RP-H PLC法測定復方美登木片中重樓皂苷的含量

趙琪鐘 孔凡建 李曉梅

（普洱市食品藥品檢驗所，云南 普洱 665000）

RP-H PLC法測定復方美登木片中重樓皂苷的含量

趙琪鐘 孔凡建 李曉梅

（普洱市食品藥品檢驗所，云南 普洱 665000）

目的：建立測定復方美登木片中重樓皂苷含量的反相高效液相色譜法 （reverse phase-high performance liquid chromatography，RP-HPLC）方法。方法：色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（42∶58）；流速0.8 mL/min；檢測波長為203 nm，柱溫35℃。結果：結果表明重樓皂苷I在0.304 0～ 3.040 0μg范圍內呈良好的線性關系（r=0.999 9），平均回收率為103.21%（n=9），RSD=1.26%;重樓皂苷Ⅱ在0.308 0～3.080 0 μg范圍內呈良好的線性關系（r=0.999 9），平均回收率為97.98%（n=9），RSD=2.56%。結論：本法操作簡單、靈敏、準確，可用于復方美登木片的質量控制。

反相高效液相色譜法；復方美登木片；重樓皂苷；含量測定

復方美登木片是普洱市民族傳統(tǒng)醫(yī)藥研究所在挖掘、搶救民族民間中草藥過程中，研發(fā)、篩選出來的用于治療乳腺小葉增生的中藥復方制劑，為拉祜族驗方，由美登木、重樓等六味傳統(tǒng)中藥組成。原醫(yī)院制劑對方中重樓采用薄層色譜法鑒別，為更好地控制該制劑質量，本文采用RP-HPLC法測定復方美登木片中主要有效成分重樓中皂苷I、皂苷II的含量，為更好地控制該產品質量提供檢測方法。

1 儀器與試藥

美國Agilent-1200高效液相色譜儀，帶四元泵；DAD二級管陣列檢測器，塞多利斯電子天平BS210S（德國）。

乙腈（色譜純，F(xiàn)isher，USA），乙醇（分析純），水為超純水。重樓皂苷Ⅰ對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，含量測定用，批號：111590-200402）；重樓皂苷Ⅱ對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，含量測定用，批號：111591-200402）；復方美登木片3批（普洱民族傳統(tǒng)醫(yī)藥研究所提供，批號：090401，090402，090403）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）柱；流動相：乙腈-水（42∶58）；流速0.8 mL/min；檢測波長為203 nm[1]，柱溫 35℃；進樣量：10 μL；理論板數(shù)按重樓皂苷Ⅰ峰計算應不低于4 000；陰性樣品無干擾（見圖1）。

2.2 對照品儲備液的制備

精密稱取在40℃減壓干燥2 h的重樓皂苷Ⅰ對照品和重樓皂苷Ⅱ對照品適量，用乙醇制成每1 mL含0.152 mg的溶液，即得。

圖1 對照品（A）、樣品（B）、陰性對照（C）的HPLC色譜

2.3 供試品溶液的制備

取復方美登木片20片（批號：090402），除去薄膜衣，精密稱定，研細，混合均勻，取以上供試品約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25 mL，稱定重量，振搖混勻，超聲處理（工作頻率233 KHz，250 W）30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻后靜置。過濾，棄去初濾液，續(xù)濾液用0.45 μm的濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液

按樣品處方比例制備不含重樓的陰性樣品溶液，照上述供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

2.5 線性關系的考察

精密稱取重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ對照品適量，置量瓶中，加甲醇制成每mL含重樓皂苷152.0 μg的溶液和含重樓皂苷Ⅱ154.0 μg的溶液，即得。分別進樣2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 μL，以進樣量（μg）橫坐標，面積為縱坐標，得重樓皂苷Ⅰ回歸方程Y=121.062 21 X-3.306 83（r=0.999 9）結果表明重樓皂苷Ⅰ在0.304 0～3.040 0 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系；重樓皂苷Ⅱ回歸方程Y=92.379 56 X-1.841 303（r=0.999 9）結果表明重樓皂苷Ⅱ在0.308 0～3.080 0 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.6 空白試驗

取“2.4”項陰性樣品溶液，照含量測定方法制成供試液，進樣20 μL測定，未檢出重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ。且在與重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ對照品保留時間相對應的位置上也未檢出樣品峰，結果表明該色譜條件下陰性無干擾。

2.7 精密度試驗

取對照品儲備溶液照含量測定方法測定，連續(xù)進樣6針，進樣10 μL，以峰面積計算，結果重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ總量的RSD分別為0.723%、0.281%（n=6）。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取復方美登木片（批號：090402）20片，除去薄膜衣，精密稱定，研細，混合均勻，精密稱取約2 g照含量測定方法制成供試液，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進樣，進樣10 μL，以重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ總峰面積計算，結果RSD為0.505%，說明樣品在12 h內穩(wěn)定。

2.9 重復性試驗

取復方美登木片（批號：090402）50片，除去薄膜衣，精密稱定，研細，混合均勻，精密稱取6份各約2 g，照含量測定方法制成供試液，進樣10 μL，以峰面積計算含量，結果重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ總量的RSD為0.455%，（n=6）

2.10 加樣回收率試驗

取復方美登木片（批號：090402）30片，除去薄膜衣，精密稱定，研細，混合均勻，稱取9份，取樣量分別約為1.0 g，精密稱定，分置具塞錐形瓶中，分別加入重樓皂苷Ⅰ和重樓皂苷Ⅱ對照品溶液1.5、2.0、3.0 mL（每mL含重樓皂苷Ⅰ0.92 mg和重樓皂苷Ⅱ0.52 mg），放置揮干，精密加乙醇25 mL，稱定重量，振搖混勻，超聲（工作頻率233 KHz，250 W）提取30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻后靜置。進樣前過濾，棄去初濾液，續(xù)濾液用0.45 μm的濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。依法操作，進樣10 μL，分別測定，計算回收率，結果見表1、2。

表1 重樓皂苷Ⅰ回收率測定結果

表2 重樓皂苷Ⅱ回收率測定結果

表3 復方美登木片3批樣品測定結果（n=2）

2.10 樣品測定

取不同批號（3批）樣品，按“2.3”項下方法制備所需的供試品溶液，在“2.1”色譜條件下，測定其峰面積（每批平行測定3份），并樣品中重樓皂苷的含量，結果見表3。

3 討論

3.1 重樓具有清熱解毒，消腫止痛的功效，《中國藥典》2010版記載有小毒，且其在治療乳腺小葉增生的復方美登木片中為主藥之一，為了臨床用藥安全，有必要采用更好的方法對其質量進行監(jiān)控。

3.2 試驗過程中曾考察過超聲處理時間分別為20、30、40 min，結果表明，樣品超聲30 min已經提取完全，故含量測定方法超聲提取時間選擇為30 min。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典2010年版（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：243.

Content Determination of Paridis Saponins in Compound Maytenus Tablets by RP-HPLC

Zhao Qizhong，Kong Fanjian，Li Xiaomei（The Institute for Food and Drug Control of Puer City，Yunnan Puer 665000，China）

Objective:To establish a method for the content determination of paridis saponins in compound maytenus tablets by RP-HPLC.Methods:HPLC was performed to determine the content of paridis saponins using Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase was acetonitrile-H2O（42∶58）.The flow rate was 1.0 mL/min.The detection wavelength was at 203 nm.Results:The linearity of paridis saponins I was within the range of 0.304 0～3.040 0 μg（r=0.999 9），and the average recovery was 103.21%（n=9，RSD=1.26%）.The linearity of paridis saponinsⅡwas within the range of 0.308 0～3.080 0 μg（r=0.999 9），and the average recovery was 97.98% （n=9，RSD=2.56%）.Conclusion:This method is simple，sensitive and accurate，and can be used for the quality control of compound maytenus tablets.

RP-HPLC；Compound Maytenus Tablets；Paridis Saponins；Content Determination

2011-07-08）

趙琪鐘，男，主管中藥師，研究方向：中藥質量控制。E-mail:ynsmzqz@126.com