VEGF-A和VEGF-C在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義

崔玉梅 宋飛翔 張雅潔

（1 北京市第六醫(yī)院急診，北京100700；2 北京軍區(qū)總醫(yī)院腫瘤診療中心，北京100700；3 廣州醫(yī)學(xué)院腫瘤研究中心，廣東 廣州 510180）

腫瘤已成為威脅人類(lèi)健康的主要疾病之一。近30年來(lái)，腫瘤研究領(lǐng)域取得了重大進(jìn)展，F(xiàn)olkman[1]于1971年提出腫瘤血管新生（Angiogenesis）的概念，以新生血管為腫瘤治療的“靶點(diǎn)”已成為研究的熱點(diǎn)。目前已知有數(shù)十種促血管生成及抑制血管生成的因子，其中VEGF-A被認(rèn)為可能是最強(qiáng)的促血管生成因子[2]，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用主要表現(xiàn)為促進(jìn)血管新生。VEGF-C是VEGF家族中最強(qiáng)的促淋巴管生成因子。本研究旨在探討VEGF-A和VEGF-C在人類(lèi)乳腺癌組織中的表達(dá)及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院1999年1月至2001年1月經(jīng)手術(shù)切除，病理診斷為乳腺癌者98例，其中包括42例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)石蠟切片（患者術(shù)前均未接受化療和放療）?；颊吣挲g27～81歲，平均55.8歲。病史3個(gè)月～10年。根據(jù)1989年我國(guó)乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]進(jìn)行分類(lèi)，98例乳腺癌中，原位癌4例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌94例，其中伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者42例，無(wú)轉(zhuǎn)移者56例。

1.2 方法

主要實(shí)驗(yàn)儀器：正位相差照相顯微鏡（Leica公司），光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司），微波爐（日本National公司），電子天平（SARTOIUSAG公司），微量移液器（德國(guó)BRAND公司），pH計(jì)（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。主要試劑：磷酸鹽緩沖液（PBS）、檸檬酸鹽緩沖液（抗原修復(fù)液）、0.1%胰酶消化液。采用SP（鏈霉菌抗生物素-過(guò)氧化物酶）法，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。對(duì)照設(shè)置：用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，選VEGF-A、C高表達(dá)乳腺癌為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷

①VEGF-A、VEGF-C染色乳腺癌細(xì)胞、間質(zhì)脈管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)棕褐色為陽(yáng)性。PCNA以癌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞核呈現(xiàn)棕褐色為陽(yáng)性。②低倍鏡下分別選取VEGF-A（+）癌細(xì)胞、VEGF-C（+）或PCNA（+）癌細(xì)胞最密集區(qū)。③乳腺癌細(xì)胞VEGF-A、VEGF-C表達(dá)強(qiáng)度，按癌細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色著色深淺打分：0分為無(wú)色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占百分比打分：0分為陰性，1分為陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜10%，2分陽(yáng)性細(xì)胞百分比11%～50%，3分陽(yáng)性細(xì)胞百分比＞51%。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積：≥3分為（+），即0～2分為（-），3～4分為（+），5～7分為（++），8～9分為（+++）。乳腺癌細(xì)胞PCNA表達(dá)分級(jí)按文獻(xiàn)報(bào)道方法進(jìn)行分級(jí)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩個(gè)獨(dú)立樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)；兩個(gè)變量相關(guān)性分析采用雙變量相關(guān)分析；多個(gè)樣本之間的兩兩比較采用單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF-A、VEGF-C在乳腺癌組織中的表達(dá)及其分布特點(diǎn)

VEGF-A陽(yáng)性細(xì)胞為彌漫性細(xì)胞漿著色。98例乳腺癌組織中，VEGF-A染色陽(yáng)性84例，陽(yáng)性率為85.7%。VEGF-C陽(yáng)性細(xì)胞為彌漫性細(xì)胞漿著色。VEGF-C染色陽(yáng)性率為90.8%（89/98例）。

2.2 VEGF-A、VEGF-C蛋白表達(dá)與腫瘤細(xì)胞增殖和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

VEGF-A蛋白表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系：VEGF-A陽(yáng)性率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（100%）明顯高于未轉(zhuǎn)移組（75%），二者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。由表1可見(jiàn)，隨著VEGF-A表達(dá)的增強(qiáng)，PCNA的高表達(dá)增多。采用RXC的等級(jí)相關(guān)α2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表1）。VEGF-C陽(yáng)性率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（98%）明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（86%）（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.3 VEGF-C表達(dá)與PCNA表達(dá)的關(guān)系

隨著VEGF-C表達(dá)的增強(qiáng)，PCNA表達(dá)也增強(qiáng)。采用RXC的等級(jí)相關(guān)α2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-A、VEGF-C在乳腺癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，陽(yáng)性率分別為85.7%（84/98）和90.8%（89/98），陽(yáng)性細(xì)胞主要是腫瘤細(xì)胞和新生血管內(nèi)皮細(xì)胞，說(shuō)明VEGF-A、VEGF-C蛋白主要由腫瘤細(xì)胞通過(guò)旁分泌作用于既存血管誘導(dǎo)血管新生而發(fā)揮作用，新生血管可以通過(guò)自分泌作用進(jìn)一步增強(qiáng)血管新生的能力。本研究中可見(jiàn)癌旁組織乳腺部分導(dǎo)管上皮細(xì)胞也呈VEGF-A、VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)，提示VEGF-A和VEGF-C在乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞增殖過(guò)程中可能起一定作用，二者表達(dá)增強(qiáng)可能是乳腺癌發(fā)生的早期事件。

表1 VEGF-A、VEGF-C與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

98例乳腺癌中，14例VEGF-A陰性，9例VEGF-C陰性，它們的微血管數(shù)量與陽(yáng)性例標(biāo)本相比明顯減少，無(wú)1例發(fā)生轉(zhuǎn)移。推測(cè)VEGF-A、VEGF-C在腫瘤血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移中有重要作用，同時(shí)也提示腫瘤血管形成還受其他生長(zhǎng)因子的調(diào)控。腫瘤細(xì)胞增殖活性檢測(cè)表明，隨著乳腺癌細(xì)胞VEGF-A及VEGF-C表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞的增殖活性逐漸增強(qiáng)，與Kushilinskii等[4]報(bào)道相同，他們對(duì)乳腺癌標(biāo)本免疫組織化學(xué)檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)VEGF-A表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞增殖密切相關(guān)。劉芳等[5]研究表明VEGF-C可通過(guò)與受體結(jié)合促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，98例乳腺癌組織中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF-C的表達(dá)明顯高于未轉(zhuǎn)移組，VEGF-C與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在對(duì)多種腫瘤組織的研究中發(fā)現(xiàn)，VEGF-C表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)[6]。VEGF-C促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖也有利于腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。Makoto等[7]研究表明VEGF-C在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起一定作用，但不是必需的。

綜上所述，VEGF-A、VEGF-C可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖，阻斷二者的表達(dá)，在一定程度上可抑制MCF-7細(xì)胞的增殖。VEGF-A在乳腺癌血管生成中起重要促進(jìn)作用。VEGF-C與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

[1] Folkman J.Tumor angiogenesis:therapeutic implications[J].N Engl J Med,1971,285(21):1182-1186.

[2] Aprelikova O,Pajusola K,Partanen J,et al.FLT-4,a novel class receptor tyrosine kinase in chromosome 5q33-qter[J].Cancer Reserch,1992,52(3):746-748.

[3] 許中良.乳腺病理學(xué)[M].上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,1999:359.

[4] Kushlinskii NE,Orinovskii MB,Gurevich LE,et al.Expression of biomolecular markers (Ki-67,PCNA,Bcl-2,BAX,BclX,VEGF) in breast tumors[J].Bull Exp Biol Med,2004,137(2):182-185.

[5] 劉芳,張雅潔.VEGF-C及其受體Flt-4在乳腺癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移中的作用[J].癌癥,2003,22(10):1053-1056.

[6] Kitadai Y,Amioka T,Haruma K,et al.Clinicopathological significance of vascular endothelial growth factor(VEGF-C) in human esophageal squamous cell carcinomas[J].Int J Cancer,2001,93(5):662-666.

[7] Makoto I,Joji K,Kazama S,et al.Exprission of vascular endothelial growth factor-C in preoperative biopsy speciments and metastatic foci of regional nodes in submucosal gastric carcinoma[J].World J Surg Oncol,2005,3(1):2.