AW2鎮(zhèn)痛藥理作用的實(shí)驗研究

王思斯 姜忠良 匡文娟 王彥丁 楊云霞 王曙 朱玲△

(1.四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院,2.四川山和藥業(yè)有限公司,3.四川大學(xué)華西藥學(xué)院,四川 成都 610041)

阿魏為傘形科植物,世界上約有150種,現(xiàn)主要分布于地中海、中亞及其鄰近地區(qū);我國有26種1變種,主要分布于新疆[1-2]。新疆阿魏是常用維藥之一,可消食健胃,通經(jīng)止痛,祛風(fēng)寒,排泄多余黏液質(zhì),強(qiáng)筋健腦等,具有抗胃潰瘍作用,抗炎作用及免疫調(diào)節(jié)作用,用于食欲不振、胃痛、腦、筋之寒癥、癱瘓、口眼歪斜、手指震顫、耳、牙之疾[3-4]。AW2為新疆阿魏的樹脂經(jīng)蒸餾提取的揮發(fā)油,故命名為阿魏油。文獻(xiàn)報道阿魏揮發(fā)油對三種賀癬菌試驗有抑制作用[5]。本實(shí)驗主要對AW2是否具有鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行初步的研究,旨在對其進(jìn)一步開發(fā)和臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

小鼠,雌雄兼用,體重(20±2)g,由四川大學(xué)實(shí)驗動物中心提供,動物證號0020358,根據(jù)實(shí)驗性質(zhì)和性別分籠喂養(yǎng),自由采食飲水。電子稱、灌胃器、注射器、CS501型超級恒溫水浴、秒表等。

AW2,軟膠囊,內(nèi)含揮發(fā)油,黃色透明液體,具強(qiáng)烈而持久的蒜樣特異臭氣,味辛辣,有灼燒感,100g生藥提取10ml揮發(fā)油[6],批號080301,由四川大學(xué)藥學(xué)院提供;AW2高、中、低劑量組小鼠灌胃給藥體積均為0.2ml?10g-1(分別相當(dāng)于4,2,1 g(生藥量)?kg?d-1)給藥(以后文中出現(xiàn)AW2組的劑量均為生藥量),臨床擬定成人用劑量為 2ml(揮發(fā)油)?d-1。鹽酸嗎啡注射液,無色透明液體,規(guī)格：10 mg?ml-1,東北制藥集團(tuán)公司沈陽第一制藥廠生產(chǎn),批號071001;取 1ml嗎啡注射液,用9ml生理鹽水配制成濃度為 1 mg?ml-1的藥液,每只給藥體積為0.1ml?10g-1(相當(dāng)于10mg?kg?d-1),約相當(dāng)于臨床用量的10倍。冰醋酸(中國成都化學(xué)試劑廠)生理鹽水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司,批號：K081009B)乙醇(成都海星化工試劑廠,批號：0080908)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗[7]

取體重18～22 g健康小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為5組,每組 10只,分為陰性對照組、鹽酸嗎啡注射液組(10 mg?kg-1),AW2高、中、低劑量組(4、2、1 g?kg-1劑量組)。陰性對照組及AW2各劑量組小鼠灌胃給藥體積均為0.2ml?10g-1,鹽酸嗎啡腹腔注射體積為0.1ml?10g-1。灌胃給藥后30min腹腔注射 0.7%冰醋酸0.2ml?只-1,同時用秒表計時,記錄注射冰醋酸后15min內(nèi)的各鼠扭體反應(yīng)(腹部內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高)扭體次數(shù),計算各藥抑制率,抑制率=(對照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))/對照組扭體次數(shù)×100%。并記錄射冰醋酸后小鼠第一次出現(xiàn)扭體的時間,即閾值。

1.2.2 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗[7]

取雌性小鼠,放入(55±0.5)℃熱板測痛儀中,以舔后足作為疼痛反應(yīng)指標(biāo),預(yù)測小鼠藥前痛閾值以痛閾值小于30 s視為合格小鼠,將痛閾值合格的50只小鼠隨機(jī)分為5組,每組10只。分組及給藥方法同前。 給藥后 0、30、60、90、120、150min按照前法用秒表記錄痛閾值(凡痛閾值超過60 s者停止試驗,按60 s記)并計算痛閾提高率。痛閾值提高百分率(%)=[(藥后痛閾值-藥前痛閾值)/藥前痛閾值]×100%。

1.3 統(tǒng)計分析

2 結(jié)果

2.1 小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實(shí)驗結(jié)果

由表1可見,與陰性對照組比較,鹽酸嗎啡注射液組扭體首次出現(xiàn)的時間,有顯著性差異(P＜0.001);AW2各劑量組在扭體首次出現(xiàn)的時間與陰性對照組相比也有明顯的差異(P＜0.01)。從扭體次數(shù)來看,鹽酸嗎啡注射液組和陰性對照組相比有顯著性差異(P＜0.001);AW2各劑量組扭體次數(shù)與對照組相比有明顯差異(P＜0.01),且有量效趨勢,高劑量組作用較好,鎮(zhèn)痛作用抑制率大于50%。實(shí)驗重復(fù)三次,均得到相似結(jié)果。本實(shí)驗結(jié)果表明,采用扭體法,AW2各劑量組灌胃給藥可不同程度抑制化學(xué)刺激所致的小鼠扭體反應(yīng),有一定的鎮(zhèn)痛作用。另外,采用扭體法7個AW2劑量組給藥觀察,試驗后采用Bliss方法,AW2的鎮(zhèn)痛ED50為3.3342 g?kg-1,95%可信限為1.1458～9.7019 g?kg-1(未發(fā)表)。

表1 AW2對冰醋酸致小鼠疼痛的影響(,n=10)

表1 AW2對冰醋酸致小鼠疼痛的影響(,n=10)

注：與陰性對照組＊P＜0.05,＊＊P＜0.01,＊＊＊P＜0.001,與嗎啡組比較#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001。

組別 劑量(g?kg-1) 閾值(s) 扭體次數(shù)(15min) 抑制率(%)陰性對照組 - 2.182±0.759 56.700±9.922 0嗎啡組 0.01 12.610±3.870＊＊＊ 0.400±0.843＊＊＊ 99.32 AW2高劑量組 4 3.683±0.921＊＊＊### 27.400±13.721＊＊＊### 51.68 AW2中劑量組 2 3.190±1.067＊＊＊### 34.200±11.380＊＊＊### 39.68 AW2低劑量組 1 3.463±0.858＊＊### 35.800±9.271＊＊＊### 36.86

2.2 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實(shí)驗結(jié)果

本實(shí)驗條件下由表2表3可見：各時間段嗎啡組痛閾值都有明顯的提高,都有明顯的鎮(zhèn)痛作用,與陰性對照組相比有顯著性差異(P＜0.05～0.001)。AW2高、中、低三個劑量組給藥后痛閾均有一定程度的提高,對熱板法所致疼痛均有一定程度的鎮(zhèn)痛作用,但與陰性對照組相比,僅120min時段后高、低劑量組較之有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05),其余時段并無顯著性差異(P＞0.05)。本實(shí)驗結(jié)果提示,對于熱板法所致的小鼠疼痛,本實(shí)驗所用劑量下AW2鎮(zhèn)痛作用較輕微,無統(tǒng)計學(xué)意義,但其作用呈量效趨勢,增大劑量實(shí)驗可能鎮(zhèn)痛作用較好。

表2 AW2對熱刺激致小鼠疼痛的影響(,n=10)

表2 AW2對熱刺激致小鼠疼痛的影響(,n=10)

注：與陰性對照組比,＊表示p＜0.05,＊＊p＜0.01;與嗎啡組對比,#表示p＜0.05。

組別 劑量(g?kg-1)痛閾值(s)0min 30min 60min 90min 120min 150min陰性對照組 - 22.100±6.488 41.400±13.410 41.400±17.456 43.900±17.527 44.300±17.833 47.200±16.444嗎啡組 0.01 16.400±7.214 57.500±7.906＊＊ 59.900±0.316＊ 60.000±0＊＊ 60.000±0＊ 60.000±0＊AW2高劑量組 4 23.100±7.015 49.400±12.1216 51.300±2.737# 54.200±9.1869 52.000±13.944 60.000±0＊AW2中劑量組 2 23.300±6.111# 43.800±16.8312#40.000±15.832# 44.700±18.939# 52.800±11.717 50.60±14.025#AW2低劑量組 1 24.000±5.099 50.800±13.315 53.800±12.246 53.600±13.566 59.700±0.9487＊ 60.000±0＊

表3 AW2對熱刺激致小鼠疼痛的影響(,n=10)

表3 AW2對熱刺激致小鼠疼痛的影響(,n=10)

注：與陰性對照組比,＊、＊＊、＊＊＊表示 p＜0.05,p＜0.01,p＜0.001。

給藥后痛閾提高值(率)(s(%))組別 劑量(g?kg-1)30min 60min 90min 120min 150min值率值率值率值率值率陰性對照組 - 20.2±14.97 1.1206±0.8948 23.3±15.28 1.1635±1.0135 23.1±18.21 1.3312±1.4185 22.2±15.27 1.0218±0.7486 25.9±17.361.4493±1.3038嗎啡組 0.01 41.1±8.24 3.0226±1.4752＊＊ 43.5±7.38 3.3314±1.8480＊＊ 43.6±7.21 3.3351±1.8432＊ 43.6±7.21 3.3351±1.8432＊＊ 43.6±7.21 3.3351±1.8432＊AW2高劑量組 4 23.6±11.61 1.2893±0.6984 28.4±12.33 1.4032±0.8142 31.1±6.33 1.4998±0.6629 29.7±16.77 1.6388±1.3678 36.9±7.02 1.8931±1.1309 AW2中劑量組 2 20.5±15.19 0.9488±0.8457 17.2±17.28 0.9272±1.1687 19.1±19.1 0.9547±1.0944 29.5±12.08 1.4036±0.8062 27.3±12.011.2222±0.6889 AW2低劑量組 1 27.4±13.4 1.2646±0.7730 29.8±11.35 1.3103±0.5982 29.7±13.66 1.3587±0.9363 35.7±4.42 1.6190±0.7094 36±5.10 1.6421±0.7713

3 討論

本文采用兩個經(jīng)典疼痛模型——醋酸致小鼠扭體法與熱板法來考察AW2是否具有鎮(zhèn)痛作用。醋酸致小鼠扭體模型是通過化學(xué)刺激造成小鼠腹腔急性炎癥反應(yīng),而熱板法屬于反射性測痛模型。實(shí)驗表明采用扭體法,AW2各劑量組灌胃給藥可不同程度抑制化學(xué)刺激所致的小鼠扭體反應(yīng),鎮(zhèn)痛效果和劑量有一定的相關(guān)性,隨著劑量的增加,鎮(zhèn)痛效果增強(qiáng)。采用Bliss方法,AW2的鎮(zhèn)痛 ED50為 3.3342 g?kg-1。AW2高、中、低劑量組對物理制熱的小鼠都有一定程度的鎮(zhèn)痛作用,且作用有一定的量效趨勢,但不及嗎啡組,鎮(zhèn)痛作用輕微,可能增加劑量后作用相對較好。實(shí)驗表明對于不同原因?qū)е碌奶弁?AW2鎮(zhèn)痛作用不盡相同,因此其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。AW2在鎮(zhèn)痛作用的研究為指導(dǎo)臨床合理用藥提供了科學(xué)依據(jù),為研制較為理想的戒毒或抗腫瘤新藥提供了藥理學(xué)基礎(chǔ)。

1 李曉瑾,劉力.稀土與西部資源開發(fā)與利用[M].北京：中國輕工業(yè)出版社,2003,302-307.

2 單人驛,余孟蘭.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社,1992,85-117.

3 中國藥典2005年版一部[S].2005,131-132.

4 維吾爾藥材標(biāo)準(zhǔn)上冊[S].1993,133-135.

5 譚秀芳,李曉瑾,杜翠玲,等.藥用植物阿魏概況及研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志,2006,78：15-15.

6 司書毅,張月琴.藥物篩選——方法與實(shí)踐[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2007,281-281.

7 陳奇,沈映君,劉青云,等.中藥藥理學(xué)實(shí)驗第1版[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2001,24-24.