脂氧酶12遺傳變異與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性研究

張 志，宋文廣，王瑞林，楊照環(huán)，陳 紅，劉 靜，付占昭

胃癌是嚴(yán)重影響我國(guó)人民健康和生活質(zhì)量的惡性腫瘤之一。其發(fā)病率和病死率在不同國(guó)家或同一國(guó)家的不同地區(qū)都有很大的差別。在我國(guó)，特別是農(nóng)村其病死率一直居于各種惡性腫瘤之首。目前普遍認(rèn)為胃癌的發(fā)生是環(huán)境和基因相互作用的結(jié)果。其中，環(huán)境是外因，而遺傳因素是內(nèi)因。已經(jīng)有很多研究證明了個(gè)體某些基因遺傳變異在胃癌發(fā)生過程中的重要作用。這些基因包括炎癥相關(guān)基因、致癌物代謝基因、DNA修復(fù)基因、細(xì)胞周期和凋亡基因等［1－7］。

脂氧酶12(LOX12)是重要的多不飽和脂肪酸代謝基因，其代謝產(chǎn)物在癌癥進(jìn)展中發(fā)揮著重要的作用［8－9］。目前，已經(jīng)在許多腫瘤發(fā)現(xiàn)該基因的過度表達(dá)［10－11］。位于該基因啟動(dòng)子區(qū)的遺傳多態(tài)，有可能改變其轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而影響該基因?qū)Χ嗖伙柡椭舅岬拇x。本研究旨在利用病例對(duì)照研究的方法，探討位于LOX12基因啟動(dòng)子區(qū)的－183G＞A單核苷酸多態(tài)與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2004年12月—2009年12月在唐山市工人醫(yī)院就診的胃癌患者100例為研究對(duì)象，其中男66例，女34例;年齡38～64歲。均為漢族人。所有病例均經(jīng)病理學(xué)確診。同時(shí)選取同時(shí)期唐山市健康體檢人群119例為對(duì)照組，均無(wú)腫瘤病史和體征，其中男76例，女43例;年齡34～68歲。兩組男女比例及年齡分布具有均衡性。

1.2 方法 研究對(duì)象均捐獻(xiàn)2 ml靜脈血以分離DNA進(jìn)行基因分型。

1.3 LOX12基因型分析 以聚合酶鏈反應(yīng)－限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性 (PCR－RFLP)方法對(duì)LOX12－183 A＞G(rs312466)進(jìn)行基因分型。PCR擴(kuò)增引物序列為:正向引物:5'－CTT CCC GGG AGG TCC AGG AAG GTC CCG CCG CAC C－3'和含錯(cuò)配位點(diǎn)的反向引物:5'－CAG AGCGGT AGA GCC GGC TGT GGG GACTGG CTG TTC－3'(下劃線堿基由G錯(cuò)配為T，引入Mbo II酶切位點(diǎn))。PCR產(chǎn)物大小為120 bp。在25μl PCR反應(yīng)混合液中含0.1μg模板DNA、0.4μmol/L各引物、0.1 mmol/L dNTP、1.5 mmol/L MgCl2、1.0 U Taq聚合酶。PCR條件為:95℃預(yù)變性2 min后于94℃ 30 s、54℃ 30 s和72℃30 s進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。取10μl PCR產(chǎn)物與限制性核酸內(nèi)切酶MBOII于37℃溫育過夜。酶切產(chǎn)物于3%瓊脂糖凝膠電泳分析。LOX12基因－183A等位基因有1個(gè)MBO II酶切識(shí)別位點(diǎn)，產(chǎn)物有111 bp和24 bp兩個(gè)片段;－183G等位基因無(wú)酶切位點(diǎn)，故只有135 bp 1個(gè)片段;而雜合子則產(chǎn)生135 bp、111 bp和24 bp 3個(gè)片段。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以比值比 (odds ratio，OR)及其95%可信區(qū)間 (confidence interval，CI)表示相對(duì)危險(xiǎn)度，以p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

LOX12－183G和－183A等位基因頻率在對(duì)照組及胃癌組中分別為59.7%、40.3%和48.0%、52.0%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (p＜0.05)。－183GG、AG和AA三種基因型頻率在胃癌組分別為25.0%、49.0%和29.0%，對(duì)照組為38.7%、42.0%和19.3%，基因型分布均符合Hardy－Weinberg平衡定律(P=0.65，見表1)。Logistic回歸分析顯示，與GG基因型攜帶者相比，AA基因型顯著增加胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)〔OR=2.36;95%CI(1.12，5.70)〕。未發(fā)現(xiàn)AG基因型與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。

表1 LOX12基因型在對(duì)照組和胃癌組中的分布［n(%)］Table 1 The distribution of LOX12 genotype in cases and controls

3 討論

LOX12是花生四烯酸代謝通路的關(guān)鍵酶之一，其代謝終產(chǎn)物為12羥基二十碳四烯酸 (12－HETE)。12－HETE是人體內(nèi)重要的生物活性分子，參與機(jī)體的許多生理過程，它可以刺激蛋白激酶C和促進(jìn)許多生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的生物反應(yīng)，從而在腫瘤生長(zhǎng)過程中調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的激活和癌基因的誘導(dǎo)［8，12］。由于LOX12的代謝產(chǎn)物在細(xì)胞增殖、凋亡以及分化中的重要作用，該基因的表達(dá)及活性將直接影響細(xì)胞增生和凋亡，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究報(bào)道了位于該基因編碼區(qū)的261 Arg＞Gln變異直接影響該酶的反應(yīng)活性，而且該變異顯著改變個(gè)體對(duì)食管鱗癌的易感性［13］。

本研究采用病例對(duì)照的研究方法調(diào)查了位于LOX12啟動(dòng)子的遺傳多態(tài)對(duì)胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的影響。并發(fā)現(xiàn)LOX12啟動(dòng)子區(qū)－183G＞A多態(tài)顯著增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，特別是－183純合AA基因型攜帶者增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)約2.4倍。已經(jīng)有研究表明，12－HETE和 (或)LOX12的過度表達(dá)和許多腫瘤，包括胃癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)［14－16］。本研究和這些結(jié)果正好吻合。針對(duì)LOX12的抑制劑可以抑制腫瘤增生，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，預(yù)防腫瘤的形成［17－18］。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)花生四烯酸代謝基因LOX12啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)可能是胃癌的重要遺傳易感因素，這個(gè)研究結(jié)果為花生四烯酸代謝基因參與腫瘤的發(fā)生提供了重要的遺傳學(xué)證據(jù)。

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