克銀Ⅰ號(hào)方對(duì)尋常型銀屑病患者表皮及真皮中Bcl-X表達(dá)的影響※

馬學(xué)偉 陳 虎 張培紅 云雅卿 王家穎

(河北省中醫(yī)藥研究院皮膚科，河北 石家莊 050031)

克銀Ⅰ號(hào)方對(duì)尋常型銀屑病患者表皮及真皮中Bcl-X表達(dá)的影響※

馬學(xué)偉 陳 虎 張培紅1云雅卿2王家穎3

(河北省中醫(yī)藥研究院皮膚科，河北 石家莊 050031)

目的 觀察克銀Ⅰ號(hào)方對(duì)尋常型銀屑病患者表皮及真皮中Bcl-X表達(dá)的影響。方法 將40例尋常型銀屑病患者隨機(jī)分為2組，治療組20例應(yīng)用克銀Ⅰ號(hào)方治療，對(duì)照組20例應(yīng)用阿維A膠囊治療。2組均30 d為1個(gè)療程，治療3個(gè)療程后進(jìn)行療效評(píng)定。并選取10例正常皮膚作為正常組。結(jié)果 2組總有效率均90.0%，比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。正常組表皮、真皮少量淋巴細(xì)胞及血管內(nèi)皮盡顯弱陽(yáng)性。治療組、對(duì)照組治療前表皮各層、真皮炎癥細(xì)胞及血管內(nèi)皮Bcl-X的表達(dá)均明顯高于正常組(P＜0.01)。2組治療后Bcl-X的表達(dá)除基底層變化不大外，其余均較本組治療前降低(P＜0.01)。治療后表皮角質(zhì)層、真皮炎癥細(xì)胞及血管內(nèi)皮Bcl-X的表達(dá)已基本恢復(fù)正常，顆粒層、棘層、基底層仍高于正常(P＜0.01)。2組治療后比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 克銀Ⅰ號(hào)方可能通過(guò)改善Bcl-X在銀屑病表皮及真皮中的表達(dá)發(fā)揮治療作用，且無(wú)明顯不良反應(yīng)。

銀屑病;中藥療法;表皮;真皮;基因，Bcl-2;基因表達(dá);免疫組織化學(xué)

※項(xiàng)目來(lái)源:河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):09276418D-22)

1 河北省中醫(yī)藥研究院婦科，河北 石家莊 050031

2 河北省高陽(yáng)縣中醫(yī)院內(nèi)科，河北 高陽(yáng) 071500

3 河北省高陽(yáng)縣醫(yī)院兒科，河北 高陽(yáng) 071500

銀屑病是皮膚科常見病、疑難病，是一種多基因控制的良性增生性炎癥性疾病。目前已發(fā)現(xiàn)其皮損的角質(zhì)形成細(xì)胞中有某些凋亡相關(guān)分子的異常表達(dá)。2006-01—2011-01，我們應(yīng)用克銀Ⅰ號(hào)方治療尋常型銀屑病20例，并與阿維A膠囊治療20例對(duì)照觀察，并檢測(cè)銀屑病患者皮損部位表皮及真皮中Bcl-X的表達(dá)，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 全部40例均為河北省中醫(yī)藥研究院皮膚科門診患者，隨機(jī)分為2組。治療組20例，男11例，女9例;年齡15～65歲，平均36.3歲;病程3個(gè)月 ～27年，平均5.8年。對(duì)照組20例，男12例，女8例;年齡16～61歲，平均33.8歲;病程4個(gè)月～24年，平均6.3年。同時(shí)選取10例手術(shù)室正常皮膚作為正常組。標(biāo)本用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋并連續(xù)切片。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《臨床皮膚病學(xué)》［1］中尋常型銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。皮膚損害以紅色炎性丘疹、斑丘疹及大小不等的斑片為主，上覆多層銀白色鱗屑，刮除鱗屑可見一層光亮的薄膜，薄膜下可有點(diǎn)狀出血。皮損形式可有點(diǎn)滴狀、錢幣狀、地圖狀、混合狀等多種類型，但境界明顯。皮損可發(fā)生在身體表面各處，發(fā)生頭皮處者，毛發(fā)呈束狀;發(fā)于甲板(指、趾)者，可有點(diǎn)狀凹坑呈頂針狀或甲板不平整、變黃增厚?？砂橛胁煌潭鹊酿W。

1.2.2 中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》(試行)［2］中風(fēng)熱型白疕的診斷標(biāo)準(zhǔn)。主癥:新皮疹不斷出現(xiàn)，以丘疹、斑丘疹為主，皮疹基底皮膚顏色鮮紅，刮去鱗屑見點(diǎn)狀出血，可有同形反應(yīng)。次癥:初發(fā)或復(fù)發(fā)，可有不同程度疹癢，心煩口渴或口干，便秘尿黃，舌質(zhì)紅，苔黃，脈數(shù)。具備主癥及次癥2項(xiàng)以上者，可診斷為該證候。

1.2.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 所有病例既符合西醫(yī)尋常性銀屑病診斷，又符合中醫(yī)風(fēng)熱型白疕診斷;常規(guī)檢查除外其他器質(zhì)性病變;入院前3個(gè)月內(nèi)未使用皮質(zhì)類固醇、免疫抑制劑、復(fù)方氨肽素片和維A酸者。

1.2.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并有嚴(yán)重心、肝及腎等內(nèi)臟疾病患者;妊娠期、哺乳期婦女;不配合檢測(cè)與定期復(fù)診而影響療效和安全性判斷者。

1.2.5 剔除標(biāo)準(zhǔn) 由于主觀或客觀原因，未按規(guī)定用藥，無(wú)法判定療效，資料不全影響療效判斷者;納入后發(fā)現(xiàn)不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 治療方法

1.3.1 治療組 采用克銀Ⅰ號(hào)方。藥物組成:紫草15 g，赤芍藥 12 g，生地黃15 g，紅花12 g，當(dāng)歸12 g，全蝎6 g，水牛角粉20 g，蜈蚣2條，大血藤30 g，黃芩12 g，連翹12 g。日1劑，水煎2次取汁300 mL，分早晚2次服。

1.3.2 對(duì)照組 予阿維A膠囊(重慶華邦制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20010126)，起初每日30 mg，頓服(與主餐一起)。3周后，每次20 mg，每日3次服。

1.3.3 療程 2組均30 d為1個(gè)療程，治療3個(gè)療程后進(jìn)行療效評(píng)定，治療期間停用其他一切藥物。

1.4 觀察指標(biāo)及方法 應(yīng)用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法(SP)法，切片常規(guī)脫蠟水化，加3%過(guò)氧化氫(H2O2)室溫處理10 min，在枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)中微波加熱10 min進(jìn)行抗原修復(fù)?；颊哂盟幒竺看坞S訪或就診時(shí)，詢問(wèn)并記錄患者可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)及程度。

1.5 療效標(biāo)準(zhǔn) 皮損情況采用國(guó)際通用的銀屑病面積和嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI)評(píng)分法［1］。按紅斑、浸潤(rùn)、鱗屑及皮損面積進(jìn)行PASI評(píng)分。治愈:PASI較治療前下降90%以上;顯效:PASI下降60% ～90%;無(wú)效:PASI下降不足30%或無(wú)變化［1］。

1.6 實(shí)驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn) 以胞質(zhì)或胞膜有棕黃色顆粒狀沉積為陽(yáng)性。先按陽(yáng)性細(xì)胞比例將無(wú)、1% ～25%、26% ～50%、51% ～75%、76% ～100%分別記為0～4分;再按染色強(qiáng)度將無(wú)、弱、中、強(qiáng)分別記為0 ～3 分［1］。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料率的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 2組療效比較 見表1。

表1 2組療效比較 例

由表1可見，2組總有效率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05)。

2.2 2組治療前后表皮及真皮中Bcl-X表達(dá) 見表2。

表2 2組治療前后表皮及真皮中Bcl-X表達(dá)

由表2可見，正常組表皮、真皮少量淋巴細(xì)胞及血管內(nèi)皮盡顯弱陽(yáng)性。治療組、對(duì)照組治療前表皮各層、真皮炎癥細(xì)胞及血管內(nèi)皮Bcl-X的表達(dá)均明顯高于正常組(P＜0.01)。2組治療后Bcl-X的表達(dá)除基底層變化不大外，其余均較本組治療前降低(P＜0.01)。治療后表皮角質(zhì)層、真皮炎癥細(xì)胞及血管內(nèi)皮Bcl-X表達(dá)基本恢復(fù)正常，顆粒層、棘層、基底層仍高于正常(P＜0.01)。2組治療后比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 2組不良反應(yīng)比較 對(duì)照組在用藥過(guò)程中有2例出現(xiàn)口干、眼干，3例出現(xiàn)手足明顯脫屑，2例出現(xiàn)惡心、腹痛。治療組未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。在2年內(nèi)有生育愿望的女性禁用阿維A膠囊，克銀Ⅰ號(hào)方無(wú)此副作用。

3 討論

銀屑病是一種常見的炎癥增生性皮膚病，其發(fā)病因素復(fù)雜，近年來(lái)認(rèn)為其發(fā)病很大程度上取決于遺傳背景。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞在一定條件下，通過(guò)啟動(dòng)其自身內(nèi)部機(jī)制，引起內(nèi)源性DNA內(nèi)切酶的激活而發(fā)生細(xì)胞的自然死亡。凋亡作為一種對(duì)宿主本身無(wú)害的程序性細(xì)胞死亡，是按照一定的固有模式對(duì)體內(nèi)損傷的、死亡的以及多余的各種細(xì)胞進(jìn)行有效地清除［3］。Bcl-X是新近發(fā)現(xiàn)的Bcl-2家族的基因，文獻(xiàn)報(bào)道Bcl-X具有2種表達(dá)形式Bcl-xL和Bcl-xS，Bcl-xL為重要的凋亡抑制基因，是比較重要的癌基因，在細(xì)胞凋亡過(guò)程中有著重要影響;而Bcl-xS為通過(guò)抑制Bcl-2而發(fā)揮作用的重要的促凋亡基因［4］。有研究者采用免疫組化和流式細(xì)胞技術(shù)做了更深入的研究，發(fā)現(xiàn)角朊細(xì)胞中Bcl-2與Bcl-X表達(dá)不一致，銀屑病皮損中的角朊細(xì)胞無(wú)Bcl-2，卻有很高的Bcl-X。由此得出結(jié)論:銀屑病中Bcl-X的過(guò)度表達(dá)可能阻斷了角朊細(xì)胞的最終分化與凋亡，使之獲得永生性，有特殊的病理生理意義［3］，銀屑病中Bcl-X的過(guò)度表達(dá)改變了角朊細(xì)胞的正常分化，引起過(guò)度增生，可解釋病理學(xué)上的棘層增厚、角化異常表現(xiàn)。茅曉紅［5］研究發(fā)現(xiàn)銀屑病表皮存在Bcl-X的過(guò)度表達(dá)，Bcl-2表達(dá)與正常相似，而且皮損真皮的炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞Bcl-X表達(dá)增多，治療后恢復(fù)正常。這與我們的研究結(jié)果一致。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，銀屑病的發(fā)生多與內(nèi)有伏熱、瘀毒內(nèi)蘊(yùn)，血虛受風(fēng)、寒濕阻滯有關(guān)，我們臨床所觀察的尋常型銀屑病40例患者為風(fēng)熱型，風(fēng)熱侵淫，毒蘊(yùn)濁停，阻于肌膚，肌膚失養(yǎng)，故治宜解毒化濁，涼血搜風(fēng)通絡(luò)。克銀Ⅰ號(hào)方中紫草、大血藤清熱解毒涼血為君藥;生地黃、赤芍藥、水牛角粉清熱涼血為臣藥;配伍當(dāng)歸養(yǎng)血通絡(luò)，全蝎、蜈蚣搜風(fēng)通絡(luò)，紅花活血通絡(luò)為佐藥;連翹清熱散結(jié)為使藥。諸藥配伍，使熱毒能清，毒濁能解，經(jīng)脈通暢，血行風(fēng)自滅，進(jìn)而達(dá)到治療目的。我們應(yīng)用克銀Ⅰ號(hào)方治療尋常型銀屑病發(fā)現(xiàn)，治療前皮損表皮各層、真皮炎癥細(xì)胞及血管內(nèi)皮的Bcl-X表達(dá)均明顯高于正常。2組治療后Bcl-X除基底層變化不大外，其余比治療前均有降低，表皮角質(zhì)層、真皮炎癥細(xì)胞及血管內(nèi)皮Bcl-X已基本恢復(fù)正常，顆粒層、棘層、基底層仍顯著高于正常。說(shuō)明克銀Ⅰ號(hào)方與阿維A膠囊作用相當(dāng)。另外，國(guó)外文獻(xiàn)認(rèn)為，表皮及血管內(nèi)皮Bcl-X水平的變化早在非皮損中就已發(fā)生，經(jīng)治療不能完全恢復(fù)正常，提示銀屑病的發(fā)生可能受基因調(diào)控，并且是皮損復(fù)發(fā)的基礎(chǔ)［6］。應(yīng)對(duì)銀屑病這種高復(fù)發(fā)的疾病，克銀Ⅰ號(hào)方有效且無(wú)明顯不良反應(yīng)，將是銀屑病患者臨床用藥的良好選擇。

［1］趙辨.臨床皮膚病學(xué)［M］.3版.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001:762-764.

［2］鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002:299.

［3］游浩，張端蓮，陜聲國(guó).Bcl-Xl基因在血管瘤組織中表達(dá)的研究［J］.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2006，19(6):586-588.

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Effects of KeyinⅠRecipe on the immunohistochemical study of epidermal and dermal expression of Bcl-X in psoriasis

MA Xuewei*，CHEN Hu，ZHANG Peihong，et al.*Department of Dermatology，Hebei Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine，Hebei，Shijiazhuang050031

ObjectiveTo observe the effect of KeyinⅠRecipe on epidermal and dermal expression of Bcl-X in psoriasis.Methods40 patients with psoriasis were randomly divided into two groups.20 psoriasis patients in treatment group were treat by KeyinⅠRecipe，and 20 psoriasis patients in control group were treat by acitretin capsules.The therapeutic course was 30 days in two groups.The clinical effect was evaluated after three courses.The expressions of Bcl-X were detected by immunohistochemical technique(SP)in the lesional and psoriatic skin.ResultsThere was no difference between two groups on the total effective rate(P＞0.05).Expressions of Bcl-X in all layers of epidermis，inflammatory cells and vascular endothelia in dermis were higher than those in normal control group(P＜0.01).After the treatment，the expression of Bcl-X in all layers were significantly decreased as compared with those before treatment except in basal layer(P＜0.01).The expression of Bcl-X in cuticle of epidermis，inflammatory cells and vascular endothelia in dermis were turn to normal level，and the expression of Bcl-X in stratum granulosum and stratum spinosum in the lesional skin were still over-expression(P＜0.01).ConclusionKeyinⅠRecipe is effective in adjusting the expression of Bcl-X in epidermis and dermis and no significant adverse reaction.

Psoriasis;Therapy of Chinese herb;epidermis;dermis;Bcl-X;Gene expression;Immunohistochemistry

R392.31;R394.2;R758.630.22

A

1002-2619(2011)12-1771-03

馬學(xué)偉(1968—)，女，副主任醫(yī)師，學(xué)士。從事中西醫(yī)結(jié)合治療皮膚病臨床工作。

2011-11-02)