雞傳染性喉氣管炎凍干苗（喉必妥）免疫保護(hù)試驗(yàn)

劉興彩，鄒立宏，張力青，顧夢辰，王彪，尤永君

（瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司，河北保定 071000）

雞傳染性喉氣管炎（ILT）是由α皰疹病毒引起的一種雞的急性上呼吸道傳染病。該病呈世界性流行，常因其病毒毒力不同導(dǎo)致病癥的嚴(yán)重程度各異，重者死亡率可達(dá)70%。目前對本病尚無有效的治療藥物，一般采取對癥治療，可使病雞呼吸困難的癥狀緩解。在實(shí)際生產(chǎn)中，如果首免時(shí)間過早，或者免疫劑量過大，免疫后部分雞容易發(fā)生結(jié)膜炎、呼吸道癥狀甚至死亡，同時(shí)會影響到體增重；而免疫劑量過小，則會導(dǎo)致免疫無效。為此，我們進(jìn)行了不同首免日齡、不同免疫劑量的雞傳染性喉氣管炎凍干苗（喉必妥）免疫保護(hù)試驗(yàn)，以確定最佳的首免日齡和免疫劑量。

一、材料與方法

1.材料。

（1）喉必妥：由瑞普保定生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為100803，每瓶1 000羽份，每羽份含量≥102.7EID50。

表1 21日齡青腳麻雞不同免疫劑量免疫副反應(yīng)雞只數(shù)及分值表

（2）試驗(yàn)動(dòng)物：21日齡青腳麻雞30只，35日齡青腳麻雞80只（由滄州溫氏集團(tuán)提供）。

（3）攻毒毒株：瑞普（保定）診斷研究中心分離的ILT病毒AH1104株。

2.方法。

（1）ILT攻毒株的傳代復(fù)壯：將ILT病毒AH110415株稀釋后接種雞胚，孵化120 h后收獲死胚、活胚的尿囊液和絨毛尿囊膜備用。

（2）21日齡青腳麻雞接種反應(yīng)試驗(yàn)及稱重：將21日齡青腳麻雞30只，隨機(jī)分為3組，每組10只，第1、2組為疫苗免疫組，第3組為空白對照組，將喉必妥凍干苗用PBS分別稀釋成每50μl含毒量為0.5羽份、1羽份的疫苗液，分別免疫1、2組試驗(yàn)雞，免疫途徑為點(diǎn)眼，每只雞接種50μl。免疫后每天觀察雞只的精神狀態(tài)、飲水和采食變化、呼吸道癥狀以及雞的眼睛變化等并做記錄，同時(shí)在接種后第14天、21天和28天稱體重。對接種反應(yīng)評級并打分進(jìn)行量化，具體標(biāo)準(zhǔn)分為無流淚癥狀雞（0分）、免疫副反應(yīng)輕微雞只（1分）、免疫副反應(yīng)嚴(yán)重雞只（2分），雞只出現(xiàn)甩頭、咳嗽、有呼吸道反應(yīng)的均計(jì)為嚴(yán)重（2分），出現(xiàn)羞明的計(jì)為3分。

（3）35日齡青腳麻雞接種反應(yīng)試驗(yàn)及稱重：將35日齡的青腳麻雞，隨機(jī)分為8組，每組10只，第1～7組為疫苗免疫組，第8組為空白對照組，將喉必妥凍干苗用PBS分別稀釋成每50μl含毒量為0.2羽份、0.5羽份、0.8羽份、1羽份、2羽份、5羽份和10羽份的疫苗液，分別免疫1～7組試驗(yàn)雞；將21日齡的青腳麻雞隨機(jī)分為2組（0.5和1羽份免疫劑量），每組10只。免疫途徑為點(diǎn)眼，每只雞接種50μl。免疫后每天觀察雞只的精神狀態(tài)、飲水和采食變化、呼吸道癥狀以及雞的眼睛變化等并做記錄，同時(shí)在接種后14日齡和21日齡稱體重。對接種反應(yīng)評級并打分進(jìn)行量化，具體標(biāo)準(zhǔn)同“21日齡青腳麻雞接種反應(yīng)試驗(yàn)及稱重實(shí)驗(yàn)”。

表2 35日齡青腳麻雞不同免疫劑量免疫副反應(yīng)雞只數(shù)及分值表

（4）免疫保護(hù)力試驗(yàn)：21日齡免疫組和35日齡免疫組分別在ILT疫苗免疫后21天，進(jìn)行喉內(nèi)灌 注104.0EID50/0.2 ml的ILTV（AH1104），觀察10 d，每日觀察雞的發(fā)病及死亡情況，并對死亡雞剖檢，觀察病理變化。為了更好的表達(dá)免疫保護(hù)力效果，對雞只的臨床表現(xiàn)進(jìn)行量化，標(biāo)準(zhǔn)如下：雞只表現(xiàn)精神沉郁，采食下降記1分，眼紅輕微腫1分，流淚紅腫、明顯流淚2分，雞只有呼吸道疾病2分，雞只死亡3分（除雞只死亡之日算起外，在后面的觀察時(shí)間內(nèi)也計(jì)入）。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.從表1、表2可以看出，在免疫劑量相同的條件下，21日齡免疫組的免疫副反應(yīng)明顯大于35日齡免疫組，21日齡免疫組出現(xiàn)免疫副反應(yīng)的雞只數(shù)也明顯多于35日齡免疫組，免疫副反應(yīng)持續(xù)時(shí)間也延長。21日齡和35日齡免疫組，在喉必妥免疫后3～4 d，除1組（0.2羽份/只）外，各個(gè)免疫劑量組開始出現(xiàn)輕微流淚癥狀，眼結(jié)膜發(fā)紅、充血，采食量減少，部分雞眼瞼腫脹、出現(xiàn)呼吸道癥狀，經(jīng)過2～7 d時(shí)間即可恢復(fù)正常；35日齡免疫組，隨著免疫劑量的增大，出現(xiàn)免疫副反應(yīng)雞只數(shù)逐漸增多、免疫副反應(yīng)逐漸加重、免疫副反應(yīng)持續(xù)時(shí)間逐漸延長。

2.從表3、表4可以看出，在免疫劑量相同的條件下，21日齡免疫組雞群周體增重明顯小于35日齡免疫組；21日齡和35日齡兩個(gè)免疫日齡組，都隨著免疫劑量的增加，對雞只的周增重影響加重。

3.免疫保護(hù)力實(shí)驗(yàn)結(jié)果，攻毒后觀察10天，21日齡免疫的青腳麻雞，對照組有4只死亡，免疫組均未出現(xiàn)死亡。35日齡免疫的青腳麻雞，對照組有3只死亡，各個(gè)免疫組均未出現(xiàn)死亡。從表5、表6可以看出，21日齡免疫組，免疫劑量為0.5羽份/只雞時(shí)，攻毒時(shí)僅有2只雞出現(xiàn)臨床癥狀，未出現(xiàn)死亡，對照組有8只雞出現(xiàn)眼炎和呼吸道癥狀，且癥狀嚴(yán)重；35日齡免疫組，免疫劑量為0.2羽份/只雞時(shí)，攻毒時(shí)僅有1只雞只表現(xiàn)出臨床癥狀，但均未出現(xiàn)死亡，對照組有5只雞出現(xiàn)眼炎和呼吸道癥狀。

三、討論

傳染性喉氣管炎弱毒活疫苗對雞存在一定的危害，主要表現(xiàn)在，使用疫苗后會造成一定的病理損傷，嚴(yán)重者會出現(xiàn)較為明顯的臨床癥狀，同時(shí)還會使非免疫雞群發(fā)??；疫苗使用后易散毒，導(dǎo)致病毒從免疫雞(群)向易感雞 (群 )傳播，因此其弱毒活疫苗主要應(yīng)用于流行地區(qū)的雞群傳染性喉氣管炎的免疫和預(yù)防，非疫區(qū)使用時(shí)要慎重，并要做好雞場的隔離和安全防護(hù)。

表3 21日齡免疫青腳麻雞后體增重（g）比較

表4 35日齡免疫青腳麻雞后雞群體增重（g）比較

表5 21日齡免疫組攻毒保護(hù)試驗(yàn)病死雞只數(shù)及分值

表6 35日齡免疫組攻毒保護(hù)試驗(yàn)發(fā)病雞只數(shù)及分值

我們本次試驗(yàn)，目的就是了解ILT疫苗合適的免疫日齡和免疫劑量。通過免疫副反應(yīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在相同免疫劑量條件下，21日齡免疫組免疫后其副反應(yīng)分值明顯比35日齡免疫組分值高，同時(shí)，通過對免疫后測體重發(fā)現(xiàn)，21日齡免疫組的體增重幅度明顯小于35日齡免疫組，由此我們推薦免疫日齡為35日齡。

通過接種反應(yīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在應(yīng)用1羽份以下的免疫劑量免疫時(shí)，雞群的免疫副反應(yīng)相對較小，而且雞群在5天內(nèi)即可恢復(fù)，同時(shí)雞群的周體增重也相對較大；通過免疫保護(hù)力試驗(yàn)（35日齡免疫組）得知，雖然各個(gè)免疫劑量的雞群均未出現(xiàn)死亡，但在0.2羽份免疫劑量組，攻毒時(shí)有雞只出現(xiàn)臨床癥狀，說明未能獲得很好地免疫保護(hù)，0.2羽份以上的免疫劑量對雞群產(chǎn)生較好的保護(hù)力，但隨著免疫劑量的增大，免疫反應(yīng)逐漸加重；因此對于青腳麻雞的喉必妥免疫，建議每只雞應(yīng)用0.5羽份的劑量。