蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22作用的影響

李志軍

南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南省南陽(yáng)市 473061

蘆薈是一種多年生百合科草本植物，原產(chǎn)非洲沿海。我國(guó)從唐朝開始就記載了蘆薈在醫(yī)藥方面的應(yīng)用情況。近年來(lái)，蘆薈因其具有治療灼傷、便秘、胃腸疾病及美容等良好功效而受到世人青睞。蘆薈中含有的蘆薈多糖（aloe polysaccharide）具有消炎、抗輻射、抗艾滋病毒、抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫等藥理作用。但以往的研究多集中于蘆薈多糖自身的抗腫瘤研究，對(duì)于蘆薈多糖與抗腫瘤藥物合用后是否具有增效減毒作用，相關(guān)的報(bào)道并不多。為此筆者在建立小鼠荷瘤H22移植實(shí)體型及腹水型模型的基礎(chǔ)上，觀察了蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶（Fluorouracil）治療小鼠荷瘤H22的影響，并通過(guò)研究小鼠外周血細(xì)胞數(shù)、碳粒廓清、凝集素生成、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、血清IL－2及IF－γ水平等，考察其毒副作用的變化情況。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試劑 蘆薈多糖（由山東康保生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)070322，含量不低于99.32%），使用時(shí)以生理鹽水配成適當(dāng)濃度用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；氟尿嘧啶注射液（由河南安源第一制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)060512）；印度墨汁（由北京篤信精細(xì)制劑廠生產(chǎn)，批號(hào)060915）；DNCB（2，4－二硝基氯苯，由上海華碩精細(xì)化學(xué)品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)061128）；IL－2及IF－γ ELISA檢測(cè)試劑盒（由華美生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）。其余試劑均為分析純。

1.2 動(dòng)物與儀器 昆明小鼠（SPF級(jí)），體重（22±2.0）g，雄性（由河南醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第410115號(hào)）；小鼠荷瘤 H22，由河南大學(xué)藥學(xué)院杜鋼軍博士提供。752S紫外可見分光光度計(jì)（由上海精科實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)）；550型酶標(biāo)儀（Bio－RAD公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 腫瘤模型［1］將H22接種于昆明種小鼠體內(nèi)，取接種8～10d生長(zhǎng)良好的H22小鼠腹水，稀釋為5×106／ml，實(shí)體型模型以0.2ml／只接種于小鼠右側(cè)腋窩皮下，腹水型模型以0.2ml／只接種于小鼠腹腔。

2.2 血細(xì)胞數(shù)及血清IL－2及IF－γ水平檢測(cè) 血細(xì)胞按照常規(guī)方法計(jì)數(shù)，IL－2及IF－γ的檢測(cè)按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

2.3 蘆薈多糖對(duì)小鼠碳粒廓清的影響［2］將小鼠接種實(shí)體瘤，分組及給藥同“2.2”，同時(shí)增設(shè)一組不接種腫瘤的小鼠為正常對(duì)照組。全程給藥結(jié)束后次日，各組小鼠均尾靜脈注射稀釋的印度墨汁0.1ml·10g－1，注射后1min和10min分別從小鼠眶靜脈采血20μl，吹入2ml 0.1%NaHCO3溶液中，以等容量小鼠正常血溶于2ml 0.1%的NaHCO3溶液做為空白液，用550型酶標(biāo)儀630nm測(cè)吸收度（A），計(jì)算吞噬指數(shù) K［吞噬指數(shù) K＝（lgA1－lgA2）／（T2－T1）］。其中A1為第1次采血的吸收度，A2為第2次采血的吸收度，T1為第1次采血的時(shí)間，T2為第2次采血的時(shí)間。

2.4 蘆薈多糖對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響［2］

將小鼠接種實(shí)體瘤，并于接種腫瘤當(dāng)日用7%DNCB 20μl／只皮下注射對(duì)小鼠致敏激發(fā)，激發(fā)后次日開始給藥，分組及給藥均同“2.4”。末次給藥后6h，右耳涂30μl 7%DNCB，左耳涂等容量丙酮對(duì)小鼠致敏攻擊。16h后將小鼠處死，剪下兩耳，用9mm打孔器打下耳片，稱重，以左右兩耳片重量差值為腫脹度。

2.5 蘆薈多糖對(duì)小鼠血清凝集素的影響 將小鼠接種實(shí)體瘤，分組及給藥均同對(duì)“2.4”。腫瘤接種后第4d，每鼠腹腔注射10%羊紅細(xì)胞（SRBC）懸液0.5ml，全程給藥結(jié)束后次日，小鼠眶靜脈采血，離心取上層血清，置水浴滅活后用生理鹽水以2倍比例稀釋成8個(gè)濃度，每個(gè)濃度血清取0.5ml置于試管中，再加0.5ml 0.5%的SRBC懸液混勻，置37℃孵箱溫育3h，觀察血球凝集程度，計(jì)算抗體積數(shù)［抗體積數(shù)＝∑（S1＋2S2＋3S3＋…＋nSn）］。其中n代表對(duì)倍稀釋的指數(shù)，S代表凝集程度的級(jí)別。

3 結(jié)果

3.1 蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22的影響與對(duì)照組比較，低劑量蘆薈多糖組對(duì)實(shí)體型腫瘤在瘤重變化方面有顯著差異（P＜0.05），但由于抑瘤率小于40%，不具有抗腫瘤意義。高劑量蘆薈多糖組則在瘤重變化方面存在非常顯著性差異（P＜0.01），抑瘤率大于40%，說(shuō)明高劑量蘆薈多糖在治療實(shí)體型腫瘤方面具有抗腫瘤意義。而對(duì)于腹水型腫瘤，雖然低劑量蘆薈多糖組和高劑量蘆薈多糖組在存活期方面與對(duì)照組有顯著性差異（P＜0.05），但生命延長(zhǎng)率小于75%，不具有抗腫瘤意義。這說(shuō)明蘆薈多糖單獨(dú)應(yīng)用，對(duì)小鼠荷瘤H22實(shí)體型及腹水型腫瘤的作用是存在差異的。而氟尿嘧啶組、低劑量蘆薈多糖與氟尿嘧啶組和高劑量蘆薈多糖與氟尿嘧啶組與對(duì)照組比較。在瘤重變化和存活期方面存在非常顯著的差異（P＜0.01），對(duì)實(shí)體型腫瘤的抑瘤率均大于40%，對(duì)腹水型腫瘤的生命延長(zhǎng)率均大于75%，具有抗腫瘤意義。其中低劑量蘆薈多糖與氟尿嘧啶組協(xié)同系數(shù)分別為0.834 4和0.897 3，均小于1，高劑量蘆薈多糖與氟尿嘧啶組的協(xié)同系數(shù)分別為1.391和1.428，均大于1，說(shuō)明低劑量蘆薈多糖與氟尿嘧啶在治療小鼠荷瘤H22實(shí)體型及腹水型方面均有增強(qiáng)療效的協(xié)同作用，可以共同延長(zhǎng)腹水型小鼠的存活時(shí)間及阻止實(shí)體瘤的生長(zhǎng)（見表1）。

表1 蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22的影響（±s，n＝10）

表1 蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22的影響（±s，n＝10）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與氟尿嘧啶組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別 劑量（g·kg－1） 實(shí)體型瘤重（g） 抑瘤率（%）腹水型存活期（d） 延長(zhǎng)率（%）對(duì)照組 － 2.46±0.40 － 14.2±2.4－氟尿嘧啶組 0.015 1.38±0.28 43.49 29.1±4.1 104.93低劑量蘆薈多糖組 0.050 1.88±0.34 23.58 20.8±2.7 46.48高劑量蘆薈多糖組 0.100 1.41±0.22 42.68 23.2±2.6 63.38低劑量蘆薈多糖＋氟尿嘧啶組 0.050／0.015 0.88±0.22＃ 64.23＊ 47.5±3.9＊ 164.08＊高劑量蘆薈多糖＋氟尿嘧啶組 0.100／0.015 1.10±0.16＃＃ 55.28＊＊ 33.3±4.5＊＊ 134.51＊＊

3.2 蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22毒性的影響 蘆薈多糖具有免疫增強(qiáng)作用，其可以劑量依賴性對(duì)抗氟尿嘧啶引起的H22小鼠外周血細(xì)胞數(shù)減少，阻止碳粒廓清、凝集素生成、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力降低、升高其血清IL－2及IF－γ水平（具體情況見表2、3）。

表2 蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22外周血細(xì)胞數(shù)的影響（±s，n＝10）

表2 蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22外周血細(xì)胞數(shù)的影響（±s，n＝10）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.01；與氟尿嘧啶組比較，＃P＜0.01。

組別 劑量（g·kg－1） 血細(xì)胞（×109／L）血小板對(duì)照組 － 111.4±8.7 6.7±0.8紅細(xì)胞 白細(xì)胞668.1±24.8氟尿嘧啶組 0.015 43.3±5.3＊ 2.4±0.7＊ 431.3±22.6＊低劑量蘆薈多糖組 0.050 125.7±8.4＃ 7.2±0.8＃ 663.5±26.4＃高劑量蘆薈多糖組 0.100 171.3±5.6 8.1±0.3 660.4±20.2低劑量蘆薈多糖＋氟尿嘧啶組 0.050／0.015 95.8±8.8＃ 5.8±0.6＃ 612.2±24.3＃高劑量蘆薈多糖＋氟尿嘧啶組 0.100／0.015 130.7±4.6 6.0±0.4662.5±25.5

表3 蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22免疫功能的影響（±s，n＝10）

表3 蘆薈多糖對(duì)氟尿嘧啶抗小鼠荷瘤H22免疫功能的影響（±s，n＝10）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與氟尿嘧啶組比較，＃P＜0.05，ΔP＜0.01。

組別 劑量（g·kg－1） 碳粒廓清K 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)耳腫脹凝集素抗體積數(shù)血清細(xì)胞因子（pg·ml－1）IL－2 IF－γ正常對(duì)照組 － 0.046 8±0.003 0＊Δ 18.2±2.5＊Δ 17.1±2.1＊Δ 35.4±2.8＊Δ 48.7±4.2＊Δ對(duì)照組 － 0.033 3±0.003 2＃ 11.8±2.3＃ 10.2±1.6＃ 21.6±2.1＃ 33.4±3.7＃氟尿嘧啶組 0.015 0.020 2±0.003 1＊ 6.2±2.3＊ 5.9±1.4＊＊ 12.3±1.8＊＊ 15.4±3.5＊＊低劑量蘆薈多糖組 0.050 0.043 4±0.002 6＊Δ 16.9±2.1＊Δ 15.5±1.4＊Δ 30.5±2.5＊Δ 43.6±4.1＊Δ高劑量蘆薈多糖組 0.100 0.059 6±0.002 2＊Δ 17.8±2.1＊Δ 16.3±2.1＊Δ 36.4±3.0＊Δ 53.7±4.2＊Δ低劑量蘆薈多糖＋氟尿嘧啶組 0.050／0.015 0.039 4 0.002 3＊Δ 14.4±2.0＊Δ 14.8±1.5＊Δ 29.4±2.1＊Δ 41.8±4.3＊Δ高劑量蘆薈多糖＋氟尿嘧啶組 0.100／0.015 0.042 8±0.002 3＊Δ 16.9±1.6＊Δ 15.8±2.0＊Δ 32.5±2.2＊Δ 48.6±4.1＊Δ

4 討論

為了研究蘆薈多糖與化療藥物的聯(lián)合抗腫瘤作用，筆者研究了不同劑量的蘆薈多糖及蘆薈多糖協(xié)同氟尿嘧啶對(duì)小鼠荷瘤H22的抗腫瘤作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蘆薈多糖單獨(dú)使用對(duì)實(shí)體型腫瘤和腹水型腫瘤的抗腫瘤作用存在一定差異，但蘆薈多糖與氟尿嘧啶聯(lián)合使用后，對(duì)實(shí)體型和腹水型腫瘤均有明顯抗腫瘤作用。需要說(shuō)明的是，筆者在實(shí)驗(yàn)中選擇的蘆薈多糖的劑量，主要借鑒了其他文獻(xiàn)中蘆薈多糖對(duì)S180等腫瘤研究中采取的劑量［3～6］，在實(shí)驗(yàn)中不影響小鼠體重的增長(zhǎng)。同時(shí)，筆者觀察了蘆薈多糖對(duì)荷瘤小鼠免疫力的影響，發(fā)現(xiàn)蘆薈多糖單獨(dú)或聯(lián)合使用，均有免疫增強(qiáng)作用，并且可以劑量依賴性對(duì)抗氟尿嘧啶引起的H22小鼠外周血細(xì)胞數(shù)減少，阻止碳粒廓清、凝集素生成、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力降低、升高其血清IL－2及IF－γ水平，降低氟尿嘧啶的毒副作用。但低劑量蘆薈多糖與氟尿嘧啶的協(xié)同抗腫瘤作用似乎更為顯著，這一方面為筆者進(jìn)行蘆薈多糖與氟尿嘧啶協(xié)同抗腫瘤作用的臨床研究提供了初步依據(jù)，同時(shí)也說(shuō)明蘆薈多糖與氟尿嘧啶協(xié)同抗腫瘤與其對(duì)抗氟尿嘧啶的毒副作用的免疫增強(qiáng)作用并不平行。分析原因可能是由于蘆薈多糖與氟尿嘧啶協(xié)同抗腫瘤作用還存在其他機(jī)制。筆者在實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，不同的蘆薈多糖，其協(xié)同抗腫瘤作用及對(duì)抗化療藥物毒副作用的情況并不相同，這些筆者將在今后的報(bào)道中一一加以研究。

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