參黃頸康片鎮(zhèn)痛抗炎作用及對(duì)炎癥因子影響研究

劉新宇， 劉春娜， 張曉妍， 楊 菁

（1.遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，遼寧 錦州121001；2.遼寧醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，遼寧錦州 121001）

參黃頸康片鎮(zhèn)痛抗炎作用及對(duì)炎癥因子影響研究

劉新宇1， 劉春娜2*， 張曉妍1， 楊 菁2

（1.遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，遼寧 錦州121001；2.遼寧醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，遼寧錦州 121001）

目的 該實(shí)驗(yàn)通過觀察受試抗頸椎病藥物（參黃頸康片）對(duì)抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛的藥效學(xué)作用，探討參黃頸康片的藥理作用及相關(guān)機(jī)制。方法 該實(shí)驗(yàn)采用小鼠耳廓腫脹模型、大鼠肉芽腫模型、大鼠足跖腫脹動(dòng)物模型，觀察給予不同劑量參黃頸康片（小鼠為600、1 200、2 400 mg/kg；大鼠為500、1 000、2 000 mg/kg）的抗炎、消腫的藥理作用，另外選擇物理及化學(xué)法，進(jìn)一步研究參黃頸康片的鎮(zhèn)痛作用，同時(shí)應(yīng)用大鼠肉芽腫模型，測定血清中白介素-6（IL-1β）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的水平。結(jié)果 參黃頸康片能明顯降低小鼠耳廓腫脹的腫脹率、大鼠肉芽腫的質(zhì)量、足跖腫脹程度，能提高小鼠痛閾值及降低其扭體反射，并能降低大鼠肉芽腫模型中炎癥介質(zhì)的表達(dá)。結(jié)論 參黃頸康片通過抑制炎癥介質(zhì)表達(dá)有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

腫瘤壞死因子-α；白介素-1β；足跖腫脹；肉芽腫

頸椎病是中老年常見的多發(fā)病，該病有著椎間盤變性、髓核突出病變的個(gè)體，特別是髓核對(duì)機(jī)體組織的致炎反應(yīng)現(xiàn)象。椎間盤周圍組織水腫，纖維蛋白沉積，大量的炎性細(xì)胞浸潤，單核細(xì)胞趨化蛋白、巨噬細(xì)胞炎性蛋白等化學(xué)激動(dòng)因子存在過度表達(dá)現(xiàn)象，導(dǎo)致了在椎間盤局部形成了炎癥、增生及腫脹［1-3］。而頸椎病的治療目前沒有較好療效的藥物。參黃頸康片是由丹參、黃芪、白術(shù)、姜黃、當(dāng)歸、煅牡蠣等中藥組成的復(fù)方制劑，擬用于治療頸椎病。為進(jìn)一步闡明其療效，本實(shí)驗(yàn)主要觀察給予不同劑量參黃頸康片對(duì)小鼠耳廓腫脹模型、大鼠肉芽腫模型、大鼠足跖腫脹動(dòng)物模型的影響，觀察其抗炎、鎮(zhèn)痛的藥理作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)一步研究，為臨床治療頸椎病提供可靠的理論依據(jù)［4-5］。

1 材料

1.1 動(dòng)物 取昆明種小白鼠160只，體質(zhì)量18～22 g。Sprague-Dawley大鼠120只，體質(zhì)量180～220 g。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（遼）2003-0007。

1.2 試驗(yàn)藥品 參黃頸康片（遼寧醫(yī)學(xué)院新藥研究所自制，為棕黃色粉末，0.35 g/片，1 g 相當(dāng)于應(yīng)用生藥 1.429 g）；陽性對(duì)照藥品：阿司匹林（湖南新匯制藥有限公司提供）。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為6組，Ⅰ組為空白對(duì)照組；Ⅱ組為模型組；Ⅲ組至Ⅴ組分別為低、中、高劑量參黃頸康片組（小鼠為 600、1 200、2 400 mg/kg；大鼠為 500、1 000、2 000 mg/kg）；Ⅵ組為陽性藥物對(duì)照組，灌胃給予阿司匹林（100 mg/kg）。

2.2 測定項(xiàng)目

2.2.1 參黃頸康片對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 取健康小鼠60只，每日灌胃給藥1次，灌胃體積為0.1 mL/10 g，連續(xù)給藥3 d，空白對(duì)照組灌胃等體積的生理鹽水。末次給藥后1.5 h將30 μL二甲苯涂于小鼠右耳廓前后兩面致炎（除空白對(duì)照組），左耳廓作為自身對(duì)照。致炎后30 min將各組試驗(yàn)小鼠處死，用直徑9 mm打孔器在相同的部位取下左、右耳片，稱定質(zhì)量，計(jì)算左、右耳片質(zhì)量差為腫脹度或抑制率（%）。

2.2.2 參黃頸康片對(duì)大鼠足跖腫脹的影響 取健康雄性大鼠60只，按2.1項(xiàng)進(jìn)行分組。每日灌胃給藥1次，體積0.5 mL，連續(xù)給藥3 d，空白對(duì)照組灌胃等體積的生理鹽水。末次給藥1 h后，各組試驗(yàn)動(dòng)物（除空白對(duì)照組）右踝關(guān)節(jié)皮下注射10%雞蛋清0.1 mL，致炎，分別用軟皮尺測量踝關(guān)節(jié)周長，以給藥前、致炎后1 h、2 h、3 h踝關(guān)節(jié)周長差值作為腫脹度。

2.2.3 參黃頸康片對(duì)大鼠棉球肉芽腫及炎癥介質(zhì)的影響取雄性大鼠60只，除空白對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外，其余50只大鼠用乙醚淺麻醉，無菌條件下，下腹正中切口，各鼠右側(cè)腹股溝皮下各置入一無菌棉球（30 mg）。術(shù)后隨機(jī)按2.1項(xiàng)進(jìn)行分組。于手術(shù)當(dāng)天開始灌胃，連續(xù)7 d，灌胃體積0.5 mL，肉芽腫模型組給等體積生理鹽水，第8天處死動(dòng)物，解剖并剝離棉球，60℃烘烤12 h稱定質(zhì)量，計(jì)算肉芽質(zhì)量（肉芽質(zhì)量=帶肉芽組織的棉球質(zhì)量－棉球原始質(zhì)量）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，上述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，頸動(dòng)脈取血2 mL，3 000 r/min，離心5 min，取上清，用ELISA法測定血清白介素-1（IL-1β）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）。

2.2.4 用熱板法觀察參黃頸康片的鎮(zhèn)痛作用 采用Woolf氏熱板法。于電熱恒溫水浴箱溫度保持在（55±0.5）℃的范圍。將篩選后的小白鼠50只稱定質(zhì)量，按2.1項(xiàng)分組，測每只小鼠的痛閾值一次，作為該鼠給藥前的痛閾值。各組試驗(yàn)小鼠給藥前及給藥后30 min各測定小白鼠痛閾值一次。痛閾提高百分率=（用藥后痛閾值－用藥前痛閾值）/用藥前痛閾值%

2.2.5 用扭體法觀察抗頸椎病藥物參黃頸康片的鎮(zhèn)痛作用取50只小鼠稱定質(zhì)量后，按上述分組情況，灌胃給予不同受試藥物30 min后，腹腔注射0.6%的醋酸0.2 mL/只，記錄15 min內(nèi)各組“扭體”反應(yīng)陽性的動(dòng)物數(shù)，及15 min內(nèi)出現(xiàn)“扭體反應(yīng)”的次數(shù)。

3 結(jié)果

3.1 參黃頸康片抗炎、消腫作用結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，2。表明應(yīng)用不同劑量參黃頸康片，能明顯降低小耳廓腫脹度、減輕大鼠足跖腫脹，降低大鼠棉球肉芽腫質(zhì)量，與模型組相比具有顯著性差異（P＜0.05），提示參黃頸康片有一定抗炎、消腫作用。

不同劑量參黃頸康片受試藥物組與空白對(duì)照組相比，試驗(yàn)動(dòng)物15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反射的次數(shù)明顯減小，具有顯著性差異（P＜0.05）。另外，參黃頸康片能明顯提高小鼠痛閾值，結(jié)果表明，參黃頸康片對(duì)化學(xué)法及物理法所致的疼痛有較明顯的鎮(zhèn)痛作用（見表1）。

表1 小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果（x ± s，n=10）

表2 大鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果（x ± s，n=10）

3.2 參黃頸康片對(duì)炎癥介質(zhì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表3。大鼠肉芽腫模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中IL-1β及TNF-α明顯升高，而應(yīng)用不同劑量參黃頸康片，上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯著下降，與模型組相比，具有顯著性差異（P＜0.05）。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，參黃頸康片能明顯降低血清中炎癥介質(zhì)IL-1β及TNF-α的水平。

表3 參黃頸康片對(duì)炎癥介質(zhì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果（x ± s，n=10）

與足跖腫脹模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

4 討論

頸椎病時(shí)，大量促進(jìn)炎癥介質(zhì)釋放的細(xì)胞因子表達(dá)升高，保護(hù)性細(xì)胞因子表達(dá)降低，炎癥介質(zhì)大量釋放，凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)異常，導(dǎo)致椎間盤不斷退變，進(jìn)而導(dǎo)致頸椎病的病程發(fā)展［6］。本實(shí)驗(yàn)受試藥品——參黃頸康片是中藥復(fù)方制劑，臨床擬用于治療頸椎病。其中，丹參、黃芪能有效地改善微循環(huán)，糾正椎基底動(dòng)脈供血不足，抗脂質(zhì)氧化等作用；白術(shù)、姜黃具有抑菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抑制血小板聚集及血栓形成、改善血液流變學(xué)、增加腦血流量作用；牡蠣有增強(qiáng)免疫力等多種功效。這些藥物對(duì)于頸椎病的治療均有較好的療效［7-9］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，參黃頸康片對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、大鼠足腫脹及大鼠棉球肉芽腫3種急、慢性試驗(yàn)性炎癥均有非常顯著的抑制作用。另外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，參黃頸康片可顯著減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù)、增高痛閾值，有非常顯著的抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛作用。可使頸椎病人的疼痛癥狀緩解，從而使緊張或痙攣的肌肉松弛，以減輕肌肉對(duì)局部病灶處的牽拉，有利于局部損傷病灶的修復(fù)［10-12］。

另外，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用不同劑量參黃頸康片能明顯降低炎癥介質(zhì)IL-1β及TNF-α。提示參黃頸康片可能通過減少炎癥介質(zhì)等產(chǎn)生，在頸椎病中發(fā)揮治療及保護(hù)作用。

綜上所述，參黃頸康片主要通過其抗炎、鎮(zhèn)痛、活血化瘀作用，來改善頸椎病人的多種癥狀，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與該藥消腫止痛、活血通絡(luò)的功能亦相吻合，為該藥在臨床上治療頸椎病癥提供了一定的理論依據(jù)。

［1］丁文清，江怡珊，喬 薇.頸痛靈膠囊對(duì)化學(xué)、物理方法致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)觀察［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2003，37（12）：37-38.

［2］解硯英，牟艷玲，朱 燕，等.頸舒膠囊抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國新藥雜志，2005，14（10）：1169-1172.

［3］曾萬玲，隋艷華，董學(xué)新，等.頸椎溫通膠囊對(duì)頸神經(jīng)根炎大鼠體感誘發(fā)電位、行為學(xué)及病理學(xué)影響的研究［J］.中成藥，2009，31（12）：1820-1821.

［4］趙傳喜，吳 淮，劉 欣，等.丹參川芎嗪注射液治療椎動(dòng)脈型頸椎病的臨床研究［J］.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，24（7）：48-49.

［5］張愛平，許書亮，陳弘修，等.頸痛寧主要藥效學(xué)試驗(yàn)研究［J］.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，11（3）：21-22.

［6］劉新宇，劉春娜，武紅梅，等.參黃頸康片對(duì)頸椎病的防治作用及機(jī)制研究［J］.中成藥，2010，32（4）：554-557.

［7］周紅海，韋 堅(jiān)，陳耀宇.益氣化瘀補(bǔ)腎法對(duì)頸椎病模型動(dòng)物椎間盤炎癥介質(zhì)的影響［J］.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，6（1）：6-8.

［8］吳茂文.中藥治療頸椎病的臨床概況［J］.天津藥學(xué)，2002，14（6）：22-23.

［9］邵文全.加味瓜蔞桂枝湯治療頸椎病實(shí)驗(yàn)觀察［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18（6）：1347-1348.

［10］陳宏賢，趙新梅.李俊岐.燈盞細(xì)辛注射液治療椎動(dòng)脈型頸椎病29例［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2008，29（2）：325-326.

［11］鄒燕燕.頸痛湯合β-七葉皂甙鈉治療神經(jīng)根型頸椎病40例療效觀察［J］.河北中醫(yī)，2009，31（8）：1181-1182.

［12］李 寧，謝興文.脊髓型頸椎病動(dòng)物模型及其功能測定研究進(jìn)展［J］.中國中醫(yī)骨傷科雜志，2007，15（2）：71-72.

R285.5

B

1001-1528（2011）07-1223-03

2010-10-16

遼寧省教育廳創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（LT2010065）；遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（20102139）

劉新宇（1976—），男，主治醫(yī)師，碩士學(xué)位，研究方向：藥理學(xué)及新藥開發(fā)。Tel：（0416）4197208

*通信作者：劉春娜（1977—），女，副教授，博士學(xué)位，主要從事中藥藥理工作。E-mail：springnana@tom.com