女同一区二区软件| 成年女人在线观看亚洲视频| 女人精品久久久久毛片| 涩涩av久久男人的天堂| 91aial.com中文字幕在线观看| 曰老女人黄片| 日韩av不卡免费在线播放| 国产亚洲最大av| 一二三四中文在线观看免费高清| 青青草视频在线视频观看| 成人综合一区亚洲|