野生酸棗果肉幾種有機(jī)酸含量分析研究

劉世鵬，曹娟云，陳宗禮

（延安大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西省區(qū)域生物資源保育與利用工程技術(shù)研究中心，陜西 延安 716000）

酸棗（Ziziphus jujuba var.spinosa）系鼠李科（Rhamnaceae）落葉灌木，廣泛分布于我國北方諸省，具有養(yǎng)肝、寧心、安神及其斂汗的功效[1]，常用于治療神經(jīng)衰弱、心煩失眠、多夢、盜汗、易驚等疾病[2]，同時(shí)又有一定的滋補(bǔ)作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，酸棗的主要活性是齊墩果酸、熊果酸等幾種五環(huán)三萜類化合物，它們具有抑菌、保肝、降脂、升白細(xì)胞、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能，近年又證明其具有一定的抗癌活性[3]，因此受到廣泛關(guān)注。

王向紅等[3]對酸棗和紅棗的果肉與果仁中的齊墩果酸與熊果酸進(jìn)行了分析，結(jié)果表明酸棗果肉的含量明顯高于紅棗，而酸棗仁中幾乎不含有齊墩果酸和熊果酸。最近的研究表明，不同地區(qū)的酸棗種質(zhì)資源不同[4-5]，即使在同一地區(qū)差異也很大[6]。為此，本研究對幾個(gè)不同產(chǎn)地的不同種質(zhì)酸棗果肉的總酸、Vc以及齊墩果酸和熊果酸含量進(jìn)行對比研究，為酸棗的充分開發(fā)利用及品種選育提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

島津LC-2010A型高效液相色譜儀（日本島津），紫外檢測器（河南兄弟儀器設(shè)備有限公司），Easy3000色譜工作站（上海千譜軟件有限公司）；德國 Sartorius BP-221s電子天平（德國Sartotius公司）；超純水制備系統(tǒng):MILLI-Q Synthesis（美國MILLIPORE）；超聲儀：KQ—300DE型（昆山超聲儀器有限公司）；針筒式微孔濾膜過濾器（江蘇百林科技，孔徑0.45 μm）；PB-10型酸度計(jì)；離心機(jī)（SIGMA 3K30）等。

1.2 試劑

標(biāo)準(zhǔn)樣品：齊墩果酸、熊果酸、檸檬酸購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇，乙腈為美國Fisher公司產(chǎn)品，為色譜純；其余試劑均為分析純，所使用的水為去離子的雙蒸餾水。

1.3 試驗(yàn)材料

6種酸棗材料分別采自陜西神木、陜西安塞、山西呂梁、河北邢臺(tái)和山東煙臺(tái)。其中采自陜西神木的兩個(gè)材料外形差別較大。其主要生物學(xué)性狀見表1。

1.4 樣品處理

表1 6種酸棗果實(shí)的主要生物學(xué)性狀

酸棗樣品依次用自來水、蒸餾水、雙蒸水清洗干凈后，一部分風(fēng)干用于總酸和Vc的測定，另一部分放45°C烘箱中烘至完全干燥后，去核，將果肉研磨粉碎成粉末狀，－20°C密封保存，用作齊墩果酸和熊果酸含量的測定。

1.5 總酸與Vc的測定

采用滴定法，分別按GB/T 5009.187-2003（以檸檬酸計(jì)）[7]和何照范等[8]的方法，每個(gè)樣品重復(fù)6次。

1.6 齊墩果酸和熊果酸含量測定

1.6.1 色譜條件 色譜柱：Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm），流動(dòng)相∶乙腈∶甲醇∶0.5%醋酸銨=67∶12∶21，磷酸調(diào) pH 值為 2.8；流速：0.8 mL/min；柱溫：22℃檢測波長：210 nm。

1.6.2 對照品溶液的配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密稱取齊墩果酸和熊果酸對照品適量,甲醇溶解，配成含齊墩果酸濃度為0.71 mg/mL和熊果酸0.72 mg/mL 的溶液。取齊墩果酸原液、稀釋 2、5、10、20 倍，熊果酸溶液稀釋 8、10、15、20、25 倍后均進(jìn)樣 10 μL，按1.6.1色譜條件下分析，記錄色譜峰面積。

1.6.3 供試品的制備和測定 精密稱取6種干燥酸棗果肉粉末各0.5 g，置于具塞試管中，精密加甲醇3.0 mL，稱重,超聲提取30 min，以甲醇補(bǔ)重，8 000 r/min離心20 min，吸取上清液以0.45 μm微孔濾膜過濾，濾過后進(jìn)樣20 μL。色譜條件同1.6.1。

2 結(jié)果與分析

2.1 總酸與Vc測定結(jié)果

圖1、圖2為6個(gè)材料的總酸與Vc含量。由圖中可以看出，6個(gè)材料的總酸和Vc含量分別在0.4%～4.2%和277～631 mg/100g FW之間，均為4號(hào)最高，2號(hào)最低。除了5號(hào)與6號(hào)的總酸含量接近外，材料之間的總酸與Vc含量差異顯著（p<0.05）。

圖1 6個(gè)酸棗材料果肉的總酸

圖2 6個(gè)酸棗材料果肉的Vc含量

2.2 齊墩果酸和熊果酸的回歸方程

標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：齊墩果酸：y=0.500 5 x+0.058 4，r=0.999；熊果酸：y=0.3846 x－0.008 6，r=0.995。結(jié)果表明齊墩果酸含量在0.3571～7.1429 μg、熊果酸含量在0.285 7～0.892 9 μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一齊墩果酸和熊果酸對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。

齊墩果酸和熊果酸峰面積積分值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為7.2%和2.1%,表明儀器精密度良好。

2.4 供試液穩(wěn)定性

取同一樣品溶液在 0、2、4、6、8、10、12 h 分別進(jìn)樣20 μL,依次測定,結(jié)果6次測定齊墩果酸和熊果酸含量的RSD分別為6.1%和1.8%。造成齊墩果酸穩(wěn)定性相對較差的原因可能是由于提取液呈微酸性，在此條件下，放置時(shí)間過長會(huì)使有機(jī)酸部分發(fā)酵變質(zhì)，試驗(yàn)結(jié)果提示供試液應(yīng)及時(shí)測定。

2.5 重復(fù)性分析

精密稱取同一樣品6份，按供試品溶液的制備項(xiàng)操作，平行制備供試樣品，每份進(jìn)樣20 μL。齊墩果酸和熊果酸各自峰面積的6次測定結(jié)果RSD分別為：4.3%和2.8%。結(jié)果表明，該方法的重復(fù)性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

取干燥樣品（齊墩果酸含量為 0.54 mg/g,熊果酸的含量為0.66 mg/g）的樣品6份,每份0.5 g,分別精密加入齊墩果酸對照品溶液3.0 mL，按2.2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行提取和含量測定。測得并計(jì)算齊墩果酸和熊果酸的平均回收率為99.88%和99.42%（表2、3），結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確、可靠。

表2 齊墩果酸加樣回收率測定結(jié)果

表3 熊果酸加樣回收率測定結(jié)果

2.7 樣品測定結(jié)果

在1.6.1色譜條件下測定6個(gè)樣品的齊墩果酸和熊果酸總量。結(jié)果見圖3和表4。6個(gè)材料中齊墩果酸含量4號(hào)的最高，1號(hào)最低，總體在0.22～0.547 mg/g之間，而6個(gè)材料的熊果酸含量6號(hào)最高，1號(hào)最低，總體在0.280～0.645 mg/g之間。

圖3 樣品液相色譜圖

表4 6個(gè)酸棗材料果肉的齊墩果酸和熊果酸含量（mg/g）

3 討 論

酸棗廣泛分布于中國北方諸省。酸棗因其豐富的資源、突出的適應(yīng)性、顯著的食療價(jià)值，以及純天然、富含營養(yǎng)等優(yōu)勢，近年來日益受到農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、食品等行業(yè)的的關(guān)注，成為當(dāng)今世界棗屬植物中研究和開發(fā)利用的新寵[2]。但目前酸棗的利用主要是酸棗仁入藥，而素稱“Vc之王”[4]的果肉的開發(fā)和利用尚不夠充分，造成了巨大的資源浪費(fèi)。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同種質(zhì)的酸棗總酸和Vc含量差異很大，均為來自于山西呂梁的4號(hào)最高、陜西神木的2號(hào)最低。6個(gè)材料的總酸與Vc含量呈極顯著正相關(guān)，這與前人的研究結(jié)果一致[4，9]，據(jù)此，在肉用或汁用酸棗資源的預(yù)選中，高酸可作為高Vc酸棗的重要預(yù)選指標(biāo)。

王向紅等對一種酸棗的果肉和多種不同產(chǎn)地紅棗中的齊墩果酸與熊果酸含量進(jìn)行了分析，結(jié)果表明酸棗果肉的含量明顯高于所測試的其他紅棗的。本研究在實(shí)驗(yàn)室采集的眾多酸棗材料中選擇了采自不同地區(qū)的6種外觀等生物學(xué)形狀差異明顯的酸棗果肉材料，測得的6個(gè)材料中齊墩果酸和熊果酸含量在有些材料之間差異明顯，但均高于紅棗的[3]，由此說明，酸棗果肉具有深入開發(fā)價(jià)值。

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