白銀宮血靈膠囊止血、抗炎作用研究

邱宏聰，李 茂，王 麗

廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧 530022

白銀宮血靈膠囊是由白花銀背藤單味藥材組成，具有益氣化瘀、收斂止血之功效，臨床擬用于治療功能性子宮出血。現(xiàn)有試驗(yàn)表明白花銀背藤具有一定的止血[1]、抗炎作用[2]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)白花銀背藤制劑的止血、抗炎作用進(jìn)行研究，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

白銀宮血靈膠囊（批號(hào)：070901，廣西中醫(yī)藥研究院自制）；雌二醇（E2酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，ADL公司）；己烯雌酚注射液（批號(hào)：061102，上海第九制藥廠）；縮宮素注射液（批號(hào)：060915，浙江仙居制藥有限公司）；阿司匹林腸溶片（批號(hào)：071209，武漢遠(yuǎn)大制藥集團(tuán)股份有限公司）。

1.2 動(dòng)物

昆明種小鼠，Wistar大鼠，購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK桂2003-0003。

1.3 儀器

SM-3自動(dòng)化酶免分析儀（北京天石醫(yī)療用品制作所）；ZH-Z離體器官測(cè)量系統(tǒng)（淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 對(duì)正常小鼠血清雌二醇水平的影響[3]選取雌性小鼠50只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組（等體積蒸餾水），烏雞白鳳丸組（3.0 g/kg），白銀宮血靈膠囊高、中、低劑量組（19.0、13.6、8.2g/kg），每組10只。連續(xù)灌胃給藥14 d，每天1次。末次給藥后24 h，將動(dòng)物稱重，摘眼球取血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清雌二醇水平。

1.4.2 對(duì)大鼠離體子宮收縮的影響[3]選取成年未孕雌性大鼠10只，于實(shí)驗(yàn)前72 h皮下注射己烯雌酚0.5 mg/kg，造成人工動(dòng)情期以提高子宮對(duì)藥物的敏感性。猛擊大鼠頭部致昏，取卵巢與子宮分叉處間的中段子宮，剪除周圍組織，沿系膜縱軸剖開子宮角，在克氏液中漂洗干凈。將其平鋪固定在盛有石蠟的培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿中充滿克氏液，并持續(xù)供給95%O2和5%CO2標(biāo)準(zhǔn)氣體。在石蠟盤中，用固定的兩片平行刀片沿平滑肌纖維的方向取寬2 mm的縱行肌條，用大頭針將肌條的兩端固定，以肌條平展為宜，內(nèi)膜面朝上，用眼科彎剪刀剪除內(nèi)膜層，用手術(shù)縫線將肌條扎緊打結(jié)，另一端打結(jié)后再結(jié)一個(gè)直徑約0.5 cm的環(huán)。將肌條分別安置在恒溫平滑肌肌槽中，每個(gè)肌槽中分別盛有20 ml 37℃克氏液。肌條在1 g的前負(fù)荷下溫育，每20分鐘更換一次新鮮的克氏液，待肌條的自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后依次加入生理鹽水、縮宮素、白銀宮血靈膠囊（50、100、150、200 μg/ml），每次更換藥液前要用克氏液反復(fù)沖洗，待子宮收縮基本恢復(fù)到未加藥前水平再加入下一種藥液。白銀宮血靈膠囊給藥采用累計(jì)加量法，由低濃度加到高濃度，藥物終濃度是溶于平滑肌槽20 ml的藥物濃度。計(jì)算給藥前后5 min子宮平滑肌條收縮波的平均振幅和平均持續(xù)時(shí)間以及5 min內(nèi)收縮波頻率。

1.4.3 對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響[4]選取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，即空白對(duì)照組（等體積蒸餾水），阿司匹林組（0.2 g/kg），白銀宮血靈膠囊高、中、低劑量組（同1.4.1）。每日灌胃給藥，連續(xù)給藥7d，每天1次。于末次給藥1 h后，用微量注射器取0.05 ml 2%巴豆油涂于小鼠右耳，致炎后處死。立即用口徑為6 mm的打孔器，沿小鼠左右耳廓相同部位打孔取材，然后分別稱重，以兩耳片重量的差值作為腫脹程度指標(biāo)，并計(jì)算抑制率。

1.4.4 大鼠棉球肉芽腫試驗(yàn)[4]選取小鼠50只，雌雄各半，用乙醚淺麻醉后在腹部剪毛，消毒，切開1 cm長(zhǎng)的口子，游離皮膚至左右腋下，并分別植入一個(gè)無(wú)菌棉球（20 mg），隨即縫合皮膚。術(shù)后隨機(jī)分為5組，每組10只，即空白對(duì)照組（等體積蒸餾水），阿司匹林組（0.2 g/kg），白銀宮血靈膠囊高、中、低劑量組（同1.4.1）。于手術(shù)開始當(dāng)日開始灌胃給藥，連續(xù)給藥7 d，每天1次。于末次給藥1 h后，將大鼠處死，剝離并取出棉球肉芽組織，在60℃烘箱內(nèi)干燥4 h稱重，計(jì)算棉球肉芽組織質(zhì)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 11.5版軟件進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)正常小鼠血清雌二醇水平的影響

結(jié)果表明本品的高劑量組能顯著增加正常小鼠血清雌二醇水平，中、低劑量組作用不明顯，見(jiàn)表1。

表1 對(duì)正常小鼠血清雌二醇水平的影響（x±s，n=10）

2.2 對(duì)大鼠離體子宮收縮的影響

結(jié)果表明本品終濃度為100、150、200 μg/ml時(shí)可使收縮波的頻率加快，振幅增大，對(duì)持續(xù)時(shí)間影響不明顯，見(jiàn)表2。

2.3 對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響

結(jié)果表明本品能顯著抑制小鼠耳廓腫脹，見(jiàn)表3。

2.4 大鼠棉球肉芽腫試驗(yàn)

結(jié)果表明本品高劑量組能較明顯地抑制大鼠棉球肉芽組織增生，中、低劑量組作用不明顯，見(jiàn)表4。

3 討論

功能性子宮出血屬中醫(yī)崩漏范疇，為婦科急癥之一?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為功血發(fā)病機(jī)制與下丘腦-垂體-卵巢軸調(diào)節(jié)機(jī)制失調(diào)、子宮內(nèi)膜凝血和纖溶系統(tǒng)異常以及血栓素和前列環(huán)素分泌失調(diào)等有關(guān)[5-7]，其出血的機(jī)制為“雌激素撤退性出血”或“雌激素突破性出血”[8]，目前臨床廣泛使用性激素止血，通過(guò)性激素作用，使內(nèi)膜生長(zhǎng)修復(fù)或使其全部脫落后修復(fù)而止血。

表2 對(duì)大鼠離體子宮收縮的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果（x±s，n=10）

表3 對(duì)小鼠耳廓腫脹的影響（n=10）

表4 對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響(x±s，n=10)

本實(shí)驗(yàn)研究表明：本品19.0 g/kg濃度時(shí)，能顯著提高血清雌二醇水平，提示本品可能起到調(diào)節(jié)體內(nèi)雌激素分泌水平，產(chǎn)生止血作用；100、150、200 μg/ml濃度時(shí)可以明顯增強(qiáng)大鼠離體子宮平滑肌的收縮，提示本品能夠通過(guò)增強(qiáng)子宮收縮作用達(dá)到止血的目的；各劑量均能抑制小鼠耳廓腫脹，高劑量組還可抑制大鼠棉球肉芽腫，提示本品對(duì)炎癥有很好的抑制作用。

綜上所述，白銀宮血靈膠囊具有一定的止血、抗炎作用，可為臨床治療伴有炎癥的功能性子宮出血提供參考依據(jù)。其主要活性成分和作用機(jī)制，還有待于進(jìn)一步研究。

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