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    HPLC法和UV分光光度法測定阿奇霉素片溶出度的方法比較

    2011-05-07 06:50:42齊曉飛趙曉冬
    實用藥物與臨床 2011年4期
    關(guān)鍵詞:出度光度法分光

    齊曉飛,趙曉冬

    阿奇霉素片溶出度測定最早采用微生物檢定法,不僅費時、繁瑣,而且工作量較大。用高效液相色譜法測定阿奇霉素片溶出度較為準(zhǔn)確、省時,但因色譜柱堿性較大,不易得到廣泛使用,筆者參照有關(guān)資料,重點考察了紫外分光光度法測定阿奇霉素片溶出度,并將測定的結(jié)果與高效液相色譜法進(jìn)行比較[1],現(xiàn)報道如下。

    1 儀器與試藥

    ZRS-4智能溶出試驗儀,超聲波振蕩器(上海聲波儀器廠),RZOOD電子天平,島津UV-240紫外分光光度儀,島津LC-10AD高效液相色譜儀。阿奇霉素片規(guī)格 250 mg,批號:T-1、T-2、T-3;規(guī)格:500 mg,批號 T-4、T-5、T-6。阿奇霉素二水合物對照品由中國生物制品檢定所提供。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 紫外分光光度法測定阿奇霉素片溶出度方法的建立

    2.1.1 顯色方法與波長的選擇 取本品適量,加磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)溶解,并稀成約含55 U/mL的溶液,過濾,取續(xù)濾液5 mL,精密加入硫酸溶液(75→100)5 mL,混勻,自然冷卻,按照紫外分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄XC),在420~520 nm波長范圍進(jìn)行掃描,其最大吸收波長在(482±2)nm,測定波長確定為(482±2)nm。

    2.1.2 吸收度和濃度的線性關(guān)系 精密稱取阿奇霉素二水合物標(biāo)準(zhǔn)品適量置100量瓶中,加適量甲醇溶解后,加磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)至刻度,再依次稀釋成 18、36、54、72、90 U/mL 濃度的溶液,以溶劑為空白液,按照紫外分光光度法,在(482±2)nm波長處分別測定吸收度值,以濃度與吸收度進(jìn)行回歸計算,得回歸方程:A=0.007 5C-0.017,r=0.999 1。結(jié)果表明,阿奇霉素在17.94~89.69 U/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    2.1.3 輔料對吸收度的影響 按處方配制,精密稱取輔料適量,加磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)搖勻,濾過,取續(xù)濾液,依照顯色法進(jìn)行顯色,并在420~520 nm波長處測定吸收度,結(jié)果表明,輔料無吸收,對測定結(jié)果無影響。

    2.1.4 回收率試驗 精密稱取阿奇霉素原料適量,再依據(jù)處方比例加入輔料,加磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)溶解,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,依照顯色法進(jìn)行顯色,在(482±2)nm波長處測定吸收度,并計算其回收率。結(jié)果見表1。

    表1 回收率試驗(n=6)

    2.1.5 溶出曲線的制備 取1片阿奇霉素片放入900 mL 溶劑中,在規(guī)定時間(5、10、20、30、45、60 min)經(jīng)100 r/min攪拌后,取10 mL濾過,隨即補(bǔ)加預(yù)熱至37℃的溶劑10 mL,取續(xù)濾液5 mL,加硫酸溶液5 mL混勻,在(482±2)nm波長處測定吸收度,計算出各時間的累計溶出量和RSD值,結(jié)果見表2。

    表2 溶出曲線

    2.1.6 溶出度方法的建立 取本品1片于900 mL溶劑中,以磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)為溶劑,按照溶出度測定法第二法(中國藥典2005年版二部附錄XC)測定。100 r/min攪拌。45 min取樣過濾,取續(xù)濾液10 mL,用溶劑稀釋成55 U/mL,精密量取5 mL加硫酸溶液5 mL(75~100),混勻,放30 min自然冷卻。按照紫外分光光度法,在(482±2)nm波長處立即測定吸收度。另取供試品10片研細(xì),混勻,稱取適量(相當(dāng)于1片的重量)用甲醇溶解,用磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)稀釋成55 U/mL作為對照品溶液,同法測定計算出每片的溶出量。結(jié)果見表3。

    2.2 高效液相色譜法測定阿奇霉素片溶出度取本品,照溶出度測定法[2](中國藥典2005年版二部附錄XC第二法)測定,以磷酸鹽緩沖液(pH 6.5)900 mL為溶劑,轉(zhuǎn)速為75 r/min,45 min后取溶液10 mL濾過,取續(xù)濾液5 mL,加堿液0.2 mL搖勻,作為供試品溶液(規(guī)格250 mg);或取續(xù)濾液0.4 mL搖勻,作為供試品溶液(規(guī)格500 mg)。按高效液相色譜法外標(biāo)法測定,色譜柱:ODS-50,流動相:0.04MK2HPO4(pH 11.0)緩沖液-乙腈(400∶600),流速:1.0 mL/min,檢測波長:215 nm,柱溫:40℃,進(jìn)樣量:20 μL。另取阿奇霉素二水合物標(biāo)準(zhǔn)品適量(約相當(dāng)于阿奇霉素28 mg)置100 mL量瓶中,加溶劑并稀釋至刻度,搖勻,精密量取5 mL置10 mL量瓶中,加堿液0.2 mL混勻,作為對照品溶液。同法操作,計算出每片的溶液出量。結(jié)果見表4。

    2.3 高效液相色譜法及紫外分光光度法測定阿奇霉素片溶出度的方法比較 分別用高效液相色譜法及紫外分光光度法測定阿奇霉素片規(guī)格250 mg及500 mg各3批樣品的溶出度,結(jié)果見表4及表5。結(jié)果表明,兩種方法測定的溶出度基本一致。

    表4 高效液相色譜法測定阿奇霉素片溶出度

    表5 紫外分光光度法測定阿奇霉素片溶出度結(jié)果

    3 討論

    3.1 高效液相色譜法及紫外分光光度法測得的阿奇霉素片溶出量的百分含量基本一致,并且誤差較小,方法簡便,但高效液相色譜法流動相中緩沖液的pH值較高,對柱子的選擇性要求高,國內(nèi)不易達(dá)到廣泛使用。而紫外分光光度法條件限制不高,測定的結(jié)果與高效液相色譜法的結(jié)果基本一致,并且其他各項實驗條件均符合實驗要求。

    3.2 紫外分光光度法中加硫酸液顯色,反應(yīng)時間的長短及硫酸質(zhì)量優(yōu)劣等對顏色的深淺有一定的影響,操作時應(yīng)嚴(yán)格掌握。

    [1] 高燕霞,張菁,張哲峰,等.阿奇霉素的兩種含量測定方法比較[J].中國抗菌藥物雜志,2000,25(5):388.

    [2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.二部.2005.

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