不同炮制方法對遠(yuǎn)志藥效學(xué)的比較研究

王光志，陳林，萬德光，劉友平，裴瑾

（成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 610075）

遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia Willd.或卵葉遠(yuǎn)志P.sibirica L.的干燥根，系常用中藥，具有安神益智、祛痰消腫的功效。臨床常用其炮制品。遠(yuǎn)志的炮制方法較多，經(jīng)考證，有炒、甘草煮、姜汁炒、酒蒸、米泔水制、甘草水和黑豆煮、豬膽汁煮、炙、炒炭等［1］，因應(yīng)用目的不同具體的炮制方法有異?！吨袊幍洹?010年版（一部）收有生遠(yuǎn)志和制遠(yuǎn)志［2］?！度珖兴幣谥埔?guī)范》收有“制遠(yuǎn)志”、“蜜遠(yuǎn)志”及“朱遠(yuǎn)志”等［3］?！吨兴幣谥平?jīng)驗(yàn)集成》所收炮制方法較多，有“制遠(yuǎn)志”、“姜制”、“炒遠(yuǎn)志”、“朱遠(yuǎn)志”、“蜜遠(yuǎn)志”、“遠(yuǎn)志炭”等。萬德光教授把通過農(nóng)藝措施、采收、加工、炮制、用法等人工干預(yù)中藥品質(zhì)的過程歸納為“中藥品質(zhì)的多元調(diào)控論［4］”?；谂谥剖钦{(diào)控中藥品質(zhì)，保證中醫(yī)臨床合理用藥的措施之一，我們前期比較了炒、甘草制、蜜炙、姜制以及酒制五種炮制方法對遠(yuǎn)志酸含量的影響［5］。為了進(jìn)一步研究不同炮制方法對遠(yuǎn)志飲片的質(zhì)量影響，我們對甘草制遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志與生遠(yuǎn)志的藥效學(xué)進(jìn)行了比較研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物、主要試劑和儀器

2月齡體重18～22g昆明種小鼠，由四川醫(yī)科院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供，動物合格證號：川實(shí)管動物質(zhì)第15號。五羥色胺（5－HT）硫酸肌酐（中國醫(yī)藥公司上?；瘜W(xué)試劑采購站進(jìn)口分裝），去甲腎上腺素（NE）（SERVA公司），標(biāo)準(zhǔn)品多巴胺（DA）（Fluka公司），戊巴比妥鈉（中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司），必嗽平（廣東汕頭金石制藥總廠）；BP211D電子天平（萬分之一，十萬分之一，德國Sartorius公司）；UV－1100紫外可見分光光度計(jì)（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；CB3201數(shù)字描記式小動物活動測定儀（中國川北電子工業(yè)公司）；STT－2跳臺儀（中國醫(yī)科院藥研所）；960CRT熒光分光光度計(jì)；手動玻璃均漿器。

1.2 樣品制備

藥材為遠(yuǎn)志的干燥根。生遠(yuǎn)志、制遠(yuǎn)志及蜜遠(yuǎn)志樣品制備方法為課題組篩選的方法［2］，三種樣品均經(jīng)過水煎，制成含生藥量1g／ml的水煎液，置于4℃冰箱保存。按體重給藥，高劑量組為含生藥量4g／kg，低劑量組為含生藥量1g／kg。

1.3 鎮(zhèn)咳化痰試驗(yàn)

參照文獻(xiàn)［6］的方法，用小鼠氨水引咳法比較鎮(zhèn)咳作用，用小鼠氣管段酚紅法比較化痰作用。取活動度近似的小鼠80只，隨機(jī)分為生遠(yuǎn)志高劑量組、生遠(yuǎn)志低劑量組、蜜遠(yuǎn)志高劑量組、蜜遠(yuǎn)志低劑量組、制遠(yuǎn)志高劑量組、制遠(yuǎn)志低劑量組、對照組、磷酸可待因組等8組，每組10只，雌雄各半。對照組給等量生理鹽水，磷酸可待因劑量為0.02g／kg，必嗽平組劑量為0.035g／kg。

1.4 鎮(zhèn)靜催眠試驗(yàn)

參照文獻(xiàn)［6］的方法，進(jìn)行鎮(zhèn)靜催眠試驗(yàn)。取活動度近似的雄性昆明種小鼠70只，隨機(jī)分為生遠(yuǎn)志高劑量組、生遠(yuǎn)志低劑量組、蜜遠(yuǎn)志高劑量組、蜜遠(yuǎn)志低劑量組、制遠(yuǎn)志高劑量組、制遠(yuǎn)志低劑量組、對照組等7組，每組10只，雌雄各半。除對照組外其他組均連續(xù)灌胃給藥7d，對照組給等量生理鹽水。末次給藥30min后將各組小鼠分別放數(shù)字描記式小動物活動測定儀，適應(yīng)2min，測定5min內(nèi)的活動次數(shù)。以小鼠自主活動次數(shù)為指標(biāo)，觀察生遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志以及制遠(yuǎn)志對小鼠自發(fā)活動的影響。

取健康昆明種小鼠70只，雌雄各半，分組方法同前，每組10只，按相應(yīng)劑量連續(xù)灌胃給藥7d，末次灌胃給藥30min后，腹腔注射閾劑量戊巴比妥鈉40mg／kg。以翻正反射消失1min為入睡潛伏時(shí)間。

1.5 小鼠學(xué)習(xí)記憶試驗(yàn)

參照文獻(xiàn)［6］的方法，取活動度近似的雌性昆明種小鼠80只。隨機(jī)分為8組，每組10只：生遠(yuǎn)志高劑量組，生遠(yuǎn)志低劑量組，蜜遠(yuǎn)志高劑量組，蜜遠(yuǎn)志低劑量組，制遠(yuǎn)志高劑量組，制遠(yuǎn)志低劑量組，腦復(fù)康組，對照組。按相應(yīng)劑量連續(xù)灌胃給藥7d，腦復(fù)康組給藥1.2g／kg，對照組給等量生理鹽水。末次給藥30min后各組腹腔注射戊巴比妥鈉20mg／kg或30%乙醇0.1mL／kg。10min后將小鼠放入電壓在36V的跳臺儀中，適應(yīng)2min，通電3min，記錄跳臺次數(shù)。24h后進(jìn)行測試，測試時(shí)將小鼠放在跳臺上，同時(shí)秒表開始記錄，以3min內(nèi)跳下次數(shù)計(jì)為錯(cuò)誤次數(shù)。

1.6 對小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響

參照文獻(xiàn)［6］的方法，小鼠跳臺測試完后，斷頭處死，迅速打開顱腔，取全腦，放于錫箔紙上稱重。將腦組織放入裝有3mL預(yù)冷的酸性正丁醇溶液中，除去紙重，求得腦組織凈重。按1∶30比例補(bǔ)充酸性正丁醇量，制備組織勻漿。將組織勻漿倒入帶塞離心管中，振蕩5min，在3 000r／min下離心10min，取適量的正丁醇上清液進(jìn)行提取和測定。NE于480nm／385nm測定，DA 于375nm／325nm 測定，5－HT于480nm／365nm測定。將所測各管吸光度值（A值）帶入公式，即可得各管5－HT、DA以及NE的含量：含量＝（樣品管A值－空白管A值）／（標(biāo)準(zhǔn)管A值－空白管A值）×0.2×1.5×（1／組織重g）。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同炮制飲片鎮(zhèn)咳化痰作用比較

蜜遠(yuǎn)志較生遠(yuǎn)志和制遠(yuǎn)志鎮(zhèn)咳、化痰作用增強(qiáng)（P＜0.05）（表1、2）。

表1 生遠(yuǎn)志、制遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志對小鼠鎮(zhèn)咳作用比較Tab.1 Antitussive effect of CRP，GRP and HRP in mice

表2 生遠(yuǎn)志、制遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志對小鼠氣管段酚紅排泌的影響Tab.2 Phenol red secretion effect of CRP，GRP and HRP in mice trachea

2.2 不同炮制飲片鎮(zhèn)靜催眠作用比較

對小鼠的自發(fā)活動影響，生遠(yuǎn)志高、低劑量組，蜜遠(yuǎn)志高、低劑量組，制遠(yuǎn)志高、低劑量組均有極顯著性差異；制遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志與遠(yuǎn)志相同劑量組間無顯著性差異，僅有減少的趨勢。對戊巴比妥鈉協(xié)同催眠作用的影響，生遠(yuǎn)志高、低劑量組，蜜遠(yuǎn)志高、低劑量組，制遠(yuǎn)志高、低劑量組均有顯著性差異；蜜遠(yuǎn)志、制遠(yuǎn)志高劑量組與生遠(yuǎn)志相同劑量組無顯著性差異，但入睡潛伏時(shí)間有縮短的趨勢。結(jié)果見表3。

表3 生遠(yuǎn)志、制遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志對小鼠自發(fā)活動與入睡潛伏時(shí)間的影響Tab.3 Spontaneous activity and sleep latency effect of CRP，GRP and HRP in mice

2.3 不同炮制飲片對小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

生遠(yuǎn)志高、低劑量組，蜜遠(yuǎn)志高、低劑量組，制遠(yuǎn)志高、低劑量組間跳臺錯(cuò)誤次數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；戊巴比妥鈉處理后的制遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志與生遠(yuǎn)志相同劑量組間錯(cuò)誤次數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而乙醇處理后的制遠(yuǎn)志高劑量組與生遠(yuǎn)志低劑量組間錯(cuò)誤次數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表4）。

表4 生遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志對小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響Tab.4 The learning and memory effect of CRP，GRP and HRP in mice

2.4 不同炮制飲片對小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響

結(jié)果見表5。戊巴比妥鈉處理后的生遠(yuǎn)志、制遠(yuǎn)志高劑量組5－HT含量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，乙醇處理后的蜜遠(yuǎn)志高劑量組、制遠(yuǎn)志高劑量組與生遠(yuǎn)志低劑量組5－HT含量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；戊巴比妥鈉處理后的生遠(yuǎn)志高、低劑量組，制遠(yuǎn)志低劑量組NE含量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；戊巴比妥鈉處理后的生遠(yuǎn)志高、低劑量組，制遠(yuǎn)志低劑量組NE含量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；戊巴比妥鈉處理后的制遠(yuǎn)志低劑量組與生遠(yuǎn)志低劑量組、腦復(fù)康組DA含量間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表5）。

表5 不同炮制品對小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量影響Teb.5 The effect of CRP，HRP and GRP on content of brain monoamine neurotransmitters in mice

3 討論

明代陳嘉謨在《本草蒙荃》中提出“凡藥制造，貴在適中，不及則功效難求，太過則氣味反失......酒制升提，姜制發(fā)散......”。關(guān)于遠(yuǎn)志的炮制機(jī)制，《雷公炮炙論》中認(rèn)為：“遠(yuǎn)志，凡使，先需去心……去心了，用熟甘草湯浸宿，漉出，曝干用之也”，并認(rèn)為“若不去心，服之令人悶［7］”。遠(yuǎn)志炮制方法自古以來較多，現(xiàn)代研究證明，生遠(yuǎn)志對動物的消化道有刺激作用［8，9］，這與其含有的皂苷類成分有關(guān)，古人已經(jīng)意識到通過不同炮制可以減輕其對人體的刺激作用。我們前期比較了不同炮制方法對其遠(yuǎn)志酸含量的影響，發(fā)現(xiàn)蜜炙、酒制與甘草制均可提高遠(yuǎn)志浸出物與遠(yuǎn)志酸的含量，而炒法則可降低其浸出物與遠(yuǎn)志酸的含量。通過對不同地區(qū)炮制規(guī)范的調(diào)查，現(xiàn)代以制遠(yuǎn)志、蜜遠(yuǎn)志炮制飲片為多，因此，我們在有效成分比較的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了其藥效學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蜜遠(yuǎn)志能減少小鼠的咳嗽次數(shù)，增加其呼吸道酚紅的排泌，而制遠(yuǎn)志作用僅有增強(qiáng)趨勢，可能與蜜遠(yuǎn)志中炮制輔料蜂蜜味甘滋潤的性能有關(guān)。而三種炮制飲片對小鼠的自發(fā)活動均有影響，但其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。遠(yuǎn)志甘草制后，能夠減少小鼠跳臺的錯(cuò)誤次數(shù)，且小鼠腦內(nèi)5－HT、NE及DA含量均升高。

綜上可見，不同炮制方法對化學(xué)成分、藥效作用均可產(chǎn)生影響，表明炮制對遠(yuǎn)志品質(zhì)起到了調(diào)控作用，這與萬德光教授在中藥品質(zhì)的多元調(diào)控論中“中藥炮制是中藥品質(zhì)調(diào)控措施之一”的觀點(diǎn)吻合。今后，還需進(jìn)一步加強(qiáng)遠(yuǎn)志炮制對其品質(zhì)調(diào)控的機(jī)制研究。

［1］萬德光，陳林，劉友平，等.遠(yuǎn)志炮制沿革考［J］.中藥材，2005，28（3）：233－235.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：146.

［3］中華人民共和國藥政管理局.全國中藥炮制規(guī)范［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1988：57－58.

［4］萬德光.中藥品質(zhì)研究——理論、方法與實(shí)踐［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2008：52.

［5］王光志，萬德光.不同炮制方法對遠(yuǎn)志質(zhì)量的影響［J］.中成藥，2009，31（2）：252－255.

［6］陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：136，141.

［7］雷敩原著.尚志均輯校.雷公炮炙論［M］.合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，1991：25－26.

［8］吳暉暉，王建，劉賢武，等.遠(yuǎn)志及其不同蜜炙品的急性毒性及其對胃腸運(yùn)動的影響［J］.四川中醫(yī)，2006，24（11）：16－18.

［9］鮑薈竹，王建，吳暉暉，等.生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對家兔離體腸平滑肌運(yùn)動作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18（2）：29.