豬鏈球菌病的實驗室診斷與防治

車小蛟 （甘肅省動物疫病預防控制中心 蘭州 730046）

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豬鏈球菌病的實驗室診斷與防治

車小蛟 （甘肅省動物疫病預防控制中心 蘭州 730046）

豬鏈球菌病是一種分布范圍極廣的由鏈球菌感染所引起豬的一類疾病總稱，世界各地均有發(fā)生。隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化程度的不斷提高，由R群鏈球菌中尤其是豬鏈球菌2型引起的豬鏈球菌病越來越多，其主要表現(xiàn)為腦膜炎、心內膜炎、敗血癥、肺炎、關節(jié)炎等甚至猝死，而且可感染人并引起死亡的一種重要的人畜共患病。

筆者對蘭州市某豬場疑為豬鏈球菌病的發(fā)病仔豬，無菌采取患關節(jié)炎豬的關節(jié)液和患急性敗血癥豬的肝、肺、脾及腸系膜淋巴結等病料，進行了病原菌分離鑒定、血清學試驗、動物試驗和藥敏試驗。結果表明：該病病原菌為2型豬鏈球菌；藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，該菌對頭孢菌素、青霉素高度敏感。

1 實驗室診斷

1.1 病原分離培養(yǎng) 無菌采取病料于普通瓊脂綿羊血平板上劃線分離，37℃恒溫箱培養(yǎng) 24h，挑取單個菌落經革蘭氏染色、鏡檢，證實為純培養(yǎng)物，將其轉接于新的普通瓊脂綿羊血平板培養(yǎng)得到純培養(yǎng)物。

1.2 形態(tài)結構、染色特性 革蘭氏染色鏡檢，分離菌為革蘭氏陽性，菌體呈圓形，多呈雙球形或短鏈狀。

1.3 培養(yǎng)特性 分離菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板、普通瓊脂綿羊血平板，麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基、血清肉湯等培養(yǎng)基中，37℃恒溫箱培養(yǎng)24h后，在普通營養(yǎng)瓊脂平板上生長貧瘠，培養(yǎng)24h后僅在劃線處有針尖大小的菌落；在普通瓊脂綿羊血平板生長良好，可見大量圓形、微隆起、表面光滑、邊緣整齊、半透明的菌落，菌落周圍呈α-溶血環(huán)。在麥康凱瓊脂平板上不生長。在血清肉湯中出現(xiàn)混濁，靜置片刻，下部有絮狀沉淀，上液澄清，無菌膜和菌環(huán)。

1.4 生化試驗 對該菌做5%乳糖、海藻糖、菊糖、七葉苷、甘露醇、山梨醇、馬尿酸鈉等糖發(fā)酵試驗和和過氧化氫酶試驗。結果該菌發(fā)酵5%乳糖和海藻糖產酸，發(fā)酵七葉苷，不發(fā)酵菊糖、甘露醇和山梨醇，不水解馬尿酸鈉；過氧化氫酶試驗陰性。

1.5 血清學試驗 將純菌經緩沖肉湯培養(yǎng)12h，通過3000r/min離心10min，PBS洗滌2次，用pH7.2的0.01mol/L PBS制成1:10~1:20倍細菌懸液。取1滴上述細菌懸液與適當?shù)目寡逶跐崈舨Ｆ匣靹?，立即觀察凝集現(xiàn)象，同時，設立細菌懸液對照及血清對照，結果立即可見明顯的凝集現(xiàn)象，但不與1型及其他型抗血清出現(xiàn)凝集。直接挑取細菌菌落與抗血清混勻，也能得到一致結果。陰性對照均未見凝集現(xiàn)象。經血清型鑒定為2型豬鏈球菌。

1.6 動物實驗 隨機取6只18g左右的小白鼠腹腔分別接種分離菌血清肉湯培養(yǎng)物0.2ml，另設4只分別腹腔注射0.2ml血清肉湯作對照。小白鼠于注射后6h開始死亡，至10h全部死亡。死后解剖可見肝、脾、腎腫大，膀胱高度充血，用心血及胸積液涂片革蘭氏染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)有大量單個、成對或短鏈G+球菌。對照組小白鼠未見異常。

1.7 藥敏試驗 采用紙片擴散法對分離純菌進行藥敏試驗，結果表明，對分離菌株表現(xiàn)較高抑菌作用的有頭孢菌素、青霉素、卡那霉素；對土霉素、潔霉素、鏈霉素、慶大霉素等較有抵抗力，有一定的耐藥性。

2 防治措施

首先應該加強對健康豬的免疫。一旦發(fā)病，迅速將病豬和健康豬的隔離，同時根據(jù)實驗室所做的藥敏試驗結果，用頭孢菌素、青霉素等藥物治療。豬鏈球菌具有較強的地域性，即使同一地區(qū)的不同菌株也有明顯的差異，因此在用藥前應做藥敏試驗來確定藥物。鏈球菌的血清型較多，其間的交叉免疫保護作用也不確定，因而徹底根除本病難度較大，重要的是合理選擇用藥，采取綜合的防疫措施。

3 小結與討論

對疑似豬鏈球菌病例，通過病原菌分離鑒定、鏡檢觀察、生化試驗、血清學試驗、動物試驗等一系列試驗，確診為豬鏈球菌病。

豬鏈球菌對各種抗生素敏感，治療上很多藥物都應有療效。但是近年來，由于抗生素的濫用，產生了大量耐藥菌，因此，抗生素也不能有效地治療本病。從藥敏試驗結果可以看出，鏈球菌產生了耐藥性，同時，也證明了致病性鏈球菌菌株存在耐藥性。產生耐藥性的主要原因是養(yǎng)豬生產中濫用抗菌藥物，在一些中小豬場，尤其是一些農戶，只要豬發(fā)燒就用鏈霉素、土霉素等，有的甚至長期在飼料中添加抗菌藥物，使本來極少數(shù)的耐藥菌株得以大量生長繁殖。為防止耐藥菌株的產生，應注意合理使用抗菌藥物。嚴格掌握用藥指征，劑量要夠，療程要適當。對于病因不明的，慎重使用抗菌藥。發(fā)現(xiàn)耐藥菌株感染，應改用對病原菌敏感的藥物或采用聯(lián)合用藥。應間歇或輪流用藥，盡量減少長期用藥。

由于豬鏈球菌是人畜共患病，所以在平時工作中應盡量避免直接接觸發(fā)病豬和病死豬，尤其是在有傷口的情況下要注意做好個人的防護工作。

（2011–01–10）

S858.28

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1007-1733(2011)03-0024-01