燈盞花素對鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎功能的影響

孫潔敏 浙江醫(yī)院內(nèi)分泌科 杭州 310013

姚美芬 李璐璐 李 琦 沈建國 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病最為嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。燈盞花（Erigeronbreviscapus，EB）又名燈盞細(xì)辛，為菊科植物短葶飛蓬的全草，具有擴(kuò)張血管，降低血液黏度，增加血流量，改善局部供血，抑制氧化應(yīng)激，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化作用。本實驗采用單次腹腔注射鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）誘發(fā)大鼠糖尿病模型，繼而應(yīng)用燈盞花素治療，觀察其對大鼠腎功能的保護(hù)作用，報道如下。

1 實驗材料

SD雄性大鼠27只，體質(zhì)量230～280g，由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院動物實驗室提供。燈盞花素片（上海雷允上藥業(yè)有限公司）；鏈脲佐菌素（STZ）（購自美國sigma公司）。

2 實驗方法

2.1 分組與造模 27只SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常對照組（C組），糖尿病模型組（D組），糖尿病燈盞花素治療組（DD組），各9只。適應(yīng)性飼養(yǎng)10天后禁食12h，D組和DD組予一次性腹腔注射65mg/kg鏈脲佐菌素（STZ），C組予一次性腹腔注射同等劑量的檸檬酸鈉緩沖液，72h后尾靜脈取血測血糖，血糖＞167.7mmol/L則造模成功。

2.2 給 藥 DD組每天給予燈盞花素混懸液20mg（kg·d）灌胃；D組和C組每天給予同等劑量的生理鹽水灌胃；每隔2周稱體重測血糖1次。8周后，腹腔注射戊巴比妥鈉40mg（kg），麻醉動物后，由下腔靜脈抽血3～5mL，離心后取血清，測定血糖、血尿素氮、肌酐。搞取左腎稱重，將右腎組織經(jīng)HE染色切片，置光學(xué)顯微鏡下，每個標(biāo)本隨機(jī)選擇5個低倍鏡視野（×100）觀察，比較形態(tài)學(xué)改變。

3 實驗結(jié)果

3.1 三組大鼠體質(zhì)量與血糖比較 三組大鼠成模時的體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；DD組和D組大鼠血糖與正常對照組大鼠比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），DD組與D組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；成模 2、4、6、8周時，DD 組、D 組與 C 組大鼠的體質(zhì)量、血糖比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），DD與D組大鼠體質(zhì)量、血糖比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表 1。

3.2 三組大鼠腎臟肥大指數(shù)及血肌酐、尿素氮比較糖尿病組大鼠與正常大鼠相比腎臟肥大指數(shù)（以腎重（mg）/體質(zhì)量（g）表示）升高，血尿素氮、肌酐升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；經(jīng)燈盞花素治療8周后，血肌酐較前有所下降，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），尿素氮較前下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），見表2。

表1 三組大鼠成模用藥后體質(zhì)量、血糖比較（）

表1 三組大鼠成模用藥后體質(zhì)量、血糖比較（）

注：與C組比較，△△P＜0.01；#D組大鼠于第5周及第7周各死亡1只

組 別 觀察時間/周 n/只 體質(zhì)量/g 血糖/(mmol/L)DD 組 0 9 297.86±42.95 27.77±3.46△△D 組 9 295.44±13.11 30.23±3.06△△C 組 9 302.00±14.37 5.62±0.24 DD 組 2 9 315.00±47.69△△ 31.11±4.03△△D 組 9 285.11±14.72△△ 29.50±2.77△△C 組 9 348.22±28.88 6.43±0.50 DD 組 4 9 310.86±49.10△△ 30.36±4.12△△D 組 8# 281.88±16.17△△ 32.20±2.59△△C 組 9 388.89±36.78 5.95±0.42 DD 組 6 9 314.86±29.59△△ 31.65±1.46△△D 組 9 298.84±23.04△△ 32.14±2.59△△C 組 9 421.44±35.42 5.95±0.33 DD 組 8 9 291.00±30.19△△ 30.98±3.26△△D 組 7# 281.10±19.99△△ 31.30±1.52△△C 組 9 453.31±50.53 6.28±0.40

表2 三組大鼠腎臟肥大指數(shù)、血肌酐和血尿素氮比較（）

表2 三組大鼠腎臟肥大指數(shù)、血肌酐和血尿素氮比較（）

注：與 C 組比較，△△P＜0.01；與 D 組比較，▲▲P＜0.01；

組別n/只腎重/體質(zhì)量/（mg/g）血肌酐/（μmol/L）血尿素氮/(mmol/L)DD 組 9 7.11±1.15△△ 41.34±6.87△△ 13.23±1.30△△▲▲D 組 7 7.09±0.92△△ 46.00±9.27△△ 18.47±4.25△△C 組 9 3.42±0.34 12.75±1.26 6.88±0.85

3.3 三組大鼠腎組織形態(tài)學(xué)改變比較 HE染色，光鏡下顯示，D組與C組相比腎小球體積顯著增大，腎小球毛細(xì)血管壁狹窄甚至閉塞，并可見部分腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，而DD組與D組比較腎小球體積有所減小，血管襻開放，見圖1。

4 討 論

近年研究表明，DN早期主要表現(xiàn)為腎小球高濾過，腎小球體積增大，細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）堆積，腎小球基底膜增厚及微量蛋白尿，晚期出現(xiàn)腎小球硬化、腎功能衰竭，其發(fā)生發(fā)展與血糖水平密切相關(guān)。

圖1 三組大鼠腎組織形態(tài)學(xué)比較（×100）

燈盞花素又名燈盞細(xì)辛，為菊科植物短葶飛蓬的全草，為一種植物藥，其有效成分為二咖啡?？鼘幩?、焦炔康酸、原二茶酸等黃酮類化合物[1]，具有活血化瘀、通絡(luò)止血等作用，廣泛用于中風(fēng)后遺癥、冠心病等。臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)燈盞花素能減少DN尿白蛋白含量，對早期糖尿病腎病療效較好[2]。燈盞花素除了擴(kuò)張血管，降低血液黏度，增加血流量，改善局部供血，抑制血小板聚集等功能外，還能通過抑制氧化應(yīng)激和增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化作用來防治糖尿病腎病。研究顯示，燈盞花素能抑制血NF-κB及TGF-β水平增加，阻斷腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化過程，促進(jìn)尿肌酐排泄，降低血尿素氮、肌酐濃度，延緩腎功能衰竭的發(fā)展、抑制腎臟肥大，并且具有抗氧化及抑制PKC活性，減少糖尿病大鼠腎小球及腎小管間質(zhì)的巨噬細(xì)胞浸潤作用[3]，從而防治糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。

本實驗結(jié)果顯示，糖尿病大鼠體重減輕，腎臟肥大指數(shù)升高，腎小球系膜增生，血管襻關(guān)閉，血肌酐及尿素氮水平升高，證明實驗中糖尿病大鼠存在腎臟病變。而用燈盞花素治療糖尿病大鼠8周后，腎小球體積有所減小，系膜增生及血管襻關(guān)閉有所減輕。血尿素氮水平明顯下降，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。血肌酐有所下降，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可能與燈盞花素治療劑量不足及治療時間短有關(guān)。本實驗結(jié)果同時顯示燈盞花素對血糖無影響。

［1］Wang M，Xie C，Cai RL，et al.Studies on antioxidant activities of breviscapine in the cell-free system［J］.Am J Chin Med，2008，36（6）：1199-1207.

［2］Ranjan Sen.，David Baltimore.Multiple Nuclear Factors Interact with the Immunoglobulin Enhancer Sequence［J］.Cell，1986，46（5）：705-716.

［3］Xiang Ming Qi，Guo Zhong Wu，Yong Gui Wu，et al.Renoprotective Effect of Breviscapine through Suppression of Renal Macrophage Recruitment in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats［J］.Nephron Exp Nephrol，2006，104（4）：147-157.