永州黃姜提取物抗腫瘤效果研究

羅四維，周秦

黃姜學(xué)名盾葉薯蕷（Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright），為薯蕷科薯蕷屬（Dioscrea.L）草質(zhì)纏繞性藤本植物[1]。黃姜提取物中主要活性成分為薯蕷皂苷（Diosgenin），又稱薯蕷皂素。研究表明，薯蕷皂苷具有溶血、降血脂、抗菌、消炎、脫敏、修復(fù)病變組織、刺激肝素細(xì)胞生長及促進膽汁分泌等作用[2]。近年來國內(nèi)外學(xué)者對薯蕷皂苷作為甾體激素藥物和甾體避孕藥的主要中間體的研究較多，但對其抗腫瘤的效果研究甚少，特別是對湖南省黃姜主要產(chǎn)區(qū)永州出產(chǎn)的黃姜暫無系統(tǒng)研究。本文以永州的黃姜為原材料，以其提取物進行體外抗腫瘤的實驗。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系及原料 肺癌細(xì)胞系（A549）、人宮腔癌細(xì)胞系（HeLa）、口腔鱗狀上皮癌細(xì)胞系（KB）、乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7）、膽管癌細(xì)胞系（QBC）均購自于中南大學(xué)藥學(xué)院；黃姜原料采自湖南永州。

1.1.2 實驗儀器 SW-CJ-1FD 超凈工作臺購自蘇州安泰；CO2培養(yǎng)箱購自北京綠源旺業(yè)科技有限公司；DG5031 酶標(biāo)免疫檢測儀購于上海京工實業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 薯蕷皂素提取 將黃姜置于烘箱中，60℃烘干，粉碎后過 40 目篩，置于索氏提取器中 90℃連續(xù)提取 12 h，提取產(chǎn)物用 HPLC 檢查含量后置入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中揮干待用。

1.2.2 體外抗腫瘤實驗 采用四氮唑鹽（MTT）還原法進行測定，提取所得物以二甲基亞砜（DMSO）溶解后用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成 10、15、20、25、30、35、40、45 μmol/L。

取貼壁生長良好的腫瘤細(xì)胞進行消化處理，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×108個/L 接種于 96 孔培養(yǎng)板，每孔 100 μl，于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 h，實驗組分別加入以上濃度的提取液，另設(shè)對照組（不加藥）和空白組（只有培養(yǎng)基），陽性藥為5-氟尿嘧啶（5-fu），陽性藥物配制成同樣濃度，加入96 孔板中，每組重復(fù) 4 孔。培養(yǎng) 24 h，加入 MTT（5 g/L）。繼續(xù)培養(yǎng) 4 h 后棄上清，每孔加入 100 ml 的 DMSO，避光振蕩 10min，用全自動酶聯(lián)免疫檢測儀于 405 nm 處測定吸光度值，計算細(xì)胞存活率。公式如下：

細(xì)胞存活率（%）=（實驗組 OD 值 － 陰性組 OD值）/（空白 OD 值 － 陰性組 OD 值）×100%

2 結(jié)果

經(jīng) MTT 法進行還原，使用酶標(biāo)免疫儀對其 OD 值進行測定，并與抑制腫瘤常用藥物 5-fu 進行對比，所得結(jié)果如表1～2 所示。

表1 不同濃度黃姜提取物對不同腫瘤細(xì)胞存活率影響

表2 不同濃度 5-fu 對不同腫瘤細(xì)胞存活率的影響

表3 中結(jié)果所示，在 A549、HeLa、KB、QBC 四種細(xì)胞中，黃姜提取物的 LC50 低于 5-fu 的 LC50 值，而在 MCF-7 細(xì)胞中黃姜提取物的 LC50 值高于 5-fu 的LC50 值。

表3 黃姜提取物與 5-fu 對不同腫瘤細(xì)胞半致死濃度（LC50）分析

3 討論

黃姜作為生物甾體激素藥物的報道較多，但作為抗腫瘤藥物的報道較少。尤其是湖南永州為黃姜產(chǎn)區(qū)，經(jīng)查證從未對黃姜的抗腫瘤效果進行過科學(xué)的研究。作者基于黃姜的還原特性，結(jié)合清除自由基、抗氧化的特性，對其抗腫瘤效果進行了研究。

結(jié)合參照物常規(guī)抗腫瘤藥物 5-fu 結(jié)果所示，當(dāng)?shù)禺a(chǎn)黃姜具有較好的抑制腫瘤效果，除對 HeLa 細(xì)胞的 LC50 值有較大差異外，其余四種細(xì)胞的 LC50 值比較接近。因此可以認(rèn)為，黃姜提取物的抑制腫瘤效果接近 5-fu。但黃姜提取物為天然產(chǎn)物，對機體的傷害程度與 5-fu 相比較小，副作用更低。因此黃姜提取物作為抗腫瘤的藥物，具有進一步開發(fā)與綜合利用價值，擁有較高的經(jīng)濟價值與實用價值。

[1]Dong JZ, Yi ZL, Jiang JX.A summary of researches on Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright.Hubei Agric Sci, 2004(2):84-88.(in Chinese)董靜洲, 易自力, 蔣建雄.盾葉薯蕷綜合研究概況.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2004(2):84-88.

[2]Yang RF, Pan W, Zhang G, et al.The effect of dioscin on serum lipid level in patients with hyperlipemia.Chin J Cardiovasc Rev, 2005,3(10):776-777.(in Chinese)楊瑞豐, 潘偉, 張戈, 等.薯蕷皂甙對血脂紊亂治療的臨床研究.中國心血管病研究雜志, 2005, 3(10):776-777.