復(fù)合非淀粉多糖酶制劑對肉雞生長性能及腸道酶活性的影響

程志斌 蘇子峰 張紅兵 魏 云 王記林 廖啟順

肉雞玉米-豆粕型日糧在我國飼料工業(yè)中的應(yīng)用十分廣泛，但隨著近幾年來，玉米、豆粕等常規(guī)飼料原料價(jià)格的日益高漲（李曉珍等,2010），在實(shí)際生產(chǎn)中更多使用玉米-豆粕型日糧中添加麥麩、次粉、雜粕等非常規(guī)飼料原料，以降低飼料配方成本。這些非常規(guī)植物飼料原料中含有相對比例較高的非淀粉多糖（non-starch polysaccharides,NSP），如果在肉雞日糧中大量添加，將抑制腸道消化酶活性，從而降低肉雞生長性能（李成良等,2009）。為了消除NSP抗?fàn)I養(yǎng)因子的影響，單一NSP酶制劑的研究和使用效果得到了廣泛認(rèn)可（Adeol等，2004；Senkoylu等,2004;李路勝等,2010;王鵬宇等,2010）。隨著飼料和養(yǎng)殖企業(yè)使用的非常規(guī)飼料原料日益多樣化及添加比例不斷提高，將單一NSP酶制劑組合使用的復(fù)合NSP酶制劑更具優(yōu)勢，是未來酶制劑產(chǎn)品的主要發(fā)展趨勢之一（馮定遠(yuǎn)等，2010）。然而，當(dāng)前市售商業(yè)復(fù)合NSP酶制劑產(chǎn)品繁雜，使用效果差異較大（蘇軍等，2006；王允超等，2010；張青青等，2010）。為了探討NSP酶制劑在肉雞上使用效果差異的作用機(jī)理，為廣大養(yǎng)殖戶和飼料企業(yè)選用復(fù)合NSP酶制劑產(chǎn)品提供科學(xué)依據(jù)，本試驗(yàn)重點(diǎn)研究復(fù)合NSP酶制劑對肉雞腸道消化酶的影響。

1 材料與方法

1.1 復(fù)合NSP酶制劑

當(dāng)前市售復(fù)合NSP酶制劑產(chǎn)品的酶種類和酶活性差異較大，一般產(chǎn)品的建議添加量可以分為“低、中、高”3個(gè)劑量，以滿足不同客戶實(shí)際使用的需求。本試驗(yàn)遵循實(shí)際生產(chǎn)情況，選擇了添加0.15、0.5、1 kg/t全價(jià)日糧的3個(gè)商業(yè)NSP酶制劑產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)。為了充分說明試驗(yàn)結(jié)果，我們實(shí)測了3個(gè)產(chǎn)品中各種NSP酶的活性（見表1）。

表1 NSP酶制劑產(chǎn)品的酶活性實(shí)測值（U/g）

1.2 試驗(yàn)動物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將200只21日齡羅斯（ROSS）肉雞分成5個(gè)處理組：處理1組（正對照組）、處理2組（負(fù)對照組），處理3～5組在負(fù)對照組日糧基礎(chǔ)上各添加一種復(fù)合NSP酶制劑商業(yè)產(chǎn)品，NSP酶制劑添加量與試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)見表2。正對照組和負(fù)對照組日糧營養(yǎng)水平一致，負(fù)對照組選用了一定比例的非常規(guī)飼料原料。每個(gè)處理組40只肉雞，公母各半。試驗(yàn)在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)雞場進(jìn)行，試驗(yàn)周期21 d，至肉雞42日齡，統(tǒng)計(jì)生長性能后，每個(gè)處理組挑選10只（重復(fù)數(shù)10）屠宰，測定腸道消化酶活性。

表2 試驗(yàn)處理組與酶制劑添加量及酶活性計(jì)算值

1.3 試驗(yàn)日糧

參考農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）》并結(jié)合云南省養(yǎng)殖實(shí)際情況配制基礎(chǔ)日糧(見表3)。處理1組(正對照)基礎(chǔ)日糧設(shè)計(jì)為玉米-豆粕型常規(guī)日糧；處理2組(負(fù)對照)在玉米-豆粕型日糧基礎(chǔ)上使用了非常規(guī)飼料原料麥麩、次粉、DDGS，占全價(jià)日糧的比例9%；處理3～5組在處理2組基礎(chǔ)上分別添加3個(gè)復(fù)合NSP酶制劑商業(yè)產(chǎn)品（加入預(yù)混料中）。所有試驗(yàn)日糧低溫（65℃）加工成顆粒飼料。

1.4 飼養(yǎng)管理

自然光照輔以人工照明，光照時(shí)間22 h，乳頭式飲水，自由采食，專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)試驗(yàn)并記錄。

1.5 測定指標(biāo)

肉雞生長性能指標(biāo)統(tǒng)計(jì)平均日增重、平均日采食量及飼料轉(zhuǎn)化效率（料肉比）。肉雞至42日齡，每個(gè)處理組隨機(jī)抽取10只健康雞處死。分別取十二指腸、空腸及其內(nèi)容物測定主要消化酶的酶活性。樣品前處理參考黃曉亮等（2009）制備。蛋白酶活性測定采用福林-酚試劑法，定義為38℃每1 min水解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸的酶量為1個(gè)酶活力單位（U）。淀粉酶活性采用碘淀粉比色法，定義為38℃每1 min水解釋放1 μmol還原性碳水化合物（以一水麥芽糖計(jì)算）所需的酶量為1個(gè)酶活力單位。脂肪酶活性采用滴定法，定義38℃每1 min脂肪酶水解脂肪并中和1 μmol氫氧化鈉的酶量為1個(gè)酶活力單位（繆輝南等,1983）。

表3 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和鄧肯氏多重比較，P≤0.05差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合NSP酶制劑對肉雞生長性能的影響(見表4)

由表4可知，處理1組（正對照組）肉雞的末體重顯著高于（P≤0.05）處理2組（負(fù)對照組）。處理3～5組肉雞日糧均添加了一種復(fù)合NSP酶制劑，其中處理3組肉雞的料肉比顯著優(yōu)于（P≤0.05）處理1、2和5組；末體重指標(biāo)，處理3和4組間無顯著差異（P>0.05），但顯著高于處理2和5組。

2.2 復(fù)合NSP酶制劑對肉雞十二指腸消化酶活性的影響(見表5)

由表5結(jié)果顯示，處理2組肉雞十二指腸及其內(nèi)容物的淀粉酶和蛋白酶活性顯著低于（P≤0.05）處理1組。處理3組肉雞十二指腸淀粉酶以及十二指腸內(nèi)容物蛋白酶性顯著高于處理1組和處理2組?？傮w而言，處理4組和5組之間肉雞的十二指腸淀粉酶和蛋白酶活性差異不顯著（P>0.05），但顯著低于處理3組。此外，所有處理組之間，十二指腸的脂肪酶活性差異不顯著。

2.3 復(fù)合NSP酶制劑對肉雞空腸消化酶活性的影響(見表 6）

由表6結(jié)果顯示，除脂肪酶外，處理2組肉雞空腸及其內(nèi)容物的淀粉酶和蛋白酶活性均顯著低于（P≤0.05）處理1組。處理3組肉雞空腸內(nèi)容物的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性顯著大于其它4個(gè)處理組（P＜0.05）。處理組4肉雞空腸蛋白酶活性與處理3組相比差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于處理5組。此外，所有處理組之間，空腸的脂肪酶活性差異不顯著。

表4 復(fù)合NSP酶制劑對肉雞生長性能的影響

表5 復(fù)合NSP酶制劑對肉雞十二指腸消化酶活性的影響

表6 復(fù)合NSP酶制劑對肉雞空腸消化酶活性的影響

3 討論

本試驗(yàn)從肉雞腸道消化酶的角度探討復(fù)合NSP酶制劑對肉雞生長性能的影響，因此試驗(yàn)日糧配方設(shè)計(jì)重點(diǎn)考慮以下幾點(diǎn)：其一，日糧營養(yǎng)水平參考農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）》，并結(jié)合云南省昆明市（高原地區(qū)）實(shí)際養(yǎng)殖情況配制，所有處理組營養(yǎng)水平一致；其二，處理1組設(shè)計(jì)為常規(guī)玉米-豆粕型日糧的正對照組，處理2組設(shè)計(jì)為在玉米-豆粕型日糧基礎(chǔ)上添加一定比例的非常規(guī)飼料原料的負(fù)對照組，這有利于觀察在處理2組基礎(chǔ)上添加3種劑量復(fù)合NSP酶制劑的作用效果；其三，非常規(guī)飼料原料選用了麥麩、次粉、DDGS，理由是這3種通常使用的非常規(guī)飼料原料具有相對較高含量的木聚糖、葡聚糖、纖維素等NSP抗?fàn)I養(yǎng)因子（蘇軍等，2006；汪勇,2008）。

大量研究顯示，單一NSP酶制劑主要包括：木聚糖酶、葡聚糖酶、纖維素酶、果膠酶、甘露聚糖酶等（Adeol等，2004；Senkoylu 等，2004；蘇軍等，2006；馮定遠(yuǎn)等，2010；王允超等，2010；張青青等，2010）。木聚糖酶主要作用主碳鏈，專一降解由木糖連接而成的β-1，4糖苷鍵（Adeol等，2004）；葡聚糖酶專一降解葡聚糖鏈內(nèi)的 β-1，3糖苷鍵（Senkoylu等，2004）；纖維素酶可以分為內(nèi)切和外切纖維素酶2種，將纖維素分解為纖維二糖和纖維糊精（王敏輝，2009）；甘露聚糖酶降解由甘露糖連接而成的β-1，4糖苷鍵（汪勇，2008）。果膠酶（Pectic enzyme）較復(fù)雜，通常認(rèn)為可以分為3種，包括果膠酯酶（Peetinestersase）、果膠酶（Pectinase）、原果膠酶（Protopeetinase），果膠酶主要水解果膠中以α-1,4糖苷鍵結(jié)合的半乳糖醛（許毅等，2004；王寶維等,2009）。當(dāng)前，隨著飼料和養(yǎng)殖企業(yè)使用的非常規(guī)飼料原料日益多樣及比例提高，畜禽日糧添加復(fù)合NSP酶制劑已經(jīng)成為共識。

本試驗(yàn)按照市售復(fù)合NSP酶制劑產(chǎn)品一般建議添加劑量，選擇了 0.15、0.5、1 kg/t的“低、中、高”劑量的3個(gè)商業(yè)產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)。由于在全價(jià)配合飼料中NSP酶活性無規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)方法測定，為了充分說明本試驗(yàn)結(jié)果，我們實(shí)測了試驗(yàn)選擇的復(fù)合NSP酶制劑產(chǎn)品的酶種類和酶活性（見表1），并計(jì)算各個(gè)NSP酶活性在肉雞試驗(yàn)全價(jià)日糧中的理論值（見表2）?？傮w而言，處理4組肉雞日糧中NSP酶制劑缺果膠酶和甘露聚糖酶；處理5組缺甘露聚糖酶；而處理3組肉雞日糧中復(fù)合NSP酶制劑的酶種類齊全，且理論計(jì)算添入試驗(yàn)日糧的單一NSP酶活性高于處理4、5組（見表2）。以上結(jié)果充分證明，當(dāng)前市售商品復(fù)合NSP酶制劑的酶種類和酶活性存在很大差異，顯然這直接影響針對非常規(guī)飼料原料底物NSP抗?fàn)I養(yǎng)因子的降解效果，是實(shí)際生產(chǎn)中不同商品復(fù)合NSP酶制劑使用效果差異的重要原因之一。結(jié)合酶活性的試驗(yàn)測定結(jié)果，本文進(jìn)一步討論復(fù)合NSP酶制劑對肉雞生長性能及腸道消化酶活性的影響。

處理1組(正對照)采食正常日糧肉雞的末體重顯著高于（P≤0.05）添加了占總量9%麥麩、次粉、DDGS等非常規(guī)飼料原料的處理2組(負(fù)對照)的肉雞。這一結(jié)果證明，由于NSP的抗?fàn)I養(yǎng)作用，高比例的非常規(guī)飼料原料降低了肉雞生長性能。進(jìn)一步而言，也證明本試驗(yàn)的正、負(fù)對照組模型設(shè)計(jì)合理。在負(fù)對照組日糧基礎(chǔ)上添加復(fù)合NSP酶制劑的處理3～5組，其中處理3組肉雞的料肉比顯著優(yōu)于（P≤0.05）處理1、2和5組；末體重指標(biāo)，處理3和4組間無顯著差異（P＞0.05），但顯著大于處理2和5組。這與我們測定的處理3組日糧添加復(fù)合NSP酶制劑產(chǎn)品的酶種類全、酶活性高于處理組4和5組結(jié)果一致（見表2）。以上分析提示：在日糧營養(yǎng)水平設(shè)置相同的條件下（見表3），酶種類全、酶活性高的復(fù)合NSP酶制劑可能通過改善肉雞對飼料的消化率，來提高肉雞生長性能。因此，本試驗(yàn)進(jìn)一步分析復(fù)合NSP酶制劑對肉雞小腸消化酶活性的影響。

表5和6結(jié)果顯示，由于日糧添加高比例的非常規(guī)飼料原料（麥麩、次粉、DDGS）含有相對較高的NSP，造成處理2組(負(fù)對照)肉雞十二指腸、空腸及其內(nèi)容物的淀粉酶和蛋白酶活性顯著低于處理1組(正對照)，這說明日糧飼料中高含量的NSP對肉雞腸道消化酶有抑制作用，不利于肉雞對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，雖然日糧營養(yǎng)水平一致，但消化率降低，造成肉雞生長性能下降。本試驗(yàn)結(jié)果與Choct等（1995）報(bào)道一致。處理3組肉雞十二指腸及空腸淀粉酶和蛋白酶活性顯著大于負(fù)對照組，與正對照組相近。這充分證明，添加復(fù)合NSP酶制劑不僅針對性降解日糧中NSP，降低抗?fàn)I養(yǎng)作用，且具有促進(jìn)肉雞消化道酶分泌、提高飼料消化率的作用。此外，處理3組肉雞十二指腸和空腸內(nèi)容物中的蛋白酶活性顯著大于處理4和5組，證明NSP酶制劑促進(jìn)肉雞消化酶分泌的作用具有劑量效應(yīng)。總體而言，由于當(dāng)前非常規(guī)飼料原料添加比例較高，因此酶種類全、酶活性高的復(fù)合NSP酶制劑對降低飼料NSP抗?fàn)I養(yǎng)作用，提高小腸消化酶活性，改善肉雞生長性能，具有更佳的作用效果。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)證明，酶類齊全、酶活性高的復(fù)合NSP酶制劑產(chǎn)品通過提高肉雞小腸消化酶活性，具有更好促進(jìn)肉雞生長性能的效果。因此建議用戶選用復(fù)合NSP酶制劑，不能單純按產(chǎn)品建議添加量使用，有條件最好實(shí)測產(chǎn)品中的酶種類和酶活性。

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