糖脈寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陜西省人民醫(yī)院胸外科 吳 昱 王 芳 劉玉林 劉子冬(西安710068)

糖脈寧膠囊是由生地黃、桂枝、牡丹皮、人參、山茱萸等11味中藥組成，有補(bǔ)腎助陽(yáng)，健脾利濕的作用。主要治療糖尿病、糖尿病引起的并發(fā)癥，如:高血壓、高血脂、排尿功能異常、四肢麻木、視神經(jīng)功能減退等。為了確保糖脈寧膠囊的內(nèi)在質(zhì)量，筆者對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。

1 儀器與試藥

美國(guó) waters高效液相色譜儀，SK5200LH超聲儀，METTLER分析電子天平，硅膠G(青島海洋化工廠)。馬錢苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):117640－200604);桂枝對(duì)照藥材 (中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):121191－200402);丹皮酚對(duì)照藥材 (中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):708－9003);烏頭堿對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):110720－200410);人參皂甙Rg1對(duì)照藥材 (中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):110703－20032)，水為純化水，其余試劑為分析純。糖脈寧膠囊 (第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥品制劑科，批號(hào):060514，070825，081119)。

2 薄層色譜鑒別

2.1 生地黃、澤瀉的顯微鑒別 取本品粉末2 g，輕輕研細(xì)，置顯微鏡下觀察，可見薄壁細(xì)胞類圓形，內(nèi)含有橙黃色或橙紅色油滴狀物，具緣紋孔導(dǎo)管及網(wǎng)狀導(dǎo)管(生地黃)?？梢娔舅?xì)胞黃棕色，類圓形或多角形，壁薄，草酸鈣結(jié)晶多見，可檢出淀粉粒 (澤瀉)，符合藥典。［1－2］

2.2 桂枝 取本品粉末10 g，加乙醇30 m L，密塞，時(shí)時(shí)振搖，放置30 min，濾過(guò)，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。取缺桂枝藥材的空白粉末10 g，同法制成空白對(duì)照溶液。另取桂枝對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法 (附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各8 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以石油醚 (60～90℃)－乙酸乙酯 (17︰3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 (365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性無(wú)此斑點(diǎn)。

2.3 牡丹皮 取本品粉末10 g，加乙醚50 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，蒸干。用1 mL丙酮溶解，作為供試品溶液。取缺牡丹皮藥材空白粉末10 g，同法制成空白藥材對(duì)照溶液。另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成1 mL含5 mg的對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法 (附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述供試品、空白藥材溶液各10μL，對(duì)照品溶液3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯 (3︰1)為展開劑，展開，取出，晾干，再噴以5%三氯化鐵溶液，加熱顯色。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性無(wú)此斑點(diǎn)。

2.4 人參［3］取本品粉末10 g，加氯仿50 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，藥渣揮至無(wú)味，加水1mL攪拌濕潤(rùn)，加水飽和正丁醇30mL，超聲處理30min，取上清，加3倍量氨試劑，搖勻，放置分層，取上清蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。取缺人參藥材空白粉末10 g，同法制成空白藥材對(duì)照溶液。另取人參皂甙Rg1，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液。照薄層色譜法 (附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述供試品、空白藥材溶液各8μL，對(duì)照品溶液3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－乙酸乙酯－甲醇－水 (15︰40︰22︰10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱顯色。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同的斑點(diǎn)。陰性無(wú)此斑點(diǎn)。

2.5 烏頭堿限量檢測(cè) 取藥粉20 g，置具塞錐形瓶中，加乙醚150 mL，振搖10 min，加氨試液10 mL，振搖30 min，放置1～2 h，分取醚層，蒸干，加無(wú)水乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺附子的對(duì)照藥粉，同法制成空白對(duì)照溶液。另取烏頭堿對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液6μL、對(duì)照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G板上，以正己烷 －乙酸乙酯(1︰1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)的斑點(diǎn)應(yīng)小于對(duì)照品的斑點(diǎn)或不出現(xiàn)斑點(diǎn)。

3 馬錢苷的含量測(cè)定

3.1 色譜條件 采用色譜柱為Agilent ZE－C18柱 (4.6 mm ×250 mm)。流動(dòng)相:乙腈－水 (20︰80);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm;柱溫:室溫。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取馬錢苷對(duì)照品10 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含馬錢苷20μg)。

3.2.2 供試品溶液的制備:取本品20粒，研勻，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備: 取除山茱萸外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備不含山茱萸的陰性樣品。按2.3項(xiàng)下的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

3.3 干擾試驗(yàn) 在上述色譜條件下，分別取馬錢苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照液各5μL，注入色譜儀。樣品色譜圖中，在與馬錢苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有一相同保留時(shí)間的色譜峰。而陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間處無(wú)干擾。

3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液1、2、5、10、15、20μL，分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，馬錢苷濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得回歸方程:y=458 953x–35 432，R=0.999 4，在0.02～0.40μg范圍內(nèi)與峰面積呈好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述濃度的對(duì)照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，以馬錢苷的峰面積積分值計(jì)算，RSD為0.94%。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào) (060514)樣品5份，每份約1.0 g，照供試品制備方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，馬錢苷平均含量為30.12μg/粒，RSD為1.12%。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào) (060514)樣品供試液，分別于2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，馬錢苷平均含量為30.52 μg/粒，RSD為0.95%。

3.8 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取已知馬錢苷含量樣品約0.5 g(批號(hào):070825)6份，分別加入一定量的馬錢苷對(duì)照品，按“3.2.2”方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果 (n=6)

3.9 樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μL，注入高效液相色譜中測(cè)定，3批樣品060514、070825、081119批號(hào)的測(cè)定含量分別是 30.52、30.49、30.98 μg/粒。

4 討論

4.1 《中國(guó)藥典》［1］中應(yīng)用堿性氧化鋁板對(duì)附子中的烏頭堿進(jìn)行限量檢測(cè)，進(jìn)過(guò)試驗(yàn)證明應(yīng)用堿性氧化鋁板存在鋪板不易、點(diǎn)樣量不宜控制、顯色困難等缺點(diǎn)，本文中應(yīng)用硅膠G板，可以準(zhǔn)確、方便、快速的檢測(cè)出的烏頭堿，顯色清晰，結(jié)果易于判斷。

4.2 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道 多采用薄層色譜法對(duì)成方制劑中的烏頭堿進(jìn)行限量檢查，［4－6］本文應(yīng)用薄層色譜法對(duì)烏頭堿進(jìn)行限量檢測(cè)，分別考察了三種顯色劑:碘化鉍鉀試液，改良碘化鉍鉀試液和碘化鉍鉀－碘化鉀碘等容混合試液。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以碘化鉍鉀試液顯色，背景色淺，烏頭堿斑點(diǎn)易于判斷，且顯色穩(wěn)定;而以其余2種顯色劑顯色，背景色較深，不利于烏頭堿斑點(diǎn)的檢出。

4.3 本文分別應(yīng)用流動(dòng)相乙腈－水 (15︰85)，乙腈－水 (20︰80)，乙腈－水 (25︰75)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用乙腈－水 (20︰80)可達(dá)到分離最好效果，分離度可達(dá)6.5，理論塔板數(shù)可達(dá)4 000。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 (一部) ［S］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.82－168

［2］劉桂珍，劉紀(jì)青，廖朝峰，等.完善滋腎降糖丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 ［J］．河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，26(1):33－34

［3］安軍永，王超，高淑華.定風(fēng)止痛片中人參皂苷Rb1的含量測(cè)定 ［J］．河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2009，24(3):37

［4］周衛(wèi)，陳黎.復(fù)方軟骨素片中烏頭堿限量檢查方法的探討［J］.中國(guó)藥業(yè)，2004，13(5):42

［5］胡學(xué)軍，袁小紅，鐘燕珠，等．益氣回陽(yáng)注射液工藝改進(jìn)及雙酯型生物堿的限量檢測(cè) ［J］.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，18(4):350

［6］朱舟，朱禎祿．復(fù)方三生口服液烏頭堿的限量檢查［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004，13(11):1 438