益氣健脾方對(duì)脾虛模型小鼠的影響*

河北省石家莊市第四醫(yī)院 賀 克 劉 姣 李 清(石家莊050011)

益氣健脾方是依據(jù)中醫(yī)藥理論組方，由山藥、薏苡仁、蓮子、黃精、百合、龍眼肉、大棗等藥組方而成。其中，山藥功偏補(bǔ)腎生精，益肺腎之陰;薏苡仁能健脾，滲濕，止瀉;蓮子養(yǎng)心，益腎，補(bǔ)脾;黃精可補(bǔ)中益氣、潤(rùn)肺、強(qiáng)筋骨;百合可養(yǎng)陰潤(rùn)燥;龍眼肉能夠滋陰補(bǔ)腎、補(bǔ)中益氣、潤(rùn)肺、養(yǎng)血安神。故益氣健脾方具有益氣健脾、滋陰養(yǎng)血功效，具有陰陽(yáng)雙補(bǔ)的作用。本研究主要通過(guò)觀察益氣健脾方對(duì)大黃致脾虛模型小鼠的影響，探討其健脾功效，現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料

1.1 動(dòng)物 健康雄性KM小鼠，清潔級(jí)，體質(zhì)量18～23 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證為 SCXK(冀)2008－1－003，動(dòng)物飼料亦由該中心提供。

1.2 藥物與試劑 益氣健脾方由山藥、薏苡仁、蓮子、百合、龍眼肉、黃精、大棗等組成，實(shí)驗(yàn)時(shí)在河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室水提濃縮。補(bǔ)中益氣丸，馬鞍山神鹿科瑞藥業(yè)。生大黃，水提濃縮至1 g生藥/mL。

1.3 主要儀器 MB10Kpw型電子天平 (上海?？惦娮觾x器廠)，JA2003 SHP07003型精密電子天平 (上海恒平科學(xué)儀器有限公司)，BC－2300型全自動(dòng)三分群血細(xì)胞分析儀 (深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

2 方法

2.1 分組與造模 100只健康雄性KM小鼠，體質(zhì)量18～23 g，自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)于18℃ ～22℃明暗各12 h的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，正常喂養(yǎng)3天后，隨機(jī)分成5組，每組20只，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、益氣健脾方低劑量組、高劑量組及陽(yáng)性 (補(bǔ)中益氣丸)對(duì)照組。動(dòng)物造模參考文獻(xiàn)［1］，除空白組灌服蒸餾水0.2 mL/10 g體質(zhì)量外，其余4組小鼠均灌服生大黃煎液0.2 mL/10 g體質(zhì)量，每日1次，連續(xù)14日。

2.2 給藥方法 于第8天起，益氣健脾方高劑量組、低劑量組小鼠分別按40 g生藥/kg體質(zhì)量、20 g生藥/kg體質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)灌服藥物，陽(yáng)性對(duì)照組灌服補(bǔ)中益氣丸10丸/kg體質(zhì)量，正常組和模型組灌服等容量蒸餾水，連續(xù)7天。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

2.3.1 小鼠的體質(zhì)量及外觀形態(tài)的變化:自造模開(kāi)始每天觀察小鼠的精神、食欲、糞便、體質(zhì)量變化情況。記錄造模前、給藥后小鼠體質(zhì)量。

2.3.2 外周血細(xì)胞指標(biāo):在每組隨機(jī)抽取10只小鼠，末次給藥前禁食18 h，正常飲水。末次給藥1 h后，摘除眼球取血，通過(guò)血液分析儀檢測(cè)各組小鼠紅細(xì)胞 (RBC)、白細(xì)胞 (WBC)、血紅蛋白 (HGB)等血液指標(biāo)，并記錄數(shù)據(jù)。

2.3.3 脾指數(shù)與胸腺指數(shù):取血后，將小鼠頸椎脫臼處死，剖開(kāi)腹腔，取胸腺和脾臟，分別稱量胸腺和脾臟的質(zhì)量，記錄數(shù)據(jù)，并按下式計(jì)算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。脾虛小鼠的臟器指數(shù)=免疫器官鮮質(zhì)量 (mg)/小鼠體質(zhì)量 (g)。

2.3.4 小腸推進(jìn)率:每組剩余10只小鼠，正常飲水，末次給藥前禁食24 h，末次給藥后1 h，各組均灌胃0.5 mL半固體營(yíng)養(yǎng)糊。30min后，將小鼠頸椎脫頸處死，打開(kāi)腹腔，分離腸系膜，剪取上端至幽門(mén)，下端至回盲部的腸管。取出的小腸平鋪于米尺上測(cè)量從幽門(mén)至炭末行進(jìn)最遠(yuǎn)處為推進(jìn)長(zhǎng)度，幽門(mén)至回盲瓣為全長(zhǎng)，按下式計(jì)算推進(jìn)百分率。小腸推進(jìn)率 (%)=炭末前端與幽門(mén)的距離/小腸全長(zhǎng)×100%。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)脾虛小鼠形態(tài)學(xué)的影響 以大黃水煎液灌服形成脾虛模型后，造模組體質(zhì)量均低于空白對(duì)照組。給藥后，模型組小鼠體質(zhì)量低于補(bǔ)中益氣丸對(duì)照組 (P＜0.05)，明顯低于高劑量組 (P＜0.01)，且模型組小鼠毛色無(wú)光澤，活動(dòng)情況均不如補(bǔ)中益氣丸對(duì)照組和給藥組，大便不 成形。詳見(jiàn)表1。

表1 益氣健脾方對(duì)脾虛小鼠外觀形態(tài)及體質(zhì)量的影響

3.2 對(duì)脾虛小鼠血細(xì)胞數(shù)的影響 與模型組相比，益氣健脾方高劑量組、低劑量組小鼠WBC、HGB、RBC均有升高趨勢(shì)，其中，益氣健脾方高劑量組HGB顯著升高 (P＜0.01)，RBC升高 (P＜0.05)。說(shuō)明益氣健脾方有改善外周血指標(biāo)的作用。詳見(jiàn)表2。

3.3 對(duì)脾虛小鼠免疫器官的影響 益氣健脾方高劑量組小鼠的脾質(zhì)量高于模型組 (P＜0.05)，胸腺質(zhì)量及胸腺指數(shù)顯著高于模型組 (P＜0.01)，低劑量組小鼠胸腺質(zhì)量及胸腺指數(shù)高于模型組 (P＜0.05)。說(shuō)明益氣健脾方有增強(qiáng)免疫器官質(zhì)量，增強(qiáng)免疫功能的作用。詳見(jiàn)表3。

3.4 對(duì)脾虛小鼠小腸推進(jìn)率的影響 在小腸推進(jìn)率實(shí)驗(yàn)中，益氣健脾方高劑量組小腸推進(jìn)率低于模型組 (P＜0.05)，說(shuō)明益氣健脾方能抑制脾虛小鼠小腸運(yùn)動(dòng)。見(jiàn)表4。

表2 益氣健脾方對(duì)脾虛小鼠血液指標(biāo)的影響

表3 益氣健脾方對(duì)脾虛小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響

表4 益氣健脾方對(duì)脾虛小鼠小腸推進(jìn)率的影響

4 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“脾為后天之本”，脾胃為氣血生化之源，臟腑經(jīng)絡(luò)之根，為人體氣機(jī)升降之樞紐，又是人體抗御病邪的重要防衛(wèi)機(jī)構(gòu)。胃主受納，脾主運(yùn)化，主肌肉。飲食入胃，脾為其行精微，上歸于肺，肺朝百脈，以滋養(yǎng)周身骨骸、肌肉，故有“內(nèi)傷脾胃，百病由生”之說(shuō)。若脾氣虛、脾失健運(yùn)，則出現(xiàn)一系列的功能障礙，可造成食欲不振、納呆、消瘦等。

本實(shí)驗(yàn)采取大黃苦寒瀉下法復(fù)制小鼠脾虛模型。中醫(yī)藥理論認(rèn)為大黃歸脾、胃、大腸經(jīng)，性苦寒，具有較強(qiáng)瀉下作用，久服可使肌體元?dú)鈸p傷、脾胃功能減弱，從而影響水谷精微的吸收，則氣血生化無(wú)源，肌肉瘦削，神疲乏力。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠灌服大黃水煎液造成脾虛動(dòng)物模型。經(jīng)大黃灌服后的小鼠可出現(xiàn)便溏、消瘦、拱背、納呆、少動(dòng)、四肢無(wú)力、毛發(fā)枯燥、畏寒、體重減輕等表現(xiàn)，與脾虛證臨床表現(xiàn)基本吻合。經(jīng)檢測(cè)模型組小鼠外周血細(xì)胞數(shù)、胸腺和脾臟質(zhì)量及指數(shù)低于空白對(duì)照組，小腸推進(jìn)率高于空白對(duì)照組，經(jīng)補(bǔ)中益氣丸治療有效，說(shuō)明造模成功。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用益氣健脾方治療脾虛模型小鼠，通過(guò)發(fā)揮其溫養(yǎng)中氣，平補(bǔ)陰陽(yáng)，調(diào)和營(yíng)衛(wèi)之功效使小鼠體質(zhì)逐漸恢復(fù)，脾虛癥狀得到改善:大便成形，便溏、脫肛情況明顯改善;活動(dòng)增多，反應(yīng)敏捷，毛發(fā)基本恢復(fù)正常光澤，很少出現(xiàn)成群蜷縮。與模型組相較，益氣健脾方高、低劑量組能夠顯著升高血紅蛋白量、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)值，增加免疫器官胸腺、脾臟質(zhì)量，抑制小鼠小腸的過(guò)快運(yùn)動(dòng)。提示了益氣健脾方能夠提高肌體的免疫力，增強(qiáng)肌體對(duì)有害刺激的抵抗力，從而減輕肌體的損傷，此為本方治療脾虛證的機(jī)制之一。關(guān)于益氣健脾方更為廣泛的功效以及作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

［1］徐珊，聶紅明，朱君華，等.樂(lè)胃飲對(duì)脾虛小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2004，7(11):219－221

［2］金若敏，黃莉，周婉，等.中藥逍遙片改善正?；蚱⑻撔∈竽c運(yùn)動(dòng)相關(guān)功能 ［J］.中國(guó)臨床康復(fù)，2003，7(24):3 316－3 317

［3］錢(qián)會(huì)南，沈麗波，胡雪琴.中醫(yī)脾虛動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究思考 ［J］.中國(guó)藥物與臨床，2003，3(3):183－184

［4］金敬善.脾虛證動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合脾胃雜志，1999，7(2):65