高效液相色譜法測定銀冬顆粒中綠原酸含量＊

徐 玲，王 琴，李金玲，徐曉玉

(西南大學(xué)藥學(xué)院·西南大學(xué)中藥研究所，重慶 400715)

銀冬顆粒系西南大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院博士生導(dǎo)師徐曉玉教授在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下精心研制的中藥復(fù)方保健產(chǎn)品。銀冬顆粒主要由山銀花、天冬等組成，具有清熱瀉火、養(yǎng)陰生津的功效。為了控制銀冬顆粒的質(zhì)量，保證其療效，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)制劑中的綠原酸進(jìn)行了含量測定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(Agilent Technologies 1200 series);KQ5200E型超聲波清洗器(江蘇昆山市超聲儀器有限公司);JA2003N型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。綠原酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110753－200413);銀冬顆粒(西南大學(xué)中藥研究所研制，2 g/袋，批號(hào)分別為 09112601，09112603，09112704);乙腈為色譜純，磷酸、甲醇為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:shimpack vp－ODS 柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.2% 磷酸(10 ∶90);流速:1.0 mL/min;檢測波長:326 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20 μL。在上述色譜條件下進(jìn)樣，色譜圖見圖1?？梢姡G原酸峰形良好，與其他組分能較好分離;陰性對(duì)照品溶液色譜中，在綠原酸相應(yīng)的保留時(shí)間附近無干擾峰。

2.2 溶液制備

精密稱取綠原酸對(duì)照品10.8 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為108 μg/mL的對(duì)照品溶液。稱取銀冬顆粒約2 g，研細(xì)，取約0.3 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，用50%甲醇20 mL超聲溶解30 min，放冷，加50%甲醇稀釋至刻度，精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.22 μm)過濾，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:分別精密吸取對(duì)照品溶液(108 μg/mL)0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 mL，置 10 mL 棕色容量瓶中，加 50% 甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.22 μm)過濾后，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積。以綠原酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=10.899 5 C－10.613，r=0.999 3(n=5)。結(jié)果表明，綠原酸檢測質(zhì)量濃度在 5.4 ～108 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測定綠原酸的峰面積。結(jié)果的 RSD為0.314%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣，測定綠原酸的峰面積。結(jié)果的 RSD為0.382%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):精密稱取同一批樣品(09112601)6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果綠原酸平均含量為10.94 mg/g，RSD為2.2%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):稱取9份已知含量(10.94 mg/g)的樣品批號(hào)為09112601約0.15 g，分別加入3個(gè)梯度濃度的對(duì)照品共6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為09112601，09112603，09112704的3批樣品中綠原酸含量分別為 10.94，11.62，11.65 mg/g。

3 討論

取少量綠原酸對(duì)照品，在200～400 nm波長范圍進(jìn)行掃描，結(jié)果其最大吸收值在326 nm，因此選用326 nm作為檢測波長。在波長為 326 nm、進(jìn)樣量 20 μL、流速 1.0 mL/min的條件下，分別以乙腈 － 0.4%磷酸溶液(13 ∶87)[1]、乙腈 － 0.1% 磷酸溶液(17 ∶83)、甲醇 －水 －冰醋酸(7∶92 ∶1)、乙腈 －0.2%磷酸溶液(10∶90)為流動(dòng)相測定，結(jié)果流動(dòng)相為乙腈－0.2%磷酸溶液(10∶90)時(shí)綠原酸的保留時(shí)間為26.8 min，且峰形良好，與其他組分能較好分離。本試驗(yàn)所建立的方法高效、快速、穩(wěn)定、靈敏，可作為銀冬顆粒質(zhì)量控制的有效方法。

表1 綠原酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:28.